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从肺部感染患者痰液中分离出Kerstersia gyiorum及其药物敏感性的研究

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山东医学高等专科学校学报 2023年第1期45卷 1-3,F0002页

作者：梅静钱冬萌青岛大学基础医学院山东青岛266000

目的探讨Kerstersia gyiorum的鉴定方法及其药敏特性。方法应用生化试验、MALDI-TOF MS仪及16SrDNA测序对菌株进行鉴定,用微量生化反应管分析其生物学特性,利用Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定药敏系统对其进行药物敏感性分析。结果在... 详细信息

目的探讨Kerstersia gyiorum的鉴定方法及其药敏特性。方法应用生化试验、MALDI-TOF MS仪及16SrDNA测序对菌株进行鉴定,用微量生化反应管分析其生物学特性,利用Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定药敏系统对其进行药物敏感性分析。结果在血平板、中国蓝、巧克力平板上菌落扁平,呈灰白色,不透明,表面粗糙,迁徙生长。镜下形态为单个、成对或短链状排列的革兰阴性球杆。主要生化试验为氧化酶阴性、过氧化氢、动力阳性。MALDI-TOF MS及16SrDNA测序鉴定为Kerstersia gyiroum。菌株对环丙沙星、左氧氟沙星、头孢呋辛耐药。结论MALDI-TOF MS及16SrDNA测序技术有利于Kerstersia gyiorum的诊断。

关键词： Kerstersia gyiorum 药物敏感性 16SrDNA

重组人白细胞介素21在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化

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重组人白细胞介素21在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：刘明军钱冬萌王斌青岛大学医学院附属医院临床免疫检验科青岛大学医学院医药生物技术重点实验室

目的在大肠杆菌中表达出可溶性的重组人IL-21融合蛋白,进一步纯化并初步检测其免疫学活性。方法通过降低培养温度等优化条件表达出可溶性的IL-21融合蛋白,蛋白经过亲和层析、Thrombin酶切和离子交换层析等一系列的纯化,MTT法分析纯化后...

目的在大肠杆菌中表达出可溶性的重组人IL-21融合蛋白,进一步纯化并初步检测其免疫学活性。方法通过降低培养温度等优化条件表达出可溶性的IL-21融合蛋白,蛋白经过亲和层析、Thrombin酶切和离子交换层析等一系列的纯化,MTT法分析纯化后的蛋白对T细胞的增殖作用。结果表达出可溶性的重组人IL-21融合蛋白,纯化后得到重组人IL-21,纯度达95%,并能促进T细胞的增殖作用。结论首次报道在大肠杆菌中可溶性表达人IL-21,纯化后的IL-21在体外和IL-2具有类似的活性。为其大量制备和体内的生物学活性研究奠定了基础。

关键词：

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D2蛋白酶间接ELISA检测方法的建立

中国生物制品学杂志 2010年第2期23卷 207-210页

作者：苏洁王斌鲁晓晴赵巍闫志勇钱冬萌丁守怡宋旭霞杨丽刘海燕青岛大学医学院微生物学教研室青岛市医药生物技术重点实验室山东青岛266071

目的建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,为D2蛋白酶的进一步研究及应用奠定基础。方法以纯化的D2蛋白酶为抗原,免疫新西兰白兔,制备D2蛋白酶多克隆抗体,建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。结果D2蛋白酶间接ELISA检测方... 详细信息

目的建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,为D2蛋白酶的进一步研究及应用奠定基础。方法以纯化的D2蛋白酶为抗原,免疫新西兰白兔,制备D2蛋白酶多克隆抗体,建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。结果D2蛋白酶间接ELISA检测方法的最佳反应条件为:一抗稀释度为1∶64000,二抗稀释度为1∶80000,抗原稀释度为1∶100,饱和包被浓度为1160ng/ml,封闭剂为10%胎牛血清。标准曲线的线性检测范围为18～1160ng/ml。该方法准确性、重复性良好,特异性强、敏感性高,与琼脂扩散试验检测结果的符合率为95.5%。结论已建立了D2蛋白酶间接ELISA检测方法,可用于D2蛋白酶含量的检测。

关键词： D2蛋白酶间接ELISA 多克隆抗体

重组人白细胞介素21的制备及免疫学活性分析

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重组人白细胞介素21的制备及免疫学活性分析

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：刘明军钱冬萌王斌青岛大学医学院附属医院临床免疫检验科

目的纯化制备重组人白细胞介素21,并分析其免疫学活性。方法在含重组质粒pGEX4T-2/IL-21的大肠杆菌DH5α中,经IPTG诱导表达出GST-融合蛋白,蛋白经过一系列的纯化,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度。用MTY法研究重组人白细胞介素21对T细胞增殖... 详细信息

目的纯化制备重组人白细胞介素21,并分析其免疫学活性。方法在含重组质粒pGEX4T-2/IL-21的大肠杆菌DH5α中,经IPTG诱导表达出GST-融合蛋白,蛋白经过一系列的纯化,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度。用MTY法研究重组人白细胞介素21对T细胞增殖、NK细胞杀伤活性的影响。结果表达出了可溶性融合蛋白,纯化后的重组人白细胞介素21纯度达95%。重组人白细胞介素21能促进T细胞增殖,能增强NK细胞杀伤活性。结论:成功制备了重组人白细胞介素21,该重组人白细胞介素21在体外具有一定的免疫学活性,为其大量制备和体内的生物学活性研究奠定了基础。

关键词：人白细胞介素21 大肠杆菌表达纯化活性

来源： cnki会议评论

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一种IL-2变构体的制备与免疫学活性研究

一种IL-2变构体的制备与免疫学活性研究

肾移植患者HCMV激发感染与血T淋巴细胞亚群的相关性分析

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：刘明军王斌钱冬萌青岛大学医学院附属医院临床免疫检验科青岛大学医学院医药生物技术重点实验室

目的制备一种IL-2的变构体(Arg IL-2,Asn88被Arg88代替),并研究其免疫学活性。方法:利用定点诱变技术构建了重组质粒pGEX4T-2/Arg IL-2,在大肠杆菌中表达出可溶性的融合蛋白,蛋白经过亲和层析、Thrombin酶切和离子交换层析等一系列的纯... 详细信息

目的制备一种IL-2的变构体(Arg IL-2,Asn88被Arg88代替),并研究其免疫学活性。方法:利用定点诱变技术构建了重组质粒pGEX4T-2/Arg IL-2,在大肠杆菌中表达出可溶性的融合蛋白,蛋白经过亲和层析、Thrombin酶切和离子交换层析等一系列的纯化,用Western-blot进行鉴定,MTT法分析纯化后的Arg IL-2对人T细胞的增殖作用,对人卵巢癌细胞SKOV增殖的影响。研究纯化后的88Arg IL-2对荷瘤小鼠卵巢癌皮下移植瘤生长的影响,对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响。结果:纯化制备的重组Arg IL-2纯度达95%。重组88Arg IL-2能促进人T细胞的增殖,不能直接抑制人卵巢癌细胞SKOV的增殖,能抑制荷瘤小鼠卵巢癌皮下移植瘤的生长,在促进荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖方面比IL-2的作用更强。结论:我们制备的重组Arg IL-2在体内体外均具有一定的增强免疫的活性,在体内具有一定的抗肿瘤活性,为其大量制备和进一步的生物学活性研究奠定了基础。

关键词：白细胞介素2 变构体 88Arg IL-2 纯化制备 T细胞荷瘤小鼠免疫学活性

来源： cnki会议评论

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世界最新医学信息文摘 2015年第26期 140-140页

作者：赵鹏钱冬萌宋旭霞内蒙古呼伦贝尔市牙克石市妇幼保健所

目的分析肾移植患者HCMV激发感染与血T淋巴细胞亚群的相关性。方法根据在我院接受肾移植患者术后状况,将所有患者分为HCMV激活感染组和HCMV未被激活感染组。观察两组患者接受手术治疗前后的外周血T淋巴细胞亚群数目和CD4+/CD8+比值变化... 详细信息

目的分析肾移植患者HCMV激发感染与血T淋巴细胞亚群的相关性。方法根据在我院接受肾移植患者术后状况,将所有患者分为HCMV激活感染组和HCMV未被激活感染组。观察两组患者接受手术治疗前后的外周血T淋巴细胞亚群数目和CD4+/CD8+比值变化状况。结果肾移植术后HCMV激发感染明显增加,HCMV激活感染组术后的CD4+细胞数目CD4+/CD8+比值明显高于术前和HCMV未被激活感染组,CD8+细胞数目明显低于术前和HCMV未被激活感染组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论肾移植手术后HCMV激发感染会引起外周血T淋巴细胞亚群发生变化,CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+相互联系和互相影响,对临床诊断、治疗以及预后都有重要意义。

关键词：肾移植 HCMV激发感染血T淋巴细胞亚群

乙肝病毒T1762／A1764变异对肝纤维化的影响

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世界感染杂志 2003年第6期3卷 494-496页

作者：宋明全钱冬萌王斌山东省青岛市传染病医院中医科，青岛266033 山东省青岛大学医学院微生物学教研室，青岛266021

目的：观察乙肝病毒(HBV)T1762／A1764变异后对病人HBV DAN定量、肝功能、肝纤维化指标的影响。方法：应用错配聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法，检测38例HBVT1762／A1764变异组病人和30例无HBVT1762／A1764变异的对照... 详细信息

目的：观察乙肝病毒(HBV)T1762／A1764变异后对病人HBV DAN定量、肝功能、肝纤维化指标的影响。方法：应用错配聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法，检测38例HBVT1762／A1764变异组病人和30例无HBVT1762／A1764变异的对照组病人的HBV DNA定量、ALT、AST、TBil和层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PⅢP)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、血清透明质酸(HA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血清转化生长因子β-1(TGF-β1)的差异。结果：HBVT1762／A1764变异组病人HBV DAN定量明显低于对照组(P<0．05)；肝纤维化指标LN、PⅢP、CⅣ、TNF-α、TGF-β1明显高于对照组(P<0．05)；两组肝功能结果无差异。结论：HBVT1762／A1764变异后复制水平减低；HBVT1762／A1764变异会加重肝纤维化的病理进程。

关键词：乙肝病毒肝纤维化基因变异 HBV DNA

HIV-1 GP41第二优势表位簇在大肠杆菌中的高效表达

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青岛大学医学院学报 2003年第1期39卷 7-9,12页

作者：李文利钱冬萌王斌青岛大学医学院微生物学教研室青岛266021

①目的　构建HIV 1SF2株跨膜蛋白GP4 1第二优势表位簇基因的原核高效表达克隆 ,探讨提高原核表达的途径。②方法　根据密码子的兼并性 ,利用PCR 定点突变技术扩增、改造目的基因片段 ,将其与原核表达载体 pGEX4T 2经EcoRⅠ和SalⅠ双酶... 详细信息

①目的　构建HIV 1SF2株跨膜蛋白GP4 1第二优势表位簇基因的原核高效表达克隆 ,探讨提高原核表达的途径。②方法　根据密码子的兼并性 ,利用PCR 定点突变技术扩增、改造目的基因片段 ,将其与原核表达载体 pGEX4T 2经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切、连接 ,重组质粒pGEX4T 2 /SE转化表达宿主菌DH5α,经IPTG诱导表达出目的融合蛋白 ,经SDS PAGE与Western Blot鉴定。③结果　获得了高效表达HIV 1GP4 1第二优势表位谷胱甘肽S 转移酶融合蛋白的重组菌 ;Western Blot鉴定表明 ,重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。④结论在原核表达体系中可以高效表达HIV 1GP4

关键词： HIV包膜蛋白质GP41 基因表达免疫优势表位病毒融合蛋白质类

沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株的筛选及其酶学性质

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中国生物制品学杂志 2007年第7期20卷 493-496页

作者：代玉梅闫志勇王斌钱冬萌宋旭霞丁守怡刘明军张艳丽青岛大学医学院微生物学教研室青岛市医药生物技术重点实验室

目的从海洋生物双齿围沙蚕消化道筛选产蛋白酶菌株,并对其胞外蛋白酶的性质进行分析。方法用脱脂奶粉平板溶圈法及改良Lowry法进行产蛋白酶菌株的筛选和蛋白酶活力测定;Bradford法测定蛋白含量;UVP GDS8000型凝胶成像系统和VisionWorks... 详细信息

目的从海洋生物双齿围沙蚕消化道筛选产蛋白酶菌株,并对其胞外蛋白酶的性质进行分析。方法用脱脂奶粉平板溶圈法及改良Lowry法进行产蛋白酶菌株的筛选和蛋白酶活力测定;Bradford法测定蛋白含量;UVP GDS8000型凝胶成像系统和VisionWorks、Bandscan4·03软件进行相对分子质量和纯度分析,并对酶的各项性质进行检测。结果筛选出高蛋白水解活性菌株D2,其胞外蛋白酶比活性为156·0U/mg,相对分子质量约为42000,纯度大于97%,最适作用温度60℃,最适pH为9,在pH6～10及0～55℃具有较好的稳定性。结论D2株分泌的胞外蛋白酶有望成为一种新型的海洋微生物蛋白酶资源。

关键词：双齿围沙蚕胞外蛋白酶筛选酶学性质