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尿激酶原激活是其催化纤溶酶原激活的限速步骤(英文)

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南京大学学报（自然科学版） 2005年第5期41卷 489-495页

作者：陈于红张菁刘建宁南京大学分子医学研究所

尿激酶原催化纤溶酶原的激活包括3个反应:(1)尿激酶原内在酶活性催化纤溶酶原转化为纤溶酶;(2)纤溶酶激活尿激酶原变成尿激酶;(3)尿激酶激活纤溶酶原,所以一直以来人们对尿激酶原激活纤溶酶原的过程知之甚少.研究发现EACA可以抑制尿激... 详细信息

尿激酶原催化纤溶酶原的激活包括3个反应:(1)尿激酶原内在酶活性催化纤溶酶原转化为纤溶酶;(2)纤溶酶激活尿激酶原变成尿激酶;(3)尿激酶激活纤溶酶原,所以一直以来人们对尿激酶原激活纤溶酶原的过程知之甚少.研究发现EACA可以抑制尿激酶原催化的纤溶酶原激活.通过EACA对上述3个反应的影响进行逐个分析,观察到在EACA浓度为2 .0 mmol/L时,尿激酶原内在酶活性催化纤溶酶原激活的反应速度提高了4 .5倍,尿激酶激活纤溶酶原的反应速度提高了6倍.相反地,纤溶酶激活尿激酶原变成尿激酶的反应被抑制了50 %,此反应决定了EACA对尿激酶原催化纤溶酶原激活反应的抑制作用.该结果提示尿激酶原催化纤溶酶原激活反应的限速步骤是纤溶酶激活尿激酶原变成尿激酶,缘于纤溶酶和尿激酶原的赖氨酸结合位点的相互作用.

关键词：尿激酶原尿激酶纤溶酶原激活赖氨酸结合位点 EACA

T7 启动子作用下人尿激酶原 cDNA 在大肠杆菌中的高效表达及分离纯化

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生物工程学报 1997年第4期13卷 362-367页

作者：彭贵洪马忠薛宇鸣陈于红朱德煦南京大学生物化学系南京大学医药生物技术国家重点实验室

化学合成的人尿激酶原ｃＤＮＡ克隆在表达质粒ｐＥＴ１１ｄ中，在Ｔ７启动子的作用下，经０１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得表达。其表达量占菌体总蛋白的１５％，表达产物以无活性的包... 详细信息

化学合成的人尿激酶原ｃＤＮＡ克隆在表达质粒ｐＥＴ１１ｄ中，在Ｔ７启动子的作用下，经０１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得表达。其表达量占菌体总蛋白的１５％，表达产物以无活性的包涵体形式存在。经体外变复性，Ｚｎ２＋选择性沉淀，抗体亲和柱层析，及Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ亲和吸附，所表达的人尿激酶原被纯化为单一条带，其比活约１１００００ＩＵ／ｍｇ。

关键词：人尿激酶原高效表达分离纯化 T7启动子

tPA Kringle-2结构域基因的合成及其在大肠杆菌中表达

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中国科学（B辑） 1993年第6期23卷 604-611页

作者：华子春付和亮陈于红余瑞荣王进朱德煦南京大学生物化学系南京210008

本文用固相磷酸三酯法合成了组织型纤溶酶原激活剂(tPA)174-262片段(Kringle-2结构域)对应的DNA序列。利用PIN Ⅲ OmpA2表达质粒的信号序列和Plpp-lac启动子在大肠杆菌中表达了tPA Kringle-2。约2/3的表达产物分泌在大肠杆菌的周间质中... 详细信息

本文用固相磷酸三酯法合成了组织型纤溶酶原激活剂(tPA)174-262片段(Kringle-2结构域)对应的DNA序列。利用PIN Ⅲ OmpA2表达质粒的信号序列和Plpp-lac启动子在大肠杆菌中表达了tPA Kringle-2。约2/3的表达产物分泌在大肠杆菌的周间质中。经硫酸铵盐析,Lysine-Sepharose亲和层析和FPLC-MONOQ离子交换层析等3步纯化后其氨基酸组成和tPA 174-262片段的组成一致。放射结合分析证明重组表达的tPA Kringle-2具有纤维蛋白结合活性。

关键词：环饼结构域 tPA 大肠杆菌基因表达

人纤溶酶原Kringle 5基因的克隆、表达及产物纯化和性质鉴定

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南京大学学报（自然科学版） 2001年第2期37卷 218-222页

作者：陈浩陈于红张菁刘建宁朱德煦南京大学分子医学研究所南京大学医药生物技术国家重点实验室南京210093

根据人纤溶酶原的cDNA序列 ,利用PCR技术获得人纤溶酶原kringle 5结构域的基因 ,并将其克隆至表达质粒 pET2 5b(+)中 .重组载体 pET2 5b(+) /kringle 5转化至大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导表达 ,在 12kD处可见明显的表达条带 ,表达... 详细信息

根据人纤溶酶原的cDNA序列 ,利用PCR技术获得人纤溶酶原kringle 5结构域的基因 ,并将其克隆至表达质粒 pET2 5b(+)中 .重组载体 pET2 5b(+) /kringle 5转化至大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导表达 ,在 12kD处可见明显的表达条带 ,表达产物大部分以无活性的包涵体形式存在 .包涵体经过体外变复性 ,SP SepharoseFF离子交换柱一步纯化 ,15%SDS PAGE鉴定考染一条带 ,纯度达 95%以上 .所得到的目标蛋白能明显的抑制bFGF诱导的牛毛细血管内皮细胞增生 .

关键词：血管生成抑制素 kringle5 包涵体人纤溶酶原基因克隆表达纯化鉴定肿瘤治疗

argU基因增强人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在大肠杆菌中表达的研究

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科学通报 1995年第2期40卷 175-178页

作者：华子春王惠生董晨陈于红朱德煦南京大学生物化学系

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是由127个氨基酸残基组成的糖蛋白.GM-CSF为粒细胞和巨噬细胞发育、分化、增殖所必需,也是调节成熟的粒细胞和巨噬细胞的生物功能所必需的.GM-CSF重要的生理功能使之成为髓性再生障碍、粒白细胞低... 详细信息

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是由127个氨基酸残基组成的糖蛋白.GM-CSF为粒细胞和巨噬细胞发育、分化、增殖所必需,也是调节成熟的粒细胞和巨噬细胞的生物功能所必需的.GM-CSF重要的生理功能使之成为髓性再生障碍、粒白细胞低下、化学治疗或放射治疗引起的骨髓造血抑制等病症的潜在治疗物.

关键词：粒细胞巨噬细胞 argU基因大肠杆菌 GM-CSF

大肠杆菌rpoH基因的克隆、表达及其产物的纯化

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生物化学与生物物理学报 1996年第2期28卷 170-176页

作者：陈于红华子春董晨马忠朱德煦南京大学生物化学系

本文用ＰＣＲ方法获得大肠杆菌热休克蛋白转录因子σ３２的编码基因ｒｐｏＨ，并克隆在含有ｔａｃ启动子的表达载体ｐＵＨＥ中，经ＩＰＴＧ诱导，在大肠杆菌中表达了Ｃ端融合有６个寡聚组氨酸的σ３２。表达产物经金属螯合层析一步纯化... 详细信息

本文用ＰＣＲ方法获得大肠杆菌热休克蛋白转录因子σ３２的编码基因ｒｐｏＨ，并克隆在含有ｔａｃ启动子的表达载体ｐＵＨＥ中，经ＩＰＴＧ诱导，在大肠杆菌中表达了Ｃ端融合有６个寡聚组氨酸的σ３２。表达产物经金属螯合层析一步纯化，达到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染一条带纯度，氨基酸组成分析及Ｎ端序列分析结果与文献报道一致。３５Ｓ细胞内参入实验表明：即使在较低的温度下，表达产物σ３２（Ｈｉｓ）６也能导致热休克蛋白如ＧｒｏＥｌ、ＤｎａＫ、Ｈｔｐ的大量合成．

关键词： σ32 热休克蛋白基因表达金属螯合层析

重组人尿激酶原基因的克隆及工程菌的构建与鉴定

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南京大学学报（自然科学版） 2001年第4期37卷 401-406页

作者：陈于红张菁朱镇华傅一工刘建宁南京大学分子医学研究所南京210093 Landing Biotech Inc Boston

利用RT PCR技术 ,从人脐带静脉上皮细胞中克隆重组人尿激酶原基因 ,用表达质粒pET2 9a构建了重组质粒 pET2 9a/ prouk ,并转化至大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,作为工程菌 .经IPTG诱导表达 ,在 4 6kDa处有一明显表达条带 ,表达量为约占菌体总... 详细信息

利用RT PCR技术 ,从人脐带静脉上皮细胞中克隆重组人尿激酶原基因 ,用表达质粒pET2 9a构建了重组质粒 pET2 9a/ prouk ,并转化至大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,作为工程菌 .经IPTG诱导表达 ,在 4 6kDa处有一明显表达条带 ,表达量为约占菌体总蛋白的 2 0 % .

关键词：重组人尿激酶原基因工程菌质粒稳定性表达稳定性基因克隆菌株表达

人尿激酶原（pro－urokinase）基因在大肠杆菌中的高效表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1995年第1期27卷 17-22页

作者：马忠华子春董晨夏炎陈于红朱德煦南京大学医药生物技术国家重点实验室南京大学生物化学系

本文用ＰＣＲ方法对人工合成的尿激酶原。ＤＮＡ基因５’端进行改造，将之克隆到表达载体ｐＫＫ２３３－２中，转化大肠杆菌ＪＡ２２１，经ＩＰＴＧ诱导，获得了占总菌体蛋白１５％的高表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ... 详细信息

本文用ＰＣＲ方法对人工合成的尿激酶原。ＤＮＡ基因５’端进行改造，将之克隆到表达载体ｐＫＫ２３３－２中，转化大肠杆菌ＪＡ２２１，经ＩＰＴＧ诱导，获得了占总菌体蛋白１５％的高表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示表达产物主要为单链尿激酶，并且在菌体内基本上以无活性的包含体形式存在。经体外交复性，从１升培养基中可获得３０００００单位的活性尿激酶原。

关键词：尿激酶原纤溶作用包含体

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重组蛋白质纯化技术

中国生物工程杂志 2002年第5期22卷 87-92页

作者：陈浩陈于红朱德煦刘建宁南京大学分子医学研究所医药生物技术国家重点实验室南京210093

90年代以来 ,基因重组技术得到很大的发展 ,基因工程产品的分离纯化的成本约占其全部成本的 6 0 %～ 80 %,因此重组蛋白的分离纯化技术越来越重要。着重介绍了扩张柱床吸附层析技术 ,径向膜层析技术 ,灌注层析技术 ,液液萃取技术 ,置换... 详细信息

90年代以来 ,基因重组技术得到很大的发展 ,基因工程产品的分离纯化的成本约占其全部成本的 6 0 %～ 80 %,因此重组蛋白的分离纯化技术越来越重要。着重介绍了扩张柱床吸附层析技术 ,径向膜层析技术 ,灌注层析技术 ,液液萃取技术 ,置换层析技术和金属螯合亲和层析技术近年来进展情况以及它们的优缺点和应用范围。

关键词：重组蛋白质纯化技术分离层析色谱