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作者：陆松花扬州大学

学位级别：硕士

胃癌是高度危害人类健康的恶性肿瘤,其致死率位居所有肿瘤致死率的第二位。我国是胃癌高发国家,每年约有17万人死于胃癌,占消化系统肿瘤死亡人数的50%以上,临床治疗常以手术加术后放化疗为主。由于早期临床症状不明显,致早期诊治率较低... 详细信息

胃癌是高度危害人类健康的恶性肿瘤,其致死率位居所有肿瘤致死率的第二位。我国是胃癌高发国家,每年约有17万人死于胃癌,占消化系统肿瘤死亡人数的50%以上,临床治疗常以手术加术后放化疗为主。由于早期临床症状不明显,致早期诊治率较低;又因胃癌肿瘤细胞侵袭转移能力强,使得复发转移率较高,预后较差。胃癌的发生发展与癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。抑癌基因乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂(mammary serpin,maspin)在肿瘤细胞增殖、粘附、迁移和凋亡中起关键作用。因此,抑癌基因maspin很有可能成为治疗胃癌的潜在靶点。南蛇藤(Celastrus orbiculatus Thunb.)又名过山风、降龙草、黄藤等,始载于清代《植物名实图考》,其(藤)茎、根、叶、果实、种子均可入药。属于卫矛科南蛇藤属植物,在我国分布较为广泛,主要用于抗炎镇痛、活血消肿、祛风解毒等。课题组前期研究发现,南蛇藤茎提取物(Celastrus Orbiculatus Extracts,COE)具有抑制肿瘤细胞的迁移侵袭与增殖,促进肿瘤细胞凋亡等显著抗肿瘤的能力。本研究构建了消减抑癌基因maspin表达的人胃癌MGC-803细胞,初步探索了 COE通过maspin促进人胃癌细胞凋亡的作用及其分子机制。加入不同浓度的南蛇藤提取物后,与对照组相比,一定浓度范围内(20、40、80μg/mL)的COE可以增加maspin的表达,并呈浓度依赖性,促进了肿瘤细胞凋亡。其分子机制,可能与B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl2)家族、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(casepase)蛋白以及磷脂酰肌醇-3 激酶/蛋白激酶 B(phosphatidyl-inositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号通路相关。本研究共分为三部分。第一部分人胃癌组织样本中maspiin的表达及人胃癌MGC-803/maspin-细胞株的构建目的:观察人胃癌组织样本中maspin的表达,构建消减maspin表达的人胃癌MGC-803细胞模型。方法:利用免疫组化方法检测人胃癌组织样本中maspin的表达水平。体外培养人胃癌细胞MGC-803至对数期,利用RNAi技术,将maspin siRNA基因整合入MGC-803细胞DNA,使胃癌细胞MGC-803中maspin沉默表达,同时设立野生型细胞组及阴性对照组。转染24 h后,收集人胃癌MGC-803细胞,提取总蛋白和总RNA,分别利用western blot法和qRT-PCR技术,检测细胞中MASPIN蛋白和RNA的表达情况。结果:MASPIN蛋白表达于胃间质及非肿瘤胃腺组织的胞浆及胞膜中,在胃癌细胞中表达量降低。转染24h后,Western blot结果显示,与野生型细胞及阴性对照组相比,转染maspin siRNA的人胃癌细胞MGC-803细胞中,MASPIN的蛋白表达量显著减少。qRT-PCR结果也显示,与野生型对照组及阴性对照组相比,转染maspin siRNA的人胃癌细胞MGC-803细胞中maspin的RNA表达水平显著减少。结论:胃癌组织样本中MASPIN表达量降低。成功构建人胃癌MGC-803/maspin-细胞。第二部分南蛇藤提取物对人胃癌MGC-803/maspin-细胞增殖和凋亡的影响目的:研究南蛇藤提取物(Celastrusorbiculatus extracts,COE)对人胃癌MGC-803/maspin-细胞凋亡及增殖的影响。方法:对数期人胃癌MGC-803/maspin-细胞,加入不同浓度的COE(10,20,40,80,160,320 μg/mL)。同时设立阴性对照组、不加药野生型对照组和阳性对照组(加入32μg/mL的5-Fu)。倒置显微镜观察MGC-803/maspin-细胞形态变化;透射电镜观察药物对细胞超微结构的影响。MTT法检测不同浓度COE对人胃癌MGC-803/maspin-细胞增殖的抑制作用;以TUNEL实验结合流式细胞术检测不同浓度COE对人胃癌MGC-803/maspin-细胞凋亡的改变;JC-1实验检测药物对MGC-803/maspin-线粒体膜电位的改变。Transwell侵袭实验检测不同浓度COE作用后,细胞侵袭能力的变化。Transwell迁移实验和细胞划痕实验,检测不同浓度COE对人胃癌MGC-803/maspin-迁移能力的影响。结果:抑癌基因maspin沉默表达后,人胃癌MGC-803细胞的凋亡减少,增殖和迁移侵袭能力增强。不同浓度的COE作用后,MASPIN的表达水平增加,呈明显的浓度依赖性(P<0.05

关键词： maspin RNAi 消减表达胃癌南蛇藤提取物 maspin 凋亡增殖侵袭南蛇藤提取物凋亡 Bcl-2 casepase-3 信号通路

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南蛇藤提取物通过调控基质金属蛋白酶组及其抑制因子抑制人胃癌SGC-7901细胞侵袭转移的研究

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中草药 2016年第8期47卷 1345-1350页

作者：王海波顾昊赵雪煜冯俊钱亚云杨林金凤史有阳陆松花刘延庆国家中医药管理局胃癌毒邪论治重点研究室江苏扬州225001 扬州大学-扬州市肿瘤研究所江苏扬州225001 扬州大学肿瘤防治重点实验室江苏扬州225001 扬州大学医药研究所江苏扬州225001

目的探讨南蛇藤提取物(COE)对人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和转移的影响及其分子机制。方法 MTT法检测COE对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;Transwell小室实验检测COE对SGC-7901细胞侵袭和转移能力的影响。Western blotting检测经COE作用后... 详细信息

目的探讨南蛇藤提取物(COE)对人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和转移的影响及其分子机制。方法 MTT法检测COE对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;Transwell小室实验检测COE对SGC-7901细胞侵袭和转移能力的影响。Western blotting检测经COE作用后的SGC-7901细胞中金属基质蛋白酶(MMPs)MMP2、MMP9和金属基质蛋白酶抑制因子(TIMPs)TIMP1、TIMP3的蛋白水平。RT-PCR检测经COE作用后的SGC-7901细胞中MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP3的m RNA表达情况。结果 Transwell实验显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞穿膜数明显减少并呈一定的浓度依赖性。Western blotting结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞,MMP2、MMP9蛋白的表达水平明显降低,而TIMP1、TIMP3蛋白表达水平明显上调。RT-PCR结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞中MMP2和MMP9的m RNA水平有轻微升高趋势,而TIMP1和TIMP3的m RNA水平明显大幅上调(P<0.001)。结论 COE能明显抑制人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和迁移,其机制可能与下调MMP2、MMP9蛋白水平直接相关。而其作用的实现,很可能是通过直接上调TIMP1和TIMP3的m RNA转录水平从而提高TIMPs蛋白表达水平实现的。

关键词：南蛇藤胃癌金属基质蛋白酶金属基质蛋白酶抑制因子侵袭迁移

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中西医结合治疗后循环缺血性眩晕的疗效及安全性评价

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2021年第9期 238-238,241页

作者：陆松花启东市中医院老年病科南通南通226200

以后循环缺血性眩晕患者为研究对象,分析中西医结合治疗模式的应用价值。方法:选择我院于2018年12月—2020年7月间收治的82例后循环缺血性眩晕患者,经随机数字表法平均分组后,对照组患者单纯接受西医治疗(盐酸氟桂利嗪+阿司匹林),实验... 详细信息

以后循环缺血性眩晕患者为研究对象,分析中西医结合治疗模式的应用价值。方法:选择我院于2018年12月—2020年7月间收治的82例后循环缺血性眩晕患者,经随机数字表法平均分组后,对照组患者单纯接受西医治疗(盐酸氟桂利嗪+阿司匹林),实验组患者则在西药治疗的基础上联合使用丹参川芎嗪治疗,总结中西医联合治疗方法的优势。结果:两组患者的治疗总有效率比较,实验组达到了97.56%(40/41),显著高于对照组的78.05%(32/41),数据差异显著(P0.05)。两组患者的头部血运检测结果显示,实验组显著优于对照组(P<0.05)。结论:在后循环缺血性眩晕患者临床治疗中,中西医结合治疗方法具有更满意的治疗效果,且药物安全性高,满足临床治疗要求,值得推广。

关键词：后循环缺血性眩晕中西医结合临床疗效安全性

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南蛇藤提取物对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化的影响

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世界科学技术-中医药现代化 2014年第12期16卷 2647-2651页

作者：钱亚云金凤曹玲史有阳陆松花姜馨吉兰芳严妍李丹雍军刘延庆扬州大学医学院扬州225009

目的:结合体内外实验研究南蛇藤提取物对人肝癌细胞Hep G2上皮间质转化的作用及分子机制。方法:取对数生长期Hep G2细胞,除对照组外,分别给予南蛇藤提取物10、20、40、80、160μg·m L-1培养,采用Western Blotting法检测上皮间质转化(E... 详细信息

目的:结合体内外实验研究南蛇藤提取物对人肝癌细胞Hep G2上皮间质转化的作用及分子机制。方法:取对数生长期Hep G2细胞,除对照组外,分别给予南蛇藤提取物10、20、40、80、160μg·m L-1培养,采用Western Blotting法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达水平;斑马鱼胚胎,于受精后48 h开始给药,正常组给予E3缓冲液,DMSO组为含1%DMSO的E3缓冲液,南蛇藤组各药物浓度分别为10、20、40、80、160μg·m L-1;给药24 h后,以Western Blotting法检测m TOR信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,南蛇藤提取物各浓度组明显增加E-cadherin的表达量,降低vimentin和m TOR信号通路相关蛋白的表达水平。结论:南蛇藤提取物能在一定程度上逆转人肝癌细胞EMT,其分子机制可能与m TOR信号通路相关,m TOR可作为临床治疗肝癌的新靶点。

关键词：南蛇藤肝癌上皮间质转化斑马鱼信号通路

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微RNA在肝癌中的研究进展

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医学综述 2016年第8期22卷 1484-1488页

作者：陆松花钱亚云扬州大学医学院江苏扬州225009 扬州大学医药研究所江苏扬州225001

肝细胞癌(肝癌)的发展经过多个步骤,涉及到遗传和表观遗传变化。除遗传和表观遗传机制,微RNA(miRNA)通过肿瘤相关-基因的转录后调节在肝癌发生中起重要作用。miRNA是一类内源性非编码RNA,在肝癌中具有癌基因、抑癌基因、肿瘤干细胞以及... 详细信息

肝细胞癌(肝癌)的发展经过多个步骤,涉及到遗传和表观遗传变化。除遗传和表观遗传机制,微RNA(miRNA)通过肿瘤相关-基因的转录后调节在肝癌发生中起重要作用。miRNA是一类内源性非编码RNA,在肝癌中具有癌基因、抑癌基因、肿瘤干细胞以及肿瘤转移调节器的作用,与肝癌的发生、发展、治疗及预后等密切联系。探究miRNA在肝癌及其微环境的作用,将会为肝癌发生、发展以及治疗等带来巨大的影响,为肝癌的治疗提供新的靶向目标。

关键词：肝癌微RNA 基因调控

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南蛇藤提取物通过Cofilin 1调控细胞骨架重组抑制人胃癌细胞上皮间质转化(EMT)的研究

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时珍国医国药 2016年第2期27卷 303-307页

作者：王海波钱亚云朱耀东顾昊陈珏王萱怡金凤史有阳赵敏陆松花刘延庆扬州大学-扬州市肿瘤研究所扬州大学肿瘤防治重点实验室扬州大学医药研究所江苏扬州225001

目的研究南蛇藤乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extracts,COE)对TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞EMT的影响。方法 TGF-β1诱导人胃癌SGC-7901细胞造模,设阴性对照组、模型组和不同浓度COE实验组。MTT法检测细胞毒作用和生长抑... 详细信息

目的研究南蛇藤乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extracts,COE)对TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞EMT的影响。方法 TGF-β1诱导人胃癌SGC-7901细胞造模,设阴性对照组、模型组和不同浓度COE实验组。MTT法检测细胞毒作用和生长抑制作用;Transwell小室法检测细胞的侵袭和转移能力;Western blot法检测细胞EMT生物标志分子(biomarker)E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白和相关的丝切蛋白1(Cofilin 1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases2,MMP-2)、MMP-9蛋白的表达水平;TRITC-标记的鬼笔环肽细胞骨架荧光染色,激光共聚焦显微镜检测细胞骨架。结果与模型组相比:COE能下调人胃癌SGC-7901细胞的Cofilin 1蛋白水平和EMT标志蛋白N-钙黏蛋白、波形蛋白的表达水平,同时上调E-钙黏蛋白的表达水平,显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的EMT进程,呈明显的剂量依赖性;COE能降低人胃癌SGC-7901细胞的穿膜细胞数;另外COE(10、20、40mg/L)能下调人胃癌SGC-7901细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平;COE能明显抑制细胞骨架发生改变。结论 COE能明显抑制人胃癌SGC-7901细胞EMT进程,降低细胞侵袭和转移能力,其机制可能与抑制细胞骨架改变和降低Cofilin 1、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平有关。

关键词：南蛇藤提取物胃癌 Cofilin1 上皮间质转化细胞骨架

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胚芽米加工系统及工程应用探讨

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粮食与食品工业 2021年第1期28卷 7-11页

作者：王捻李建飞陆松花佐竹机械(苏州)有限公司苏州215129

近些年来,随着中国国民生活水平的不断提高,以及对健康饮食观念的不断增强,胚芽米作为一种纯天然的功能性大米,对于大米的适度加工、营养保留、附加值提升均具有重要意义,且市场前景广阔。本文重点介绍了胚芽米加工系统及工程应用,旨在... 详细信息

近些年来,随着中国国民生活水平的不断提高,以及对健康饮食观念的不断增强,胚芽米作为一种纯天然的功能性大米,对于大米的适度加工、营养保留、附加值提升均具有重要意义,且市场前景广阔。本文重点介绍了胚芽米加工系统及工程应用,旨在为胚芽米的加工品质控制与基本工艺设计提供参考。

关键词：胚芽米加工系统工程应用工艺设计

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南蛇藤茎提取物对人胶质母细胞瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响及机制

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中国实验方剂学杂志 2017年第17期23卷 115-120页

作者：顾昊王海波冯俊钱亚云金凤陈珏史有阳陆松花徐佩刘延庆扬州大学医学院江苏扬州225009 南京脑科医院南京210009

目的:探讨南蛇藤茎乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)抗人胶质母细胞瘤U251细胞株的增殖和凋亡作用,研究COE抗肿瘤的分子机制,为寻找新的治疗胶质母细胞瘤药物提供依据。方法:以人胶质母细胞瘤细胞株U251为研究对象,... 详细信息

目的:探讨南蛇藤茎乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)抗人胶质母细胞瘤U251细胞株的增殖和凋亡作用,研究COE抗肿瘤的分子机制,为寻找新的治疗胶质母细胞瘤药物提供依据。方法:以人胶质母细胞瘤细胞株U251为研究对象,设空白组和COE组,应用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]比色法观察COE对细胞活力的抑制作用;5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxy uridine,Brd U)标记检测COE对U251细胞增殖的影响;Annexin V/碘化丙啶(PI)双标法检测COE对U251细胞凋亡的作用;透射电镜下观察经COE干预后U251细胞超微结构变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE对凋亡标志基因B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,COE能够明显抑制U251细胞的增殖(P<0.05);诱导U251细胞的早期凋亡,电镜下可见到凋亡小体,影响并改变U251细胞超微结构;COE能促进Caspase-3,Bax蛋白表达,降低Bcl-2,Bcl-2/Bax蛋白表达(P<0.05)。结论:COE能有效抑制胶质母细胞瘤U251细胞株的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,其作用机制与调节Bcl-2和Caspase-3表达有关。

关键词：南蛇藤茎提取物胶质母细胞瘤 U251细胞株增殖凋亡透射电镜

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生物传感器在谷物安全品质检测上的应用与研究进展

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粮食与饲料工业 2020年第4期 14-18页

作者：徐仁庆李建飞陆松花郁霖苏州技师学院江苏苏州215000 佐竹机械(苏州)有限公司江苏苏州215000

随着国内对谷物安全问题的不断重视,谷物的安全品质检测已贯穿于收储、加工及销售的各个环节;但常规的谷物安全品质指标检测方法不能完全满足快速检测与现场检测的要求。生物传感器作为农产品农药残留、真菌毒素等安全品质指标快速检测... 详细信息

随着国内对谷物安全问题的不断重视,谷物的安全品质检测已贯穿于收储、加工及销售的各个环节;但常规的谷物安全品质指标检测方法不能完全满足快速检测与现场检测的要求。生物传感器作为农产品农药残留、真菌毒素等安全品质指标快速检测的一种新型技术,其在谷物安全品质快速检测上的应用也得到了长足发展。综述了生物传感器在谷物农药残留、真菌毒素、重金属三个方面的研究进展与应用现状,并对生物传感器在谷物安全品质快速检测上的应用进行了展望。

关键词：生物传感器谷物安全品质快速检测

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南蛇藤提取物对人食管鳞癌TE-8细胞凋亡的影响

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中华中医药杂志 2017年第8期32卷 3474-3477页

作者：金凤刘延庆钱亚云陈珏顾昊戴小军王萱怡王海波史有阳陆松花李丹扬州大学医学院中西医结合临床医学系肿瘤研究所国家中医药管理局-胃癌毒邪论治重点研究室扬州大学医药研究所扬州225009

目的:探讨南蛇藤提取物对人食管鳞癌TE-8细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:MTT法检测不同质量浓度的南蛇藤提取物作用于TE-8细胞24、48h后细胞的增殖情况。南蛇藤提取物作用TE-8细胞24h后,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞... 详细信息

目的:探讨南蛇藤提取物对人食管鳞癌TE-8细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:MTT法检测不同质量浓度的南蛇藤提取物作用于TE-8细胞24、48h后细胞的增殖情况。南蛇藤提取物作用TE-8细胞24h后,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;JC-1试剂盒检测线粒体膜电位的损伤;TUNEL法检测DNA损伤情况;Western blot法检测丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白的表达情况。结果:南蛇藤提取物能明显抑制人食管鳞癌TE-8细胞的增殖,呈时间及浓度依赖;南蛇藤提取物能促进细胞凋亡,降低线粒体膜电位,诱导细胞内DNA损伤,阻断MAPK信号通路的表达,呈浓度依赖。结论:南蛇藤提取物能够抑制TE-8细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与南蛇藤提取物抑制MAPK信号通路的表达有关。

关键词：南蛇藤提取物食管鳞癌凋亡 MAPK信号通路 TE-8细胞

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