含2A片段的重组黄热病毒17D疫苗表达载体的构建

作     者：XiaowuPang 付文川 郭银汉 张立树 谢天培 Xinbin Gu Xiaowu Pang;FU Wen-Chuan;GUO Yin-Han;ZHANG Li-Shu;XIE Tian-Pei;Xinbin Gu

作者机构：北京东方天甲科技发展有限公司北京100078 天甲丽珠生物科技有限公司香港 霍华德大学医学院华盛顿20059美国 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2006年第22卷第3期

页      面：492-498页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：华瀚生物制药控股有限公司资助 丽珠医药生物科技有限公司资助~~ 

主　　题：黄热病毒17D,表达载体,2A片段,全长cDNA,同源重组 

摘      要：黄热疫苗是一种减毒的黄热病毒17D(YF-17D)活疫苗,是现有疫苗中最安全、最有效的疫苗之一,适于发展为疫苗载体。用RT-PCR法扩增出覆盖YF-17D全长基因组的3个cDNA片段:5′cDNA(A)、3′cDNA(B)和中间cDNA(C),同时引入SP6增强子序列、酶切位点和重复序列。顺序将A和B同***-yeast穿梭质粒pRS424连接,再与C共转染酵母菌,利用缺少色氨酸和尿嘧啶的选择性固体培养基筛选出含YF-17D全长基因组的cDNA质粒。以该质粒为模板,经过DNA重组和酵母同源重组,获得含有口蹄疫病毒蛋白水解酶2A片段的重组YF-17D表达载体。将该表达载体体外转录后,电击转染BHK-21细胞。间接免疫荧光检测结果表明,RNA转录体在BHK-21细胞中进行了稳定的表达;滴度测定与形态学观察结果表明,重组病毒在细胞中的生长曲线等特征同母本YF-17D十分相似。结果提示,利用酵母菌同源重组在2A部位引入异种抗原基因,重组YF-17D表达载体pRS-YF-2A1具有成为高效活疫苗表达载体的潜力。