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神经前体细胞表达下调因子8类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响

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中国药理学与毒理学杂志 2015年第3期29卷 424-429页

作者：裴钰君朱宁郭银汉王庆阳北京中医药大学中药学院北京100029 军事医学科学院基础医学研究所免疫学研究室北京100850

目的观察神经前体细胞表达下调因子8（NEDD8）类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法 MLN4924 0.25~4.0μmol·L-1与U937细胞、THP-1细胞、Mo7e细胞和RAW264.7细胞作用24 h,采用MTT法检... 详细信息

目的观察神经前体细胞表达下调因子8（NEDD8）类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法 MLN4924 0.25~4.0μmol·L-1与U937细胞、THP-1细胞、Mo7e细胞和RAW264.7细胞作用24 h,采用MTT法检测细胞存活。MLN4924 0.25~8.0μmol·L-1与RAW264.7细胞作用24 h,用Western蛋白质印迹法检测NEDD8类泛素化修饰的主要底物cullin蛋白表达水平。MLN4924 0.5μmol·L-1作用于RAW264.7细胞24 h,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率。结果 MLN4924 0.25~4.0μmol·L-1作用24 h对RAW264.7细胞、U937细胞、THP-1细胞和Mo7e细胞增殖具有抑制作用,IC50分别为0.52,3.11,2.89和0.76μmol·L-1;对正常小鼠骨髓巨噬细胞增殖无明显影响。MLN4924 0.25~8.0μmol·L-1作用24 h,NEDD8类泛素化修饰的cullin蛋白表达减少（P〈0.01）,表明RAW264.7细胞NEDD8修饰逐渐减少。MLN4924 0.5,1.0和2.0μmol·L-1作用于RAW264.7细胞24 h,G0/G1期细胞百分率由正常对照组的（61.3±1.3）%分别升高到（64.5±1.5）%（P〈0.05）,（69.5±2.3）%（P〈0.01）和（72.8±1.7）%（P〈0.01）,细胞凋亡率由正常对照组的（1.5±0.3）%分别升高到（2.3±0.5）%,（4.3±0.9）%（P〈0.05）和（7.5±0.8）%（P〈0.01）。结论 MLN4924能够明显抑制单核巨噬细胞白血病细胞增殖,并诱导其细胞周期阻滞和细胞凋亡。

关键词： MLN4924 神经前体细胞表达下调因子8 单核细胞白血病细胞增殖细胞凋亡

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健脾颗粒的制备工艺及质量比较

中国实验方剂学杂志 2012年第22期18卷 59-61页

作者：刘汝萍崔兵余启荣张京娜刘小妮郭银汉北京中医药大学北京100029 北京创立科创医药技术开发有限公司北京100029 百善(唐山)药业有限公司河北唐山064400

目的:探索无糖型健脾颗粒的成型处方和制备工艺,确定其可行性和合理性。方法:对无糖型健脾颗粒与健脾颗粒的成型处方和制备工艺进行对比,采用HPLC和TLC对2种颗粒剂进行定量和定性研究。结果:采用乳糖、糊精制备的无糖型健脾颗粒完全符合... 详细信息

目的:探索无糖型健脾颗粒的成型处方和制备工艺,确定其可行性和合理性。方法:对无糖型健脾颗粒与健脾颗粒的成型处方和制备工艺进行对比,采用HPLC和TLC对2种颗粒剂进行定量和定性研究。结果:采用乳糖、糊精制备的无糖型健脾颗粒完全符合2010年版《中国药典》要求;2种颗粒均可检出白术、陈皮和枳实;无糖型健脾颗粒中橙皮苷质量分数10.15 mg·g-1,健脾颗粒10.64 mg·g-1。结论:无糖型健脾颗粒可完全替代健脾颗粒,且该制剂的质量稳定、服用剂量小、解除禁糖患者的用药限制,扩大了临床应用范围。

关键词：无糖型健脾颗粒成型处方制备工艺薄层色谱法高效液相色谱法

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黄病毒载体技术

病毒学报 2005年第6期21卷 485-487页

作者：郭银汉王晓鹏 Xiaowu Pang Xinbin Gu 北京东方天甲科技发展有限公司北京100006 TenGen Biomedical Co. MarylandUSA Howard University WashingtonD.C.USA

随着人们对病毒生活周期、分子生物学及其与疾病发生发展关系的深入认识,病毒载体逐渐成为科学研究的焦点和热点.病毒载体作为一种基因导入系统,在疫苗和基因治疗中发挥极其重要的作用,一些以病毒作为载体的疫苗和基因治疗药物已进入临... 详细信息

随着人们对病毒生活周期、分子生物学及其与疾病发生发展关系的深入认识,病毒载体逐渐成为科学研究的焦点和热点.病毒载体作为一种基因导入系统,在疫苗和基因治疗中发挥极其重要的作用,一些以病毒作为载体的疫苗和基因治疗药物已进入临床研究阶段,并取得了很大的进展.本文拟对目前黄病毒载体技术的最新进展作一综述.……

关键词：病毒载体载体技术基因治疗药物分子生物学生活周期发生发展导入系统科学研究临床研究疫苗

含2A片段的重组黄热病毒17D疫苗表达载体的构建

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生物工程学报 2006年第3期22卷 492-498页

作者： XiaowuPang 付文川郭银汉张立树谢天培 Xinbin Gu 北京东方天甲科技发展有限公司北京100078 天甲丽珠生物科技有限公司香港霍华德大学医学院华盛顿20059美国

黄热疫苗是一种减毒的黄热病毒17D(YF-17D)活疫苗,是现有疫苗中最安全、最有效的疫苗之一,适于发展为疫苗载体。用RT-PCR法扩增出覆盖YF-17D全长基因组的3个cDNA片段:5′cDNA(A)、3′cDNA(B)和中间cDNA(C),同时引入SP6增强子序列、酶切... 详细信息

黄热疫苗是一种减毒的黄热病毒17D(YF-17D)活疫苗,是现有疫苗中最安全、最有效的疫苗之一,适于发展为疫苗载体。用RT-PCR法扩增出覆盖YF-17D全长基因组的3个cDNA片段:5′cDNA(A)、3′cDNA(B)和中间cDNA(C),同时引入SP6增强子序列、酶切位点和重复序列。顺序将A和B同***-yeast穿梭质粒pRS424连接,再与C共转染酵母菌,利用缺少色氨酸和尿嘧啶的选择性固体培养基筛选出含YF-17D全长基因组的cDNA质粒。以该质粒为模板,经过DNA重组和酵母同源重组,获得含有口蹄疫病毒蛋白水解酶2A片段的重组YF-17D表达载体。将该表达载体体外转录后,电击转染BHK-21细胞。间接免疫荧光检测结果表明,RNA转录体在BHK-21细胞中进行了稳定的表达;滴度测定与形态学观察结果表明,重组病毒在细胞中的生长曲线等特征同母本YF-17D十分相似。结果提示,利用酵母菌同源重组在2A部位引入异种抗原基因,重组YF-17D表达载体pRS-YF-2A1具有成为高效活疫苗表达载体的潜力。

关键词：黄热病毒17D,表达载体,2A片段,全长cDNA,同源重组

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对虾病毒性白斑病的流行病学

中山大学学报（自然科学版） 2000年第Z1期39卷 190-194页

作者：郭银汉林诗发杨小强张诚谢联辉福建农业大学病毒研究所福州350002 福州市海洋生物工程研究开发中心福州350026

在福州地区分离到一种高致病性的白斑病病毒 ,该病毒致病性强 ,可感染不同品种、不同生长期和不同形体大小的个体 .引发的病害潜育期短、病程短、死亡率高 .病害覆盖面积广 ,发病时间大多集中在 6月和 9月 ,其中以 6月中下旬最为集中 .... 详细信息

在福州地区分离到一种高致病性的白斑病病毒 ,该病毒致病性强 ,可感染不同品种、不同生长期和不同形体大小的个体 .引发的病害潜育期短、病程短、死亡率高 .病害覆盖面积广 ,发病时间大多集中在 6月和 9月 ,其中以 6月中下旬最为集中 .以长毛对虾为对象测定温度与侵染性关系 ,结果表明 ,高温可促进发病 ,低温可延缓发病并延长病程 ;在长毛对虾生长的适温范围 (8～ 32℃ )内 ,病毒均可侵染并造成寄主发病 .病毒的感染途径主要是经口感染 ,通过摄食饵料和携带病原的病弱个体等方式传播 ,正常情况下 ,不会经水传播 .

关键词：对虾白斑病病毒流行病学

Sdha基因敲低对小鼠肝细胞BNL CL.2细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

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中国药理学与毒理学杂志 2016年第2期30卷 107-112页

作者：李欣曹焕玲赵亚伟郭银汉王庆阳北京中医药大学中药学院北京100029 军事医学科学院基础医学研究所免疫学研究室北京100850

目的探讨琥珀酸脱氢酶复合物亚单位A(SDHA)对小鼠肝细胞BNL CL.2细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法用慢病毒载体介导的sh RNA敲低BNL CL.2细胞中sdha基因的表达。流式细胞仪检测慢病毒的感染效率;实时荧光定量PCR和Western蛋白印迹... 详细信息

目的探讨琥珀酸脱氢酶复合物亚单位A(SDHA)对小鼠肝细胞BNL CL.2细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法用慢病毒载体介导的sh RNA敲低BNL CL.2细胞中sdha基因的表达。流式细胞仪检测慢病毒的感染效率;实时荧光定量PCR和Western蛋白印迹法分别检测sdha m RNA和SDHA蛋白表达水平;细胞计数法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果无相关sh RNA对照组和sdha sh RNA组慢病毒的感染效率均>80%。与无相关sh RNA对照组相比,感染sdha sh RNA慢病毒载体的BNL CL.2细胞sdha m RNA水平降低20倍左右(P<0.01),蛋白表达水平降低10倍左右(P<0.01);细胞增殖速度减慢,为无相关sh RNA对照组的70%左右(P<0.05);细胞周期发生改变,G0/G1期细胞百分率是无相关sh RNA对照组的1.17倍(P<0.01),G2/M期细胞百分率为1.37倍(P<0.01),S期细胞百分率为73.8%(P<0.01);但细胞凋亡率无明显差异。结论降低SDHA表达对小鼠肝细胞BNL CL.2细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制作用与细胞周期阻滞相关,与细胞凋亡无明显关系。

关键词：琥珀酸脱氢酶复合物亚单位A BNL CL.2细胞细胞增殖细胞周期细胞凋亡

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福州地区对虾白斑病病毒的超微结构

中国病毒学 2000年第3期15卷 277-284页

作者：郭银汉林诗发杨小强张诚谢联辉福建农业大学病毒研究所福州350002 福州市海洋生物工程研究开发中心福州350026

在福州地区分离到一种高致病性的白斑病病毒 ,该病毒仅存在于细胞质中 ,完整的病毒粒子有囊膜 ,一端略圆 ,一端稍尖 ,直径约为 80～ 10 0nm ,囊膜与核衣壳之间的间隙约为 2 0～ 2 5nm。该病毒在细胞内不形成包含体 ,但有些可形成封入体... 详细信息

在福州地区分离到一种高致病性的白斑病病毒 ,该病毒仅存在于细胞质中 ,完整的病毒粒子有囊膜 ,一端略圆 ,一端稍尖 ,直径约为 80～ 10 0nm ,囊膜与核衣壳之间的间隙约为 2 0～ 2 5nm。该病毒在细胞内不形成包含体 ,但有些可形成封入体。负染观察到的病毒核衣壳呈直杆状 ,但长度和直径相差较大 ,最长的病毒超过 6 0 0nm。这些特征与其它已报道的白斑病病毒有所不同 ,因此暂将它称为“对虾白斑病病毒福州分离株”。

关键词：对虾白斑病病毒福州地区分离株超微结构

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丹酚酸B抗前列腺肿瘤的作用

滨州医学院学报 2007年第1期30卷 11-12页

作者：宋晓冬杨玥杨军厚谭秀华郭银汉滨州医学院生物学教研室滨州市256603 北京东方科技发展有限公司

目的观察丹酚酸B抗前列腺肿瘤的作用。方法采用光镜观察形态变化、台盼蓝计数死细胞数、MTT测定细胞活力、流式细胞仪检测细胞凋亡率评价丹酚酸B的抗肿瘤作用。结果丹酚酸B 500μg/ml具有抗前列腺肿瘤作用,引起肿瘤细胞凋亡。结论经丹酚... 详细信息

目的观察丹酚酸B抗前列腺肿瘤的作用。方法采用光镜观察形态变化、台盼蓝计数死细胞数、MTT测定细胞活力、流式细胞仪检测细胞凋亡率评价丹酚酸B的抗肿瘤作用。结果丹酚酸B 500μg/ml具有抗前列腺肿瘤作用,引起肿瘤细胞凋亡。结论经丹酚酸B作用后的BPH1-C5细胞发生凋亡,丹酚酸B具有抗肿瘤作用。

关键词：丹酚酸B 前列腺肿瘤凋亡

Neddylation抑制因子MLN4924对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞恶性生长的影响与机制

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