人IGF-1基因重组杆状病毒表达载体的构建及在sf9细胞中的表达

作     者：孙丽翠 王雅梅 闫豫东 张静宜 司杨 王民 祁雅慧 SUN Li-Cui;WANG Ya-Mei;YAN Yu-Dong;ZHANG Jing-Yi;SI Yang;WANG Min;QI Ya-Hui

作者机构：首都医科大学实验中心 北京100054 首都医科大学实验中心 

出 版 物：《农业生物技术学报》 (Journal of Agricultural Biotechnology)

年 卷 期：2005年第13卷第4期

页      面：452-455页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：北京市科委科技合同资金项目(No.954024800)资助 

主　　题：人IGF-1基因 重组杆状病毒载体 sf9细胞 

摘      要：以pcDNA3.1/IGF-1为模板,采用PCR方法对IGF-1基因进行扩增,EcoRⅠ和SalⅠ酶切回收含IGF-1基因的DNA片段,与pFastHTA连接,获得重组载体pFast/IGF-1;将其转化大肠杆菌(Escherichiacoli)DH10Bac感受态细胞,经卡那霉素、四环素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-IGF-1,PCR鉴定得到单一IGF-1条带。将该病毒载体转染sf9细胞,进行病毒重组,Western-blot检测IGF-1表达,并用MTT法检测促内皮细胞生长活性。结果成功获得了重组病毒,Western-blot检测出现1条约13.0kD的带,MTT法检测IGF-1促细胞生长率为24.4%。