检索结果-南通市图书馆

VEGF重组质粒pcDNA/V的构建及其在大鼠急性心肌缺血模型中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2006年第2期22卷 220-225页

作者：王雅梅刘冰孙丽翠闫豫东司杨祁雅慧首都医科大学实验中心北京100054

构建人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)真核表达载体,并研究其在细胞水平和大鼠急性心肌梗死动物模型中的表达。利用RT-PCR方法,从人扁桃体组织中扩增人VEGF165基因,构建真核表达载体pcDNA/V。应用脂质体介导的基因转移技术,将pcDNA/V转... 详细信息

构建人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)真核表达载体,并研究其在细胞水平和大鼠急性心肌梗死动物模型中的表达。利用RT-PCR方法,从人扁桃体组织中扩增人VEGF165基因,构建真核表达载体pcDNA/V。应用脂质体介导的基因转移技术,将pcDNA/V转染至人胚肾细胞(293细胞)中,经G418筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆。ELISA、Westernblot检测证实重组质粒pcDNA/V能在293细胞中高效表达外源VEGF基因,鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验证实表达产物具有促血管生成的活性。进一步的体内表达研究,建立大鼠急性心肌梗死模型,将重组质粒pcDNA/V、空质粒pcDNA3.1(+)分三点注射于梗死交界处心肌内,四周后取材。经免疫组化染色检测,pcDNA/V组在梗死交界区有VEGF阳性表达;电镜观察显示,pcDNA/V组在梗死交界处心肌细胞间有大量毛细血管内皮细胞增生。实验结果表明成功克隆了人VEGF165基因,构建了其真核表达载体。体内、外表达研究证实重组质粒的表达产物具有促血管生成的生物学活性,为VEGF基因治疗缺血性心肌病的研究提供实验基础。

关键词：血管内皮细胞生长因子真核表达载体基因表达心肌梗死

人血管内皮生长因子基因的克隆、表达及生物活性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

解剖学报 2004年第4期35卷 396-400页

作者：祁雅慧王雅梅孙丽翠滕旭闫豫东司杨武文琦邴国英首都医科大学实验中心北京100054 肯塔基大学解剖学和神经生物学系

目的　克隆人血管内皮细胞生长因子1 6 5(VEGF1 6 5)基因 ,构建真核表达载体 ,观察其对脐静脉内皮细胞的增殖作用和血管新生的影响。　方法　利用RT PCR方法 ,从人扁桃体组织中扩增人VEGF1 6 5cDNA完整编码区 ,并构建成pcDNA 3 1(+) VE... 详细信息

目的　克隆人血管内皮细胞生长因子1 6 5(VEGF1 6 5)基因 ,构建真核表达载体 ,观察其对脐静脉内皮细胞的增殖作用和血管新生的影响。　方法　利用RT PCR方法 ,从人扁桃体组织中扩增人VEGF1 6 5cDNA完整编码区 ,并构建成pcDNA 3 1(+) VEGF1 6 5(简称pcDNA V)重组体 ;应用脂质体介导的基因转移技术将构建的真核表达载体pcDNA V体外转染至人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,MTT法检测其对内皮细胞增殖的影响。建立家兔下肢缺血模型 ,注射重组质粒pcDNA V ,pcDNA 3 1(+)空质粒作对照 ,选取不同时间点 ,行血管造影。　结果　构建的真核表达载体pcDNA V的酶切电泳分析和测序表明结果正确。pcDNA V转染HUVEC能明显促进内皮细胞的分裂增殖。血管造影显示 ,术后基因治疗组远端动脉充盈早于对照组 ,新生血管数目也明显多于同时期对照组。　结论　成功克隆了人VEGF1 6 5基因 ,构建了其真核表达载体。体内外生物学活性研究证实 ,重组质粒的表达产物具有刺激HUVEC增殖和促进缺血肢体侧枝循环建立的功能。

关键词：血管内皮细胞生长因子基因克隆基因表达

LipofectAMINE和Vigofect转染特点的比较研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术 2004年第6期14卷 40-42页

作者：张静宜孙丽翠闫豫东祁雅慧齐顺章首都医科大学实验中心北京100054 中国农业大学生物学院北京100094

目的 :评估新型转染试剂Vigofect介导gfp - 2mar基因转染BHK细胞的转染效率及其对细胞的毒性作用 ,并与传统转染试剂LipofectAMINE进行比较。方法 :将适量的gfp - 2mar分别用等量的LipofectAMINE和Vigofect转染BHK细胞 ,于转染后 4 8h用... 详细信息

目的 :评估新型转染试剂Vigofect介导gfp - 2mar基因转染BHK细胞的转染效率及其对细胞的毒性作用 ,并与传统转染试剂LipofectAMINE进行比较。方法 :将适量的gfp - 2mar分别用等量的LipofectAMINE和Vigofect转染BHK细胞 ,于转染后 4 8h用MTT比色法检测活细胞数 ,以GFP为报告基因 ,在荧光显微镜下观察并用流式细胞仪计数荧光细胞 ,检测转染效率。结果 :Lipo fectAMINE转染组细胞存活率为 96 .5 1± 3.12 % ,显著大于Vigofect转染组 6 1.4 3± 16 .89% (P <0 .0 1) ;Vigofect转染效率为 5 9.2±19 .5 1% ,显著高于LipofectAMINE 10 .72± 8.17% (P <0 .0 2 )。结论 :与LipofectAMINE相比较 ,Vigofect对细胞毒性较大。

关键词： GFP 基因转染 MTT 流式细胞仪

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

加强高职中药专业建设的几点思考

中国中医药现代远程教育 2012年第15期10卷 1-3页

作者：张子龙邢丹闫豫东倪健北京中医药大学中药学院北京100102

专业建设是高校教育教学改革的重要内容,针对目前我国高职中药专业的办学现状,分析了高职中药专业建设中存在的主要问题,并提出了加强高职中药专业建设的若干建议。

关键词：高职教育中药专业专业建设

应用反义VEGF基因抑制肿瘤细胞生长的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

莱阳农学院学报 2003年第2期20卷 88-90页

作者：孙丽翠祁雅慧闫豫东张静宜王民司杨首都医科大学实验中心北京100054

本实验研究反义血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因对肿瘤细胞生长的抑制作用及由此引起的细胞凋亡。将pcDNA3.1/anti-VEGF真核表达载体转染人神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y),采用软琼脂集落生长,MTT及电子显微镜观察细胞的增殖及形态学变化... 详细信息

本实验研究反义血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因对肿瘤细胞生长的抑制作用及由此引起的细胞凋亡。将pcDNA3.1/anti-VEGF真核表达载体转染人神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y),采用软琼脂集落生长,MTT及电子显微镜观察细胞的增殖及形态学变化,并进一步从蛋白水平检测VEGF的表达。结果证明,反义VEGF基因确有抑制神经母细胞瘤生长的作用,电镜下观察到细胞出现凋亡形态,ELISA结果表明VEGF的表达显著降低。

关键词：反义VEGF基因反义血管内皮细胞生长因子肿瘤细胞生长抑制作用细胞凋亡 ELISA 基因治疗

鸡α-珠蛋白基因5’端MAR调控GFP的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术 2004年第2期14卷 14-15页

作者：闫豫东孙丽翠张静宜祁雅慧张玉国齐顺章首都医科大学实验中心北京100054 中国农业大学生物学院北京100094

目的 :观察不同细胞密度、不同转染时间MAR对GFP表达的影响。方法 :采用脂质体法将pcmv gfp与pgfp mar两个真核表达载体转染人的神经母细胞瘤细胞系 (SH -SY5Y)。结果 :在细胞密度为 3.0× 10 5cells ml,转染后 72hGFP表达量较其它条件... 详细信息

目的 :观察不同细胞密度、不同转染时间MAR对GFP表达的影响。方法 :采用脂质体法将pcmv gfp与pgfp mar两个真核表达载体转染人的神经母细胞瘤细胞系 (SH -SY5Y)。结果 :在细胞密度为 3.0× 10 5cells ml,转染后 72hGFP表达量较其它条件下高 ,且在相同条件下 ,pgfp mar比pcmv gfp表达要高。结论 :初步证明该MAR能够提高GFP的表达。

关键词：脂质体转染鸡 α-珠蛋白基因 MAR GFP 表达动物细胞

PEG化PAMAM树状大分子的合成及其作为药物载体的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物医学工程学报 2007年第6期26卷 921-925页

作者：余沛霖李慎涛叶玲杨华王丛霞张静宜闫豫东刘春娜王荃首都医科大学化学生物学与药学院北京100069 首都医科大学化学实验中心北京100069

研究经聚乙二醇(PEG)进行表面修饰的聚酰胺-胺树枝状大分子作为药物载体时对药物的包裹及释放能力。用经三氟乙基磺酸单甲氧基(Tresylate)活化的相对分子质量为5000的单甲氧基聚乙二醇(Tresylated MPEG-5000)对聚酰胺-胺G4.0-PAMAM树状... 详细信息

研究经聚乙二醇(PEG)进行表面修饰的聚酰胺-胺树枝状大分子作为药物载体时对药物的包裹及释放能力。用经三氟乙基磺酸单甲氧基(Tresylate)活化的相对分子质量为5000的单甲氧基聚乙二醇(Tresylated MPEG-5000)对聚酰胺-胺G4.0-PAMAM树状大分子修饰,目标产物PEG化树状大分子用FT-IR1、H NMR进行结构表征。MTT研究其细胞毒性。通过包裹与释放实验研究该药物载体对抗癌药物甲氨蝶呤(MTX)的包裹及释放能力。每个修饰后的树状大分子可包裹33个抗癌药物甲氨蝶呤分子,细胞毒指数较低,释药速度减慢。修饰后的树状大分子与未PEG化的树状大分子载体相比具有更强的包裹能力,并具有一定的药物缓释功能;细胞毒性试验表明,其胞毒性与未PEG化的树状大分子相比明显偏低。

关键词： 2,2,2-三氟乙基磺酸单甲氧基聚乙二醇酯聚酰胺-胺树状大分子药物载体甲氨蝶呤

人IGF-1基因重组杆状病毒表达载体的构建及在sf9细胞中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

农业生物技术学报 2005年第4期13卷 452-455页

作者：孙丽翠王雅梅闫豫东张静宜司杨王民祁雅慧首都医科大学实验中心北京100054 首都医科大学实验中心

以pcDNA3.1/IGF-1为模板,采用PCR方法对IGF-1基因进行扩增,EcoRⅠ和SalⅠ酶切回收含IGF-1基因的DNA片段,与pFastHTA连接,获得重组载体pFast/IGF-1;将其转化大肠杆菌(Escherichiacoli)DH10Bac感受态细胞,经卡那霉素、四环素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-IGF-1,PCR鉴定得到单一IGF-1条带。将该病毒载体转染sf9细胞,进行病毒重组,Western-blot检测IGF-1表达,并用MTT法检测促内皮细胞生长活性。结果成功获得了重组病毒,Western-blot检测出现1条约13.0kD的带,MTT法检测IGF-1促细胞生长率为24.4%。

关键词：人IGF-1基因重组杆状病毒载体 sf9细胞

含dMAR真核表达载体的构建及影响EGFP表达的研究

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

首都医科大学学报 2005年第2期26卷 159-162页

作者：孙丽翠祁雅慧张静宜闫豫东殷红首都医科大学实验中心

目的　研究dMAR对EGFP基因表达的调控作用。方法　用Kpn -I酶切pGFP/MAR,回收含MAR下游850bp的片段dMAR,与Kpn I酶切回收的pEGFP-C1 载体连接,Hind Ⅲ酶切鉴定方向,构建正向、反向连接的真核表达载体pEGFP/dMAR′和pEGFP/dMAR。将该表... 详细信息

目的　研究dMAR对EGFP基因表达的调控作用。方法　用Kpn -I酶切pGFP/MAR,回收含MAR下游850bp的片段dMAR,与Kpn I酶切回收的pEGFP-C1 载体连接,Hind Ⅲ酶切鉴定方向,构建正向、反向连接的真核表达载体pEGFP/dMAR′和pEGFP/dMAR。将该表达载体转染COS7细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达并采用流式细胞术进行荧光定量。结果　pEGFP- C1,pEGFP/dMAR′和pEGFP/dMAR转染后48 h EGFP的表达量分别为45.1%、40.5%和11.3%。结论　pEGFP/dMAR显著抑制了EGFP的表达,pEGFP/dMAR′的增强表达作用不明显。

关键词：真核表达载体表达的研究 pEGFP COS7细胞 HindⅢ 流式细胞术调控作用基因表达酶切鉴定荧光定量微镜观察表达作用 MAR Kpn 表达量回收连接转染