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髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠的构建与鉴定

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中国临床解剖学杂志 2017年第2期35卷 177-182页

作者：黄梦怡钟玙沄黄穗孙江李月王娟姜勇刘靖华南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广州510515

目的利用FLP/FRT、Cre/Loxp重组酶系统构建并鉴定髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为深入研究SETD4的生物学功能奠定基础。方法将引进的Setd4^(flox/+)小鼠自交,筛选出子代基因型为Setd4^(flox/flox)的小鼠;与FLP小鼠交配,得到Setd4^(f... 详细信息

目的利用FLP/FRT、Cre/Loxp重组酶系统构建并鉴定髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为深入研究SETD4的生物学功能奠定基础。方法将引进的Setd4^(flox/+)小鼠自交,筛选出子代基因型为Setd4^(flox/flox)的小鼠;与FLP小鼠交配,得到Setd4^(fl/+/flp)小鼠;然后分别与C57BL/6小鼠交配去除FLP酶,筛选出Setd4^(fl/+)小鼠;与Lyz2-Cre小鼠交配,筛选出Setd4^(fl/+)/Lyz2-Cre小鼠;将得到的Setd^(4fl/+)和Setd4^(fl/+)/Lyz2-Cre小鼠交配,筛选出Setd4^(-/-)/Lyz2-Cre小鼠,即髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠。利用PCR技术鉴定小鼠基因型;实时荧光定量PCR技术检测小鼠腹腔巨噬细胞及肝组织中SETD4的mRNA表达水平验证敲除情况。结果髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞中SETD4 mRNA水平较野生型小鼠显著降低;而在肝组织中无显著差异。结论利用FLP/FRT、Cre/Loxp系统成功构建髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为后续的功能学研究提供了动物模型。

关键词： FLP/FRT Cre/Loxp SETD4 基因敲除

基于甲基化反应系统检测SETD3甲基化组蛋白的位点

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生物技术 2017年第3期27卷 245-251页

作者：钟玙沄黄梦怡孙江黄穗李月罗海华姜勇刘靖华广东省功能蛋白质组学重点实验室南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广东广州510515

[目的]构建pEGX-4T-1-Setd3,表达并纯化GST-SETD3蛋白;用获得的蛋白进行体外甲基化反应并鉴定其活性,建立体外甲基化反应系统。[方法]PCR扩增小鼠全长Setd3,插入到pEGX-4T-1载体获得pEGX-4T-1-Setd3质粒。将质粒转化大肠杆菌,用异丙基-... 详细信息

[目的]构建pEGX-4T-1-Setd3,表达并纯化GST-SETD3蛋白;用获得的蛋白进行体外甲基化反应并鉴定其活性,建立体外甲基化反应系统。[方法]PCR扩增小鼠全长Setd3,插入到pEGX-4T-1载体获得pEGX-4T-1-Setd3质粒。将质粒转化大肠杆菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST-SETD3蛋白并进行纯化。将获得的GST-SETD3蛋白定量后进行体外组蛋白甲基化反应,用Western Blot检测GST-SETD3对组蛋白H3K4及H3K36的甲基化情况。[结果]p GEX-4T-1-Setd3质粒构建正确,纯化的GST-SETD3蛋白纯度较高;甲基化反应结果表明,用不同来源的组蛋白、反应时间、反应缓冲液及检测方法均检测不到GST-SETD3二甲基化H3K4;GSTSETD3可以二甲基化H3K36。[结论]成功表达和纯化GST-SETD3蛋白;该蛋白可以使H3K36发生二甲基化,但不能使H3K4二甲基化。成功构建体外甲基化反应系统。

关键词： GST-SETD3 重组蛋白原核表达蛋白纯化甲基化反应甲基转移酶

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SETD4基因敲除小鼠的构建及鉴定

中国临床解剖学杂志 2016年第2期34卷 202-207页

作者：黄穗黄梦怡钟玙沄雷烨铭赵舒祺蔡军伟姜勇刘靖华广东省蛋白质组学重点实验室南方医科大学病理生理学教研室广州510515

目的构建并鉴定SETD4基因敲除小鼠,为研究SETD4的生物学功能提供动物模型。方法将引进的SETD4flox/+小鼠与EIIa-Cre小鼠进行杂交繁殖,得到基因型为SETD4+/-.EIIa-Cre的小鼠;再与C57BL/6小鼠杂交去除Cre酶,获得杂合子SETD4+/-小鼠;该小... 详细信息

目的构建并鉴定SETD4基因敲除小鼠,为研究SETD4的生物学功能提供动物模型。方法将引进的SETD4flox/+小鼠与EIIa-Cre小鼠进行杂交繁殖,得到基因型为SETD4+/-.EIIa-Cre的小鼠;再与C57BL/6小鼠杂交去除Cre酶,获得杂合子SETD4+/-小鼠;该小鼠自交获得纯合子SETD4-/-小鼠。通过PCR法鉴定子代小鼠的基因型;RT-PCR、荧光定量PCR方法鉴定纯合子的SETD4基因敲除小鼠SETD4m RNA表达情况;HE染色观察小鼠肝、肺组织的形态学变化。结果 PCR结果表明子代小鼠的基因型符合SETD4-/-;纯合子基因敲除小鼠SETD4 m RNA水平显著低于野生型小鼠;SETD4基因敲除小鼠肝、肺组织的形态学特征与野生型小鼠相比无明显差异。结论本研究基于Cre/loxp系统,成功构建并鉴定了SETD4基因敲除小鼠。

关键词： SETD4 基因敲除 Cre/loxp系统 KO-First技术

NF-κB信号通路对BLP耐受巨噬细胞iNOS表达的影响

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中国临床解剖学杂志 2014年第3期32卷 300-305页

作者：李雪王义乾罗海华钟玙沄雷烨铭雷山蔡军伟姜勇刘靖华广东省蛋白质组学重点实验室南方医科大学病理生理学教研室广州510515

目的通过检测细菌脂蛋白(BLP)耐受巨噬细胞感染细菌时诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达情况及其表达是否受NF-κB信号通路调控,探讨BLP耐受巨噬细胞对细菌清除能力增强的机制。方法比较BLP耐受和非耐受(Naive)小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMM)... 详细信息

目的通过检测细菌脂蛋白(BLP)耐受巨噬细胞感染细菌时诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达情况及其表达是否受NF-κB信号通路调控,探讨BLP耐受巨噬细胞对细菌清除能力增强的机制。方法比较BLP耐受和非耐受(Naive)小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMM)对大肠杆菌的吞噬及杀灭情况,评价BLP耐受巨噬细胞的细菌清除能力;用定量PCR技术检测BLP耐受的BMM内iNOS mRNA表达情况和细胞免疫荧光技术观察p65从胞质向胞核的移位情况;最后观察抑制NF-κB通路活化对iNOS mRNA表达的影响。结果 BLP耐受巨噬细胞吞噬细菌和杀灭细菌的能力较Naive细胞显著增强(P<0.05);iNOS mRNA表达水平较Naive细胞显著(P<0.05);如果抑制BLP耐受巨噬细胞NF-κB通路活化对iNOS mRNA表达有显著影响(P<0.05)。结论本研究结果提示细菌脂蛋白耐受通过NF-κB通路活化增强细菌感染巨噬细胞iNOS表达。

关键词： BLP耐受细菌吞噬 iNOS NF—κB

SETD4对脂多糖诱导的AML12细胞IL-6转录的调控作用

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中国临床解剖学杂志 2018年第3期36卷 282-287页

作者：孙江李月牛世贤黄梦怡钟玙沄赵舒祺罗海华姜勇刘靖华南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室

目的探讨SETD4（SET-domain containing protein 4）对脂多糖（LPS）诱导的AML12（小鼠肝脏细胞系）细胞IL-6的转录调控作用。方法构建SETD4表达质粒和IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒,共转染小鼠肝脏细胞系AML12,使用双荧光素酶报告基... 详细信息

目的探讨SETD4（SET-domain containing protein 4）对脂多糖（LPS）诱导的AML12（小鼠肝脏细胞系）细胞IL-6的转录调控作用。方法构建SETD4表达质粒和IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒,共转染小鼠肝脏细胞系AML12,使用双荧光素酶报告基因技术检测LPS刺激后IL-6启动子荧光素酶活性;单独转染SETD4表达质粒上调AML12细胞SETD4表达,检测LPS刺激后IL-6 mRNA水平变化。结果双酶切鉴定及核酸测序证实重组质粒pcDNA3.0/HA-SETD4、pGL3.0/IL-6 promoter的构建成功。pcDNA3.0/HA-SETD4与pGL3.0/IL-6 promoter共转染AML12细胞,LPS刺激后SETD4对IL-6启动子荧光素酶活性没有影响;上调SETD4表达后,可以促进LPS诱导的IL-6 mRNA转录。结论成功构建SETD4真核表达质粒和IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒;SETD4对LPS诱导的AML12细胞IL-6的转录发挥正调控作用。

关键词： SETD4 LPS AML12 IL-6转录荧光素酶报告基因

SETD4蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒系统的表达

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中国临床解剖学杂志 2015年第4期33卷 426-429页

作者：雷烨铭崔航钟玙沄王义乾黄穗赵舒祺蔡军伟姜勇刘靖华广东省蛋白质组学重点实验室南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广州510515

目的通过昆虫杆状病毒表达系统表达SETD4(SET domain-containing 4)蛋白,并纯化SETD4蛋白,为深入探讨SETD4的功能奠定基础。方法提取小鼠正常肝组织的RNA,通过RT-PCR扩增SETD4基因,并克隆至p Fast Bac-HTB构建重组载体,再转座获得重组杆... 详细信息

目的通过昆虫杆状病毒表达系统表达SETD4(SET domain-containing 4)蛋白,并纯化SETD4蛋白,为深入探讨SETD4的功能奠定基础。方法提取小鼠正常肝组织的RNA,通过RT-PCR扩增SETD4基因,并克隆至p Fast Bac-HTB构建重组载体,再转座获得重组杆粒;通过脂质体介导将重组杆粒转染SF9细胞产生重组病毒,扩增病毒感染细胞并获得重组蛋白;利用Ni2+亲和柱来纯化蛋白,并通过Western Blot及考马斯亮蓝染色鉴定SETD4蛋白。结果经双酶切鉴定及测序证实SETD4基因插入了供体质粒;经PCR鉴定证实SETD4基因插入了穿梭载体;经考马斯亮蓝染色证实纯化得到重组蛋白,用His-Tag抗体和SETD4特异性抗体在50 k D处可检测到目的条带。结论成功利用昆虫杆状病毒表达系统够表达了SETD4,并纯化了SETD4。

关键词： SETD4蛋白杆状病毒表达系统表达纯化

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柔性锌离子电池水凝胶电解质研究进展

有机化学 2024年第1期44卷 148-158页

作者：章炜夏欢曹昕徐彬瑜李峥沄东南大学材料科学与工程学院南京211102 东南大学机械工程学院南京211102

为了满足多样化的柔性可穿戴电子设备的发展,需要与之相匹配的供能系统.柔性锌离子电池因其安全性高、易组装及能量密度高等特点受到广泛关注,而水凝胶电解质则是柔性锌离子电池中的重要组成部分,因此受到广泛研究.综述了水凝胶电解质... 详细信息

为了满足多样化的柔性可穿戴电子设备的发展,需要与之相匹配的供能系统.柔性锌离子电池因其安全性高、易组装及能量密度高等特点受到广泛关注,而水凝胶电解质则是柔性锌离子电池中的重要组成部分,因此受到广泛研究.综述了水凝胶电解质的可控构筑方法,详细总结了柔性锌离子电池水凝胶电解质的最新研究成果,包括力学增强型、自愈合型、低温型和环境响应型水凝胶电解质.此外,还对高性能水凝胶电解质的未来发展进行了展望.

关键词：水凝胶电解质柔性锌离子电池力学增强自愈合低温环境响应

面向无人机的通信感知一体化系统自干扰消除技术

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西南交通大学学报 2024年

作者：叶启彬肖泓宇田晨刘名付沄琳胡苏电子科技大学通信抗干扰全国重点实验室

目前，通信感知一体化已经被确立为下一代移动通信的关键技术之一，具有广泛的应用前景。在无人机通信场景中应用通信感知一体化，将有效缓解地面基站感知范围受限问题。然而，机载通信感知一体化系统在接收信号时，会遭受本地信号发射... 详细信息

目前，通信感知一体化已经被确立为下一代移动通信的关键技术之一，具有广泛的应用前景。在无人机通信场景中应用通信感知一体化，将有效缓解地面基站感知范围受限问题。然而，机载通信感知一体化系统在接收信号时，会遭受本地信号发射带来的强烈自干扰影响，从而产生虚假目标并降低系统对目标的感知性能。因此，研究了基于OFDM的通信感知一体化自干扰消除问题。首先，构建了基于OFDM的通信感知一体化系统包含自干扰信号的回波模型。然后，提出了一种数字域自干扰消除方法，该方法基于最小二乘算法估计自干扰信号信道增益，并且利用该增益完成对自干扰信号的重建和抑制。最后，在无人机通信场景下进行了仿真和对比，结果表明，所提方法可将自干扰信号抑制到噪声功率水平，为目标回波信号的SINR带来近10 dB的提升，从而有效提高系统感知性能。

关键词：通信感知一体化无人机通信自干扰消除

gEdge：基于容器技术的云边协同的异构计算框架

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计算机学报 2024年

作者：汪沄汤冬劼郭开诚戚正伟管海兵上海交通大学电子信息与电气工程学院

由于按需灵活配置、高可用性、高资源利用率等优点，云计算技术成为过去十年的主流计算范式。随着万物互联时代的到来，单独依赖云计算技术已经无法满足数以亿计的IoT设备及其数据流量的需求。为了解决这些问题，以云计算为代表的中心... 详细信息

由于按需灵活配置、高可用性、高资源利用率等优点，云计算技术成为过去十年的主流计算范式。随着万物互联时代的到来，单独依赖云计算技术已经无法满足数以亿计的IoT设备及其数据流量的需求。为了解决这些问题，以云计算为代表的中心化计算范式，逐渐向以边缘计算为代表的分布式计算范式转变。随着云游戏、VR技术以及人工智能技术在日常生活中的广泛运用，对计算资源的需求也在日渐增长。然而，受体积与功耗限制，处于边缘的节点设备算力较弱。本文提出了gEdge——一种基于容器技术的云边协同的异构计算框架。该框架通过GPU虚拟化技术，将云端的物理GPU资源分为多块虚拟GPU资源，按需为边缘节点提供GPU算力资源，并且对用户容器无感知。实验表明，使用gEdge框架使边缘节点使用的容器镜像体积降低了48.8%，容器启动时间降低了35.5%，平均相对运行速度提高了213%。

关键词：图形处理器虚拟化技术容器技术边缘计算云边协同