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热联合内毒素上调ANGPTs/Tie-2表达诱发肺微血管内皮细胞糖萼降解并导致细胞活性功能异常的研究

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热联合内毒素上调ANGPTs/Tie-2表达诱发肺微血管内皮细胞糖萼降解...

作者：陈加弟暨南大学

学位级别：硕士

目的:观察重症中暑后人肺微血管内皮细胞糖萼结构功能变化、以及该变化与血管内皮功能活性改变的关系。方法:通过热打击联合内毒素制备人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cell,HPMEC)中暑模型:选取细胞浓度... 详细信息

目的:观察重症中暑后人肺微血管内皮细胞糖萼结构功能变化、以及该变化与血管内皮功能活性改变的关系。方法:通过热打击联合内毒素制备人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cell,HPMEC)中暑模型:选取细胞浓度为1x10/ml的HPMEC,分4组,每组8孔,经过常规培养72小时后,分别进行如下预处理:(1)空白对照组(Control组,CON组):常规条件下进行细胞培养,不接受热联合脂多糖(Lipopolysaccharid,LPS)打击;(2)中暑组(Heat Stroke组,HS组):造模前不实施任何预处理;(3)乙酰肝素酶组(Heparanase组,HPSE组):造模前1小时加入含0.2 U/ml HPSE培养液37℃孵育30分钟;(4)普通肝素组(Unfractionated Heparin组,UFH组):造模前12小时加入含10U/ml普通肝素培养液孵育12小时。除CON组外其余各组HPMEC先接受43℃热打击30分钟,随后移至5%CO、37℃孵育箱内,继之以500 ng/ml浓度的LPS刺激12小时。1.内皮糖萼的结构功能、活性变化检测:糖萼含量:通过免疫荧光染色和流式细胞术检测各组HPMEC表面硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparansulfate proteoglycan,HSPG)的表达水平变化;糖萼崩解产物水平:酶联免疫吸附分析(Enzyme-Linked Immune Sorbent Assay,ELISA)测定多配体蛋白聚糖Syndecans-1和硫酸乙酰肝素(heparansulfate,HS)水平(本研究所选取ELISA的目标蛋白基本都是以外分泌为主或者是通过外分泌发挥作用的)。2.HPMEC超微结构、功能及细胞活性检测:电镜观察HPMEC超显微结构改变;HPMEC炎症指标变化及细胞活性检测:ELISA测定:TNF-α、IL-6、v WF及ET-1水平;使用Western Blot方法测定细胞间连接蛋白Occludin表达水平以及粘附蛋白:E-选择素、血管内皮粘附分子-1(Vascular Cell Adhesion Molecule-1,VCAM-1)水平;使用DCFH-DA探针标记活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS),荧光显微镜避光分析内皮细胞中ROS浓度;使用Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡比例。3.血管生成素(angiopoietins,ANGPTs)/内皮细胞酪氨酸激酶型受体-2(Tyrosine kinase Receptor-2,Tie-2)ANGPTs/Tie-2通路相关蛋白和受体的检测:ELISA检测ANGPT-1与ANGPT-2浓度、同时Western Blot检测Tie-2受体表达水平。结果:1.重症中暑导致HPMEC的HSPG含量显著降低,相比于HS组,HPSE组的HSPG减少更严重,而UFH对HSPG减少具有一定抑制作用;中暑细胞Syndecans-1和HS水平出现明显升高,相比于HS组,二者在HPSE组的升高水平更为显著,而UFH组则相对减少。2.通过透射电镜观察,中暑可导致HPMEC出现严重损伤,热打击的三组中HPSE组受损最严重,HS组次之,UFH组则受损较轻;中暑可造成HPMEC凋亡增加,造模的三组中HPSE组的凋亡比例最高,而UFH组的凋亡比例最低;重症中暑可导致HPMEC产生和释放大量的TNF-α、IL-6、v WF及ET-1,其中HPSE组最甚,而UFH对上述蛋白的过度分泌具有抑制作用;重症中暑诱发HPMEC E-选择素和VCAM-1的表达水平明显升高,而HPSE组比HS组升高更为明显,UFH组则低于HS组水平,而Occludin蛋白水平的变化与各组间差异则刚好相反;与此同时,中暑打击下HPMEC细胞中的ROS明显增加,相比于HS组,HPSE组水平最高,而UFH组最低。3.重症中暑可使HPMEC产生大量的ANGPT-1和ANGPT-2,其中ANGPT-2的升高幅度更为明显,在各组ANGPT-2/ANGPT-1比值对比中,呈现HPSE组(29)HS组(29)UFH组(29)CON组的结果,同时造模细胞Tie-2表达也明显升高,HPSE预处理促进Tie-2升高,而UFH预处理缓解这一改变。结论:重症中暑诱发人肺微血管内皮细胞糖萼降解并导致细胞发生氧化损伤和凋亡,进而造成其抑制炎症反应和维持血管通透性的功能障碍,而ANGPTs/Tie-2通路蛋白的表达异常可能是上述现象的重要分子机制。

关键词：重症中暑人肺微血管内皮细胞糖萼血管生成素/内皮细胞酪氨酸激酶型受体-2

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施工企业做好新形势下市场营销工作研究

营销界 2022年第17期 68-70页

作者：陈加弟中交一公局集团有限公司

本文对新形势下施工企业的市场营销策略进行分析，认为施工企业应创新市场营销观念，采取多样化的营销策略，树立良好品牌形象，重视市场公关工作，加强营销部门的建设和管理，对营销人员进行培训，在市场营销工作中进行信息化建设，做... 详细信息

本文对新形势下施工企业的市场营销策略进行分析，认为施工企业应创新市场营销观念，采取多样化的营销策略，树立良好品牌形象，重视市场公关工作，加强营销部门的建设和管理，对营销人员进行培训，在市场营销工作中进行信息化建设，做好信息调研和后期服务工作。

关键词：市场营销施工企业营销策略

血管内皮糖萼在脓毒症急性肺损伤病理机制及诊断治疗中的作用

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解放军医学杂志 2021年第4期46卷 398-403页

作者：陈加弟龚迪易玉虎陈怿暨南大学附属第一医院急诊科广州510632 暨南大学附属第一医院眼科广州510632 暨南大学附属东莞医院重症医学科广东东莞523900

血管内皮糖萼(VEG)是位于血管内皮细胞管腔面细胞膜上的蛋白质-多糖复合物,具有抑炎、抗栓、保护内皮等生理作用。肺毛细血管内富集VEG,糖萼结构功能异常在脓毒症介导的急性肺损伤(ALI)的发生发展中发挥着重要作用。脓毒症时,一方面乙... 详细信息

血管内皮糖萼(VEG)是位于血管内皮细胞管腔面细胞膜上的蛋白质-多糖复合物,具有抑炎、抗栓、保护内皮等生理作用。肺毛细血管内富集VEG,糖萼结构功能异常在脓毒症介导的急性肺损伤(ALI)的发生发展中发挥着重要作用。脓毒症时,一方面乙酰肝素酶被诱导激活,破坏糖萼,从而诱发ALI;另一方面糖萼的及时重建被阻止,肺组织修复被抑制。该文对VEG结构功能受损与脓毒症相关ALI发病的关系,及其在脓毒症相关ALI诊治中的价值和前景进行综述。

关键词：血管内皮糖萼脓毒症急性肺损伤

常规核型分析结合荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤遗传学异常的临床应用价值

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中华医学遗传学杂志 2019年第2期36卷 183-185页

作者：何旭春陈加弟福建卫生职业技术学院福州350101 福建医科大学附属协和医院福建省血液病研究所福建省血液病学重点实验室福州350001

目的探讨联合常规核型分析(conventional cytogenetic analysis,CCA)和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)技术在检测多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)遗传学异常的临床应用价值。方法回顾性分析75例初诊原发MM患者骨髓标本常规核型分析和FISH检测结果,FISH探针包括1q21、RB1、D13S319、IGH与P53。结果 75例MM患者中CCA检测遗传学异常有19例,异常检出率仅为25.3%;FISH检测遗传学异常有52例,异常检出率为69.3%,FISH检测结果经统计学分析在MM患者中1q21、RB1、D13S319、IGH的异常两两存在一定的相关性(P<0.05)。联合CCA和FISH技术共有57例检测出遗传学异常,检出率为76.0%,明显高于单独的CCA检测(P<0.05),同时相比于FISH检测,联合CCA和FISH技术能检测出更多遗传学异常。结论联合CCA和FISH技术可以提高MM遗传学异常检出率,为MM临床诊疗提供更可靠的遗传学预后判断依据。

关键词：多发性骨髓瘤荧光原位杂交常规核型分析异常检出率

近四倍体／四倍体核型的急性髓细胞白血病的遗传学与临床特征初步分析

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中华医学遗传学杂志 2018年第5期35卷 733-736页

作者：何旭春陈加弟福建卫生职业技术学院福州350101 福建医科大学附属协和医院福建省血液病研究所、福建省血液病学重点实验室福州350001

目的探讨近四倍体／四倍体（near-tetraploidy／tetraploidy，NT／T）核型的急性髓性细胞白血病（acute myeloid leukemia，AML）患者的遗传学及临床特征。方法回顾1836例初治原发AML住院患者的细胞遗传学检测结果，对于近四倍体／四倍... 详细信息

目的探讨近四倍体／四倍体（near-tetraploidy／tetraploidy，NT／T）核型的急性髓性细胞白血病（acute myeloid leukemia，AML）患者的遗传学及临床特征。方法回顾1836例初治原发AML住院患者的细胞遗传学检测结果，对于近四倍体／四倍体患者用荧光原位杂交进行验证；分析患者的临床资料，包括性别、年龄、细胞形态学、免疫表型、遗传学、以及疗效等。结果共发现11例近四倍体／四倍体患者，其中男性9例，女性2例，中位数年龄为63岁。细胞形态学特征为原始细胞胞体较大和细胞核轮廓不规则。11例患者CD34均表达阳性；9例患者HLA-DR阳性；10例患者在第一疗程就达到完全缓解；1例患者发生原发耐药，放弃治疗。结论近四倍体／四倍体AML患者以老年男性为主，遗传学与细胞形态学具有独特的特征，预后较复杂核型的AML患者好。

关键词：急性髓性细胞白血病近四倍体/四倍体形态学遗传学

荧光原位杂交在诊断骨髓形态学拟诊的再生障碍性贫血中的应用

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中华医学遗传学杂志 2016年第1期33卷 5-8页

作者：林晓岚陈万紫傅蔷陈加弟黄慧芳福建省血液病研究所、福建省血液病学重点实验室、福建医科大学附属协和医院福州350001

目的探讨采用骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes，MDS）组套探针的荧光原位杂交（fluorescentin situ hybridization，FISH）检测在鉴别诊断再生障碍性贫血（aplastic anemia，AA）与MDS中的临床价值。方法应用针对MDS常... 详细信息

目的探讨采用骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes，MDS）组套探针的荧光原位杂交（fluorescentin situ hybridization，FISH）检测在鉴别诊断再生障碍性贫血（aplastic anemia，AA）与MDS中的临床价值。方法应用针对MDS常见异常的组套探针，对94例形态学拟诊为AA患者的骨髓标本进行FISH检测，检出具有MDS诊断价值的遗传学异常，并比较MDS与AA两组患者临床特征的差异。结果（1）94例AA患者中11例存在遗传学异常，其中8号三体5例，20q缺失和Y缺失各1例；检出具有MDS诊断价值的遗传学异常4例：包括5q缺失3例，其中1例伴有20q缺失；7q缺失1例。（2）遗传学MDS与AA两组在临床特征，如年龄、性别、人院时血常规的中性粒细胞绝对值、血红蛋白与血小板计数等方面的差别均无统计学意义。结论通过FIsH检测发现部分形态学拟诊AA的患者存在具有MDS诊断价值的细胞遗传学异常。

关键词：荧光原位杂交再生障碍性贫血骨髓增生异常综合征 8号染色体三体

初诊弥漫大B细胞淋巴瘤患者骨髓来源抑制性细胞的亚群分布及功能异常分析

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福建医科大学学报 2022年第5期56卷 373-378页

作者：刘静茹陈书铖许凯明陈加弟黄慧芳福建医科大学附属协和医院中心实验室福州350001 福建医科大学医学技术与工程学院福州350004 福建医科大学附属协和医院检验科福州350001

目的探讨初诊的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者外周血和骨髓中骨髓来源抑制性细胞(MDSC)亚群的分布和功能。方法收集50例初诊DLBCL患者和30例健康供者的外周血标本,10例初诊DLBCL患者和10例健康供者的骨髓标本。采用多色流式细胞术检... 详细信息

目的探讨初诊的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者外周血和骨髓中骨髓来源抑制性细胞(MDSC)亚群的分布和功能。方法收集50例初诊DLBCL患者和30例健康供者的外周血标本,10例初诊DLBCL患者和10例健康供者的骨髓标本。采用多色流式细胞术检测上述标本中MDSC两大亚群即单核细胞性MDSC(M-MDSC)和粒细胞性MDSC(G-MDSC)的分布情况。从收集的初诊DLBCL患者和健康供者外周血标本中分别随机选取20例,通过DCFH-DA探针法检测其外周血标本M-MDSC和G-MDSC的活性氧(ROS)水平。结果初诊DLBCL患者外周血M-MDSC比例明显高于健康供者,差别有统计学意义(P=0.001);2组间G-MDSC比较,差别无统计学意义(P=0.770)。初诊DLBCL患者骨髓标本中M-MDSC比例亦高于健康供者,差别有统计学意义(P=0.001);2组间G-MDSC比例比较,差别无统计学意义(P=0.213)。G-MDSC的ROS表达水平明显高于健康供者,差别有统计学意义(P=0.005);2组间M-MDSC的ROS表达水平比较,差别无统计学意义(P=0.099)。结论初诊DLBCL患者的外周血、骨髓中M-MDSC亚群比例的上调和外周血G-MDSC的ROS表达水平增高可能参与构成异常免疫微环境,介导疾病进展过程。

关键词：弥漫大B细胞淋巴瘤骨髓来源抑制性细胞单核细胞性骨髓来源抑制性细胞粒细胞性骨髓来源抑制性细胞活性氧

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一例女性血友病A患者发病机制的探讨

中华医学遗传学杂志 2016年第3期33卷 344-348页

作者：陈加弟林燕芳林晓岚陈万紫傅蔷黄慧芳福建省血液病研究所福建省血液病学重点实验室福建医科大学附属协和医院福州350001

目的探讨1例血友病A（hemophilia A，HA）女性杂合患者患病的机制。方法应用倒位移位聚合酶链反应（inverse shifting—polymerase chain reaction，IS-PCR）检测FⅧ基因缺陷；采用人雄激素受体检测（human androgen receptor，HUMARA a... 详细信息

目的探讨1例血友病A（hemophilia A，HA）女性杂合患者患病的机制。方法应用倒位移位聚合酶链反应（inverse shifting—polymerase chain reaction，IS-PCR）检测FⅧ基因缺陷；采用人雄激素受体检测（human androgen receptor，HUMARA assay）方法检测X染色体是否为非随机性失活；采用G显带法分析外周血细胞核型。结果IS-PCR检测发现该患者FⅧ基因存在第22内含子远端倒位；HUMARA检测发现该患者X染色体为非随机性失活——母源X染色体比父源X染色体活性低，即携带有正常FⅧ基因的母源X染色体比携带有缺陷FⅧ基因的父源X染色体甲基化失活比率更高；G显带核型分析显示先证者染色体核型未见明显异常。结论该血友病A女性患者的患病机制可能是由于X染色体非随机性不平衡失活引起的。

关键词：血友病A FⅧ基因倒位移位聚合酶链反应人雄激素受体检测随机性失活

FISH检测CyclinD1/IgH对鉴别套细胞淋巴瘤与慢性淋巴细胞白血病的作用

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中国实验血液学杂志 2015年第5期23卷 1314-1317页

作者：李国平陈万紫黄慧芳陈加弟林晓岚傅蔷福建医科大学附属第一医院病理科福建福州350005 福建医科大学附属协和医院福建省血液病研究所福建省血液病学重点实验室福建福州350001

目的:探讨采用荧光原位杂交(FISH)技术检测CyclinD1/IgH融合基因在临床上拟诊断为慢性淋巴细胞白血病(CLL)病例中鉴别出套细胞淋巴瘤(MCL)的可行性及其价值。方法:收集拟诊断为CLL病例52例,采用FISH方法检测骨髓细胞CyclinD1/IgH融合基... 详细信息

目的:探讨采用荧光原位杂交(FISH)技术检测CyclinD1/IgH融合基因在临床上拟诊断为慢性淋巴细胞白血病(CLL)病例中鉴别出套细胞淋巴瘤(MCL)的可行性及其价值。方法:收集拟诊断为CLL病例52例,采用FISH方法检测骨髓细胞CyclinD1/IgH融合基因,并比较了MCL与CLL在发病年龄、性别以及白细胞计数与淋巴细胞计数方面的差异,观察了骨髓细胞形态学特征,以及CyclinD1/IgH融合基因的骨髓细胞FISH检测结果与骨髓病理CyclinD1染色的结果。结果:MCL侵犯骨髓时,部分病例骨髓细胞在形态上可与CLL不同,也有形态不典型者,表现为异常成熟小淋巴细胞增多,难以与CLL区分。MCL组与CLL组患者在发病年龄、性别、白细胞计数与淋巴细胞计数等方面均无显著性差别。52例疑似CLL标本中9例最终确诊为MCL,7例骨髓细胞检测到了CyclinD1/IgH融合基因,其中3例初诊时骨髓病理检测到CyclinD1-而FISH方法却检测到了CyclinD1/IgH融合基因。结论:FISH方法检测CyclinD1/IgH融合基因是鉴别诊断CLL与MCL的一种特异、可靠的检测手段。

关键词：荧光原位杂交慢性淋巴细胞白血病套细胞淋巴瘤 CyclinD1/IgH