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HMGB1/TLR4信号通路在DSS诱导的小鼠结肠炎中作用及EP对其干预研究

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HMGB1/TLR4信号通路在DSS诱导的小鼠结肠炎中作用及EP对其干预研究

作者：钟伟祥南昌大学

学位级别：硕士

背景与目的:炎症性肠病(informatory bowel diseas,IBD)是一类病因尚不十分明确的肠道组织非特异性的慢性炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)与克罗恩病(Crohn’s disease,CD)两大类。目前,大多数学者认为其发病主要... 详细信息

背景与目的:炎症性肠病(informatory bowel diseas,IBD)是一类病因尚不十分明确的肠道组织非特异性的慢性炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)与克罗恩病(Crohn’s disease,CD)两大类。目前,大多数学者认为其发病主要由环境因素、遗传因素、感染因素及免疫功能异常等诸多因素共同作用所致。其中,免疫功能异常在IBD肠道组织炎症的发生、发展与持续中发挥至关重要作用。已明确,Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)是机体识别肠道病原微生物感染、炎症或损伤等释放的危险信号,介导固有免疫应答及诱导适应性免疫应答的一种重要模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR),在IBD肠道组织炎症反应中的作用备受关注,但其作用机制及调控方式尚待进一步研究。近年来研究发现,高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)既是一种重要的晚期炎症介质,参与许多慢性炎症性疾病及自身免疫性疾病的发生、发展及转归;又是TLR4关键的内源性配体之一,在TLR4信号通路介导的炎症与免疫反应异常中起重要的调控作用。有报道,HMGB1可能在IBD的发生、发展中发挥作用。但其究竟起何作用、调控HMGB1能否改善IBD的肠道慢性炎症反应呢目前国内外鲜有报道。为阐明这一问题,本文构建葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导实验性结肠炎小鼠模型初步探讨HMGB1/TLR4信号通路激活与IBD的关系,并采用HMGB1抑制剂-丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)进行干预研究,以证实HMGB1在IBD肠道炎症反应中的作用及其可能作用机制。为进一步阐明HMGB1/TLR4信号通路在IBD的作用及以HMGB1为新靶标用于防治IBD提供重要的理论与实验依据。方法:1.实验分组:36只清洁级6周龄的BALB/c小鼠,雌雄各半,随机分为3组:(1)正常对照组(12只);(2)DSS模型组(12只);(3)DSS+EP组(12只)。2.构建DSS诱导的IBD小鼠模型,并进行EP干预处理:(1)构建及鉴定DSS诱导的IBD小鼠模型:DSS模型组及DSS+EP组BALB/c小鼠均给予连续饮用5%DSS液7天,建立小鼠急性结肠炎模型。模型建立达标的指标:造模小鼠出现体重下降、腹泻、大便隐血试验阳性或肉眼血便中的任何一种症状。而正常对照组小鼠仅给予饮用水7天。7天后处死小鼠,收集相应的组织标本进行检测。(2)EP干预处理:于造模第3天起,DSS+EP组小鼠腹腔注射EP(40mg/kg,溶于林格氏液),每日1次,连续5天;而正常对照组及DSS模型组小鼠腹腔注射等量不含EP的林格氏液,每日1次,连续5天。3.各项小鼠指标的观察与检测:(1)每天观察各组小鼠体重与疾病活动指数DAI的改变;(2)观察小鼠结肠大体形态上的改变,HE染色方法观察小鼠的结肠病理组织学的变化;(3)用免疫组化法来检测小鼠结肠组织HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB p65p65和Foxp3蛋白的表达。结果:(1)各组小鼠体重与DAI积分的改变(1)正常对照组小鼠体重呈现出持续上升的状态;DSS模型组小鼠体重呈逐渐下降状态,在造模的第7天下降至最低点;DSS+EP组小鼠造模后体重逐渐下降,第5天下降至最低点,而随后逐渐回升。在实验第5、7天DSS模型组和DSS+EP组小鼠体重下降百分比均明显高于正常对照组(P<0.01);在实验第5天,DSS+EP组小鼠体重下降百分比高于DSS模型组(P<0.01),直至实验第7天DSS+EP组小鼠体重下降百分比才低于DSS模型组(P<0.01)。(2)各组小鼠DAI积分改变:在实验第5、7天,DSS模型组和DSS+EP组小鼠的DAI积分均明显高于正常对照组(P<0.01),但DSS+EP组的DAI积分均明显低于DSS模型组(P<0.01)。(2)小鼠的结肠组织病理学改变(1)小鼠肠黏膜组织的大体形态:正常对照组小鼠的结肠黏膜组织未出现充血、出血、糜烂与溃疡;DSS模型组小鼠可见到结肠黏膜组织有明显充血、出血、糜烂,严重甚至可看到溃疡;但DSS+EP组结肠黏膜充血、出血和糜烂较DSS模型组稍有减轻。(2)HE染色法观察各组小鼠肠道病理组织学变化,DSS模型组小鼠和DSS+EP组小鼠结肠炎症程度、隐窝破坏程度和病变深度均明显高于正常对照组(P<0.01);但DSS+EP组小鼠结肠炎症程度、隐窝破坏程度和病变深度均低于DSS模型组(P<0.01)。(3)小鼠结肠黏膜Foxp3表达DSS模型组及DSS+EP组小鼠结肠黏膜Foxp3蛋白表达均明显低于正常对照组(P<0.01);但DSS+EP组小鼠结肠黏膜Foxp3蛋白表达高于DSS模型

关键词：炎症性肠病丙酮酸乙酯 Toll样受体4 实验性结肠炎高迁移率族蛋白B1

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延胡索止痛片中延胡索及白芷的薄层色谱鉴别

中成药 1995年第8期17卷 13-14页

作者：钟伟祥梁颂培香港政府化验所

应用薄层扫描法对延胡索止痛片中延胡索及白芷进行了定型扫描鉴别测定，方法可行，结果明确。

关键词：延硼索止痛片延胡索白芷鉴别薄层色谱

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中成药中当归、川芎的气相质谱鉴别研究

中成药 1997年第9期19卷 32-34页

作者：钟伟祥梁颂培香港政府化验所

利用毛细管气相质谱联用法分析当归和川芎的化学成分，也为杜仲虎骨丸等中成药进行了较好的定性鉴别．结果证明，方法准确．重现性好，专属性强，不受其它共存成分的干扰，适用于当归、川芎的制剂作定性鉴别．

关键词：川芎当归气相层析质谱法中成药

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建筑技术及设计 2002年第1期 32-35页

作者：钟伟祥广州莫伯治建筑师事务所

HRGC/HRMS定量检测市售牛奶中二湲碢和呋喃

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中国公共卫生 2002年第3期18卷 356-358页

作者：张建清姜杰刘桂华李良成钟伟祥深圳市卫生防疫站 518020 香港政府化验所

目的　采用高分辨气相色谱 /高分辨双聚焦磁式质谱联用仪 (HRGC/HRMS)定量检测了牛奶中 17个 4～ 8个氯原子取代的二和呋喃。方法　样品中的二经过液 -液萃取、碳柱富集、色谱柱纯化、分离 ,以HRGC/HRMS -MID方法检测 ,用美国EP... 详细信息

目的　采用高分辨气相色谱 /高分辨双聚焦磁式质谱联用仪 (HRGC/HRMS)定量检测了牛奶中 17个 4～ 8个氯原子取代的二和呋喃。方法　样品中的二经过液 -液萃取、碳柱富集、色谱柱纯化、分离 ,以HRGC/HRMS -MID方法检测 ,用美国EPA16 13方法进行严格的质量控制和同位素稀释的方法定量 ,该方法定量可精确到pg/g即 ppt水平。结果　该方法的检测限TCDF和TCDD分别为 0 0 2 2 2 pg/ μl和 0 0 317pg/ μl,在 17个PCDDs/PCDFs中 ,其检测限为最低。同位素标准物的回收率分布于 5 8 4 6 %～ 79 99%之间。 1,2 ,3,7,8-PeCDF、1,2 ,3,4 ,7,8,9-HpCDF、2 ,3,7,8-TCDD均未检出 ,样品中 17个同系物异构体以OCDF和OCDD的含量为最高 ,分别为0 0 6 5 pg/g和 0 2 0 2 pg/g ,样品的总TEQ值为 0 0 33pgTEQ/g。结论　采用高分辨气相色谱 /高分辨双聚焦磁式质谱联用仪和同位素稀释的方法对基质中的目标化合物二进行检测 ,该法定性、定量准确。

关键词： HRGC/HRMS 同位素稀释二恶英呋喃牛奶食品检验食品卫生

HMGB1/TLR4信号通路在小鼠实验性结肠炎中的作用及丙酮酸乙酯(EP)对其干预研究

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HMGB1/TLR4信号通路在小鼠实验性结肠炎中的作用及丙酮酸乙酯(EP)...

第十三届全国免疫学学术大会

作者：谢勇陈丹钟伟祥吴双南昌大学第一附属医院江西省职业病医院

目的 :探讨HMGB1/TLR4信号通路在小鼠实验性结肠炎中的作用及HMGB1抑制剂丙酮酸乙酯(EP)对其的干预作用。方法 :60只BABL/c鼠随机分为正常对照组、DSS组、DSS+EP组、TNBS组和TNBS+EP组。于造模第3天起,DSS+EP组和TNBS+EP组小鼠腹腔注射E... 详细信息

目的 :探讨HMGB1/TLR4信号通路在小鼠实验性结肠炎中的作用及HMGB1抑制剂丙酮酸乙酯(EP)对其的干预作用。方法 :60只BABL/c鼠随机分为正常对照组、DSS组、DSS+EP组、TNBS组和TNBS+EP组。于造模第3天起,DSS+EP组和TNBS+EP组小鼠腹腔注射EP(40mg/kg,溶于林格氏液),正常对照组及TNBS模型组注射等量林格氏液,每日1次,连续5天,第8天处死小鼠。评估小鼠DAI、结肠粘膜病理评分,免疫组化检测结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB p65、Foxp3、HMGB1蛋白的表达,并检测小鼠血清中IFN-γ、IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的水平。结果 :1、无论有无EP干预,TNBS及DSS组小鼠DAI及病理学评分均显著高于正常对照组(p<0.01),EP干预组显著低于相应的模型组(p<0.05)。2、免疫组化结果显示:无论有无EP干预,TNBS及DSS组小鼠结肠组织TLR4、MyD88、NF-κBp65、HMGB1蛋白的表达显著高于正常对照组(p<0.01),Foxp3蛋白的表达显著低于正常对照组(p<0.01);在EP干预组TLR4、MyD88、NF-κB p65、HMGB1蛋白的表达显著低于相应的模型组(p<0.05),Foxp3蛋白的表达组显著高于相应的模型组(p<0.05)3、无论有无EP干预,TNBS组小鼠血清IFN-γ、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著高于正常对照组(p<0.01),IL-10的水平显著低于正常对照组(p<0.01);在EP干预组IFN-γ、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著低于相应的模型组(p<0.05),IL-10的水平显著高于相应的模型组(p<0.05)。结论 :1、EP可减轻小鼠实验性结肠炎的肠道炎症和黏膜损伤,对IBD具有一定的治疗作用。2、EP可增加小鼠实验性结肠炎肠黏膜中Treg细胞,这可能是其减轻肠道炎症机制之一。3、EP可抑制TNBS诱导的小鼠结肠炎肠黏膜中HMGB1/TLR4信号通路,降低促炎因子水平,上调抑炎因子水平,这可能是其减轻肠道炎症的又一机制。

关键词：炎症性肠病丙酮酸乙酯 Toll样受体4 高迁移率族蛋白B1

来源： cnki会议评论

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胸腹腔积液常规细胞学分类方法探讨

实验与检验医学 2009年第5期27卷 459-460页

作者：李静钟伟祥万腊根南昌大学第一附属医院检验科 330006

目的筛选出一种最具临床价值的胸、腹腔积液细胞的分类方法。方法对细胞计数大于100个/mm3的胸、腹腔积液标本168例用显微镜直接分类法(A法)、推片染色后全部镜下细胞分类法(B法)和推片染色后撇开间皮细胞分类法(C法)进行分类,再对分类... 详细信息

目的筛选出一种最具临床价值的胸、腹腔积液细胞的分类方法。方法对细胞计数大于100个/mm3的胸、腹腔积液标本168例用显微镜直接分类法(A法)、推片染色后全部镜下细胞分类法(B法)和推片染色后撇开间皮细胞分类法(C法)进行分类,再对分类的结果进行统计分析。结果无论胸、腹腔积液的李凡他试验阳性或阴性,A与B两方法的中性粒细胞(N)或多个核细胞分类结果无差异,A法、B法N的分类结果与C法N的分类结果有显著性差异,且C法N的分类结果偏高。结论就胸、腹腔积液细胞分类的临床意义出发,应对胸、腹腔积液进行离心涂片,固定后采用瑞特染液染色、稀释的吉姆萨染液复染,可使细胞结构更为清晰。积液细胞分类时撇开间皮细胞,仅对其中的白细胞进行分类对临床诊断更有价值。而间皮细胞和癌细胞则以成团、散在、可见报告更为客观。

关键词：胸腹腔积液细胞分类

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血凝仪检测系统精密度的评价方法与结果分析

实验与检验医学 2009年第5期27卷 491-492页

作者：胡意钟伟祥万腊根南昌大学一附院检验科 330006

目的探讨检测系统精密度的评估方法和评估结果的意义。方法用CA-1500对ControlⅠ和ControlⅡ连续测定PT、APTT、TT及Fg两次,2小时后再对ControlⅠ和ControlⅡ连续测定PT、APTT、TT及Fg两次,连续20天,每个项目共获得40对数据80个结果。按... 详细信息

目的探讨检测系统精密度的评估方法和评估结果的意义。方法用CA-1500对ControlⅠ和ControlⅡ连续测定PT、APTT、TT及Fg两次,2小时后再对ControlⅠ和ControlⅡ连续测定PT、APTT、TT及Fg两次,连续20天,每个项目共获得40对数据80个结果。按照EP5-A2文件进行统计分析,得出批内标准差(Swr)、批间标准差(Srr)天间标准差(Sdd)、总标准差(S总)和平均值(X),再按S/X公式换算出批内变异系数(CVwr)、批间变异系数(CVrr),天间变异系数(CVdd)及总变异系数(CV总)。再按照文献提出的以CLIA'88的室间质评能力(PT)为参考标准,要求批内不精密度应小于1/4PT,天间不精密度应小于1/3PT,总不精密度应小于1/2PT为判断CA-1500检测系统精密度是否符合临床要求[2]。结果CA-1500测定ControlⅠ、ControlⅡ得PT、APTT、TT及Fg四个项目不精密度的结果中,PT、Fg、TT的批内不精密度大于1/4PT,不符合临床要求而其总不精密度又小于1/2PT,又符合临床要求的三对矛盾结果。结论精密度是检测系统最重要的性能,最好按照EP-5A2文件的方法评估检测系统的精密度,且应选择医学决定水平浓度处的样品或异常值样品作为评估检测系统精密度的样品,它更有利于评估检测系统临床应用的意义,而检测系统批内、天间及总精密的临床标准要求参考CLIA,88室间质评能力(PT)的标准是否科学,值得大家深入研究。

关键词：血凝仪精密度凝血四项

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血凝仪检测系统建精密度评价方法与结果分析

血凝仪检测系统建精密度评价方法与结果分析