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河北保定地区黄瓜花叶病毒与马铃薯Y病毒复合侵染叶用莴苣分子鉴定

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中国蔬菜 2024年第5期 69-74页

作者：陈利达李畅李敬蕊吕桂云吴晓蕾宫彬彬高洪波河北农业大学园艺学院农业农村部华北节水农业重点实验室河北省蔬菜产业协同创新中心河北省蔬菜种质创新与利用重点实验室河北保定071000

利用RT-PCR方法对采集自河北保定地区的疑似叶用莴苣病毒病样品进行分子生物学鉴定,并构建系统发育进化树。结果表明,特异性引物CMV和PVY分别扩增得到大小为260、420 bp的单一条带;通过核苷酸序列Blast比对及系统进化树分析,河北保定地... 详细信息

利用RT-PCR方法对采集自河北保定地区的疑似叶用莴苣病毒病样品进行分子生物学鉴定,并构建系统发育进化树。结果表明,特异性引物CMV和PVY分别扩增得到大小为260、420 bp的单一条带;通过核苷酸序列Blast比对及系统进化树分析,河北保定地区叶用莴苣病毒分离物分别与印度番茄CMV分离物(MN514839.1)、印度马铃薯PVY分离物(JX945850.1)聚在同一分支上,同源性分别为95%、92%。本研究首次检测到河北保定地区叶用莴苣病毒病是由CMV与PVY复合侵染所致。

关键词：叶用莴苣黄瓜花叶病毒马铃薯Y病毒复合侵染

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番茄褐色皱纹果病毒分子检测与鉴定

中国蔬菜 2023年第6期 34-40页

作者：王少骅陈利达石延霞谢学文李磊范腾飞李宝聚柴阿丽中国农业科学院蔬菜花卉研究所蔬菜生物育种全国重点实验室北京100081

利用3对番茄褐色皱纹果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)特异性引物对云南红河、宁夏银川、北京顺义疑似病毒病样本进行RT-PCR检测,分别扩增出大小为812、842、1053 bp的特异性条带。对扩增产物进行测序及系统进化分析,发... 详细信息

利用3对番茄褐色皱纹果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)特异性引物对云南红河、宁夏银川、北京顺义疑似病毒病样本进行RT-PCR检测,分别扩增出大小为812、842、1053 bp的特异性条带。对扩增产物进行测序及系统进化分析,发现云南、宁夏、北京的ToBRFV分离物与约旦、意大利、荷兰的ToBRFV分离物聚在同一分支上,亲缘关系较近。致病性结果显示,接种后的番茄植株表现出与田间相同的症状,且在发病组织中检测到病毒ToBRFV。表明来自云南红河、宁夏银川、北京顺义的番茄植株均被ToBRFV侵染。

关键词：番茄褐色皱纹果病毒分子检测 ToBRFV RT-PCR

茄匍柄霉菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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植物病理学报 2021年第4期51卷 618-625页

作者：谢学文陈利达曹金强韩道杰石延霞柴阿丽李磊李宝聚中国农业科学院蔬菜花卉研究所北京100081 宁夏中青农业科技有限公司银川750000

为了准确检测病残体内茄匍柄霉菌(Stemphylium solani)DNA含量在土壤内的动态变化,本研究根据三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列,设计并筛选特异性引物Stem-g7F/Stem-g7R,能从靶标基因组DNA中特异性扩增出大小为150 bp的目的片段。建立... 详细信息

为了准确检测病残体内茄匍柄霉菌(Stemphylium solani)DNA含量在土壤内的动态变化,本研究根据三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列,设计并筛选特异性引物Stem-g7F/Stem-g7R,能从靶标基因组DNA中特异性扩增出大小为150 bp的目的片段。建立的Stemphylium solani实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR, qRT-PCR)检测体系的灵敏度比常规PCR高1 000倍,且特异性良好。标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数为0.992。利用所建立的qRT-PCR方法对病残体进行检测发现,病残体DNA初始拷贝数为3.69×10^(9)拷贝数/g,经过温度27℃、80%湿度下处理30 d病残体DNA含量下降至1.21×10^(6)拷贝数/g,而在温度27℃、20%湿度下含量为1.29×10^(10)拷贝数/g。因此,建立的***的qRT-PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速准确地定量检测病残体***的含量,为番茄匍柄霉叶斑病的早期预防和流行监测提供有效的技术手段。

关键词：茄匍柄霉菌实时荧光定量PCR 湿度病残体

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茄匍柄霉LAMP快速检测体系的建立及应用

农业生物技术学报 2022年第10期30卷 2045-2052页

作者：谢学文刘世程石延霞张胜丰陈利达柴阿丽范腾飞李磊李宝聚中国农业科学院蔬菜花卉研究所徐州市贾汪区泰瑞农业科技有限公司

匍柄霉(Stemphylium solani)是一种重要的植物病原真菌，可侵染多种作物。环介导等温扩增(loopmediated isothermal amplification, LAMP)技术具有简便、准确、快速等突出优点，在病原菌检测领域有广泛应用。本研究以SYBR GreenⅠ为指... 详细信息

匍柄霉(Stemphylium solani)是一种重要的植物病原真菌，可侵染多种作物。环介导等温扩增(loopmediated isothermal amplification, LAMP)技术具有简便、准确、快速等突出优点，在病原菌检测领域有广泛应用。本研究以SYBR GreenⅠ为指示剂，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(glyceraldehyde-2-phosphate dehydrogenase, gpd)为检测靶标基因设计6条引物(2条内引物FIP/BIP, 2条外引物F3/B3,环引物LF25/LB25)进行LAMP扩增，同时通过环引物加速反应，建立了一套茄匍柄霉LAMP快速检测体系。特异性验证结果显示，仅16株茄匍柄霉有阳性扩增，具有较高的特异性。灵敏度检测结果显示，该检测体系灵敏度达2.4 pg/μL，显著高于普通PCR检测技术。环引物加速LAMP反应结果表明，加入环引物能使反应时间缩短至27 min，可有效加速LAMP反应。通过钙黄绿素进行显色反应，在自然光下仅模板为茄匍柄霉的反应液变为绿色，其余反应液均为橙色。采用该体系检测茄匍柄霉接种后番茄(Lycopersicon esculentum)叶片病原菌含量动态变化，接种病原菌12 h时，该体系即有阳性显色反应，接种后颜色随时间推移逐渐加深，与接种病原菌后叶片发病情况的规律相同。该反应结果不借助其他仪器即可观察，环引物加速反应使检测时间进一步缩短至27 min，能够快速、准确反应病原菌含量。该体系在匍柄霉快速检测方面具有较强的优势，可用于病害潜伏、未显症期的快速检测，对及时、科学防治茄匍柄霉叶斑具有重要意义。

关键词：茄匍柄霉环介导等温扩增(LAMP) 快速分子检测

新疆喀什辣椒轻斑驳病毒和黄瓜花叶病毒复合侵染的分子鉴定

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华北农学报 2020年第S01期35卷 332-337页

作者：柴阿丽陈利达许帅帕提古丽·艾斯木托拉王利丽石延霞谢学文李磊李宝聚中国农业科学院蔬菜花卉研究所北京100081 新疆农业科学院园艺作物研究所新疆乌鲁木齐830091

2018-2019年,在新疆喀什地区调查时发现部分种植的辣椒植株上心叶发黄皱缩、卷曲,个别植株叶片呈现斑驳花叶状。为了明确引起新疆喀什辣椒病毒病的病毒种类,提取典型症状样品的总RNA,反转录得到cDNA,分别用辣椒轻斑驳病毒和黄瓜花叶病... 详细信息

2018-2019年,在新疆喀什地区调查时发现部分种植的辣椒植株上心叶发黄皱缩、卷曲,个别植株叶片呈现斑驳花叶状。为了明确引起新疆喀什辣椒病毒病的病毒种类,提取典型症状样品的总RNA,反转录得到cDNA,分别用辣椒轻斑驳病毒和黄瓜花叶病毒特异性引物进行RT-PCR检测,CMV和PMMoV特异引物分别扩增得到约735,472 bp的特异条带,阴性对照未扩增目的条带,核苷酸序列比对发现,分别与韩国西葫芦CMV分离物(GU327368.1)和日本辣椒PMMoV分离物(AB276030.1)序列同源性最高为95%,99%,结果表明,喀什地区辣椒疑似病毒病样本被CMV与PMMoV复合侵染。

关键词：辣椒黄瓜花叶病毒辣椒轻斑驳病毒复合侵染 RT-PCR

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肺移植患者血液管理研究进展

临床输血与检验 2021年第3期23卷 404-408页

作者：王文静赵儒王琪陈利达陈文慧芦宏凯中日友好医院北京100029

肺移植患者常由于贫血、手术复杂程度高、手术创面大失血多等原因需要输注血液制品。输血在改善患者携氧功能和纠正凝血功能障碍的同时,也增加了感染、原发性移植物失功(PGD)、输血相关急性肺损伤(TRALI)和输血相关循环超负荷(TACO)等... 详细信息

肺移植患者常由于贫血、手术复杂程度高、手术创面大失血多等原因需要输注血液制品。输血在改善患者携氧功能和纠正凝血功能障碍的同时,也增加了感染、原发性移植物失功(PGD)、输血相关急性肺损伤(TRALI)和输血相关循环超负荷(TACO)等风险。本文从术前输血评估、贫血干预、术中出凝血监测及输血治疗、术后相关并发症监测等方面,总结了肺移植患者血液管理的相关措施,提出多学科联合实施患者血液管理,为临床提供参考。

关键词：患者血液管理肺移植体外膜肺氧合多学科

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基于Excel的库存控制仿真的实现

浙江科技学院学报 2006年第3期18卷 210-213页

作者：曹玉华张玲彭建良陈利达浙江科技学院经济与管理学院杭州310023

以库存控制中的库存成本最小为目标,对一个多周期提前订货有折扣的库存系统进行计算机仿真分析。利用操作简单、容易实现的Excel的函数功能,开发了库存管理系统的计算机仿真系统,并以简单开发实例证明计算机仿真的实现过程。利用计算机... 详细信息

以库存控制中的库存成本最小为目标,对一个多周期提前订货有折扣的库存系统进行计算机仿真分析。利用操作简单、容易实现的Excel的函数功能,开发了库存管理系统的计算机仿真系统,并以简单开发实例证明计算机仿真的实现过程。利用计算机进行库存控制仿真时,首先能够考虑现实中的多种不确定因素,进行模型的不断改变,方便地对多个库存管理策略进行系统仿真,再经过系统优化与分析,最后获得了总成本最低时的最优化库存策略。

关键词：库存成本库存控制模型计算机仿真 Excel

2007-2010四年间鲍曼不动杆菌耐药性变迁及对亚胺培南耐药的机制研究

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中国微生态学杂志 2011年第12期23卷 1110-1114页

作者：陈利达黄彬周晓玲陈树林中山大学中山大学附属第一医院检验医学部广东广州510080 东莞市人民医院检验科广东东莞523018

目的研究2007-2010四年间中山大学附属第一医院临床分离的鲍曼不动杆菌的耐药性迁移情况和耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌(IRAB)的耐药机制,为临床抗感染治疗提供依据。方法采用VITEK 2型全自动微生物检测系统对细菌进行鉴定及药敏分析;用PC... 详细信息

目的研究2007-2010四年间中山大学附属第一医院临床分离的鲍曼不动杆菌的耐药性迁移情况和耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌(IRAB)的耐药机制,为临床抗感染治疗提供依据。方法采用VITEK 2型全自动微生物检测系统对细菌进行鉴定及药敏分析;用PCR方法检测碳青霉烯酶基因blaOXA-51、blaOXA-23、blaOXA-24和blaOXA-58。结果 2007-2010四年间分离鲍曼不动杆菌811株,耐药率逐年上升,其对头孢哌酮/舒巴坦、美罗培南、头孢吡肟、亚胺培南和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率上升明显,如对亚胺培南的耐药率自2007-2010年分别为13.1%、26.0%、44.3%和59.5%。811株鲍曼不动杆菌中IRAB有311株,IRAB对抗生素的耐药率明显升高,但四年间的耐药率变化并不明显。对IRAB敏感的抗生素以阿米卡星为首,其次为头孢哌酮/舒巴坦,但头孢哌酮/舒巴坦的敏感率逐年下降。从311株IRAB中随机抽取140株,检出blaOXA-51基因阳性125株(89.3%),blaOXA-23基因阳性29株(20.7%),blaOXA-24基因阳性3株(2.14%),blaOXA-58基因阳性22株(15.7%)。结论鲍曼不动杆菌的耐药性逐年升高,以阿米卡星与头孢哌酮/舒巴坦联合应用为有效的治疗方法,产碳青霉烯酶是IRAB的主要耐药机制。

关键词：鲍曼不动杆菌亚胺培南耐药性

铜绿假单胞菌耐药性及质粒介导的耐环丙沙星分子机制研究

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中华医院感染学杂志 2012年第16期22卷 3444-3447页

作者：陈茶黄彬陈利达吴强贵陈树林李有强林冬玲张妮广东省中医院检验医学部广东广州510120 中山大学附属第一医院检验医学部广东广州510080 广州医学院医学检验系广东广州510000

目的研究临床分离铜绿假单胞菌的耐药性和质粒介导铜绿假单胞菌对环丙沙星耐药的分子机制。方法采用VITEK-2型全自动微生物检测系统鉴定细菌,用K-B法测定铜绿假单胞菌对24种常用抗菌药物的药敏率,用聚合酶链反应检测喹诺酮类耐药基因,包... 详细信息

目的研究临床分离铜绿假单胞菌的耐药性和质粒介导铜绿假单胞菌对环丙沙星耐药的分子机制。方法采用VITEK-2型全自动微生物检测系统鉴定细菌,用K-B法测定铜绿假单胞菌对24种常用抗菌药物的药敏率,用聚合酶链反应检测喹诺酮类耐药基因,包括qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr。结果 423株铜绿假单胞菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率均为23.2%,对第一、三代头孢菌素类药物的耐药率>49.2%(除头孢他啶为22.7%),对氨基糖苷类药物庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星的耐药率分别为17.5%、17.5%和13.0%,对青霉素类药物的耐药率>40.4%(除哌拉西林为26.2%),对含β-内酰胺酶抑制剂复合物的耐药率差异较大,哌拉西林/他唑巴坦为17.0%,而氨苄西林/舒巴坦为98.6%;对碳青霉烯类药物亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为24.6%和26.0%;127株耐环丙沙星铜绿假单胞菌的耐药性明显升高,对左氧氟沙星的耐药率为86.6%,对第三代头孢菌素的耐药率上升至>61.4%,对第四代头孢菌素头孢吡肟的耐药率由20.3%上升至62.2%,对含β-内酰胺酶抑制剂复合物的耐药率从17.0%上升至>49.6%,对氨基糖苷类药物庆大霉素、妥布霉素的耐药率上升至>64.6%,对阿米卡星的耐药率由13.0%上升至48.8%;耐环丙沙星铜绿假单胞菌中未检出qnrS基因和qnrC基因,qnrA、qnrB、qnrD、qepA和aac(6′)-Ib-cr的阳性率分别为31.2%、87.5%、15.6%、10.9%、39.1%。结论临床分离的耐环丙沙星铜绿假单胞菌携带qnrA、qnrB、qnrD、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因,未检出qnrS、qnrC基因;qnr、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因是质粒介导的铜绿假单胞菌耐环丙沙星的主要机制。

关键词：铜绿假单胞菌环丙沙星耐药机制