茄匍柄霉LAMP快速检测体系的建立及应用
Establishment and Application of LAMP Rapid Detection Assay for Stephylium solani作者机构：中国农业科学院蔬菜花卉研究所 徐州市贾汪区泰瑞农业科技有限公司
出 版 物：《农业生物技术学报》 (Journal of Agricultural Biotechnology)
年 卷 期：2022年第30卷第10期
页 面：2045-2052页
核心收录：
学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学]
基 金：国家重点研发计划(2020YFD1000300) 宁夏回族自治区重点研发计划(2021BBF03002) 国家大宗蔬菜产业技术体系(CRS-25) 中国农业科学院创新工程项目(CAAS-ASTIP-IVFCAAS) 农业部园艺作物生物学与种质创制重点实验室项目
主 题：茄匍柄霉 环介导等温扩增(LAMP) 快速分子检测
摘 要：匍柄霉(Stemphylium solani)是一种重要的植物病原真菌，可侵染多种作物。环介导等温扩增(loopmediated isothermal amplification, LAMP)技术具有简便、准确、快速等突出优点，在病原菌检测领域有广泛应用。本研究以SYBR GreenⅠ为指示剂，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(glyceraldehyde-2-phosphate dehydrogenase, gpd)为检测靶标基因设计6条引物(2条内引物FIP/BIP, 2条外引物F3/B3,环引物LF25/LB25)进行LAMP扩增，同时通过环引物加速反应，建立了一套茄匍柄霉LAMP快速检测体系。特异性验证结果显示，仅16株茄匍柄霉有阳性扩增，具有较高的特异性。灵敏度检测结果显示，该检测体系灵敏度达2.4 pg/μL，显著高于普通PCR检测技术。环引物加速LAMP反应结果表明，加入环引物能使反应时间缩短至27 min，可有效加速LAMP反应。通过钙黄绿素进行显色反应，在自然光下仅模板为茄匍柄霉的反应液变为绿色，其余反应液均为橙色。采用该体系检测茄匍柄霉接种后番茄(Lycopersicon esculentum)叶片病原菌含量动态变化，接种病原菌12 h时，该体系即有阳性显色反应，接种后颜色随时间推移逐渐加深，与接种病原菌后叶片发病情况的规律相同。该反应结果不借助其他仪器即可观察，环引物加速反应使检测时间进一步缩短至27 min，能够快速、准确反应病原菌含量。该体系在匍柄霉快速检测方面具有较强的优势，可用于病害潜伏、未显症期的快速检测，对及时、科学防治茄匍柄霉叶斑具有重要意义。
同方期刊数据库