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构建含人脑源性神经营养因子基因的逆转录表达载体及其在成纤维细胞中的表达

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中国修复重建外科杂志 2009年第5期23卷 588-591页

作者：杨成鄢荣曾郭红延顾晓明武警总医院口腔科北京100039 武警江西总队医院口腔科

目的构建含有人脑源性神经营养因子(human brain-derived neurotrophic factor,hBDNF)的逆转录病毒载体pLXSN(hBDNF-pLXSN),鉴定hBDNF生物活性。方法提取自愿捐献5月龄胎儿脑组织基因组mRNA,应用RT-PCR技术获得hBDNF基因序列,体外构建hBDNF-pLXSN感染的成纤维细胞NIH/3T3。对其进行病毒滴度检测,采用免疫组织化学染色鉴定NIH/3T3细胞中hBDNF的表达。通过对PC12细胞和大鼠背根神经节的培养,分析hBDNF生物学活性。结果测序结果表明成功构建了hBDNF-pLXSN。被感染的NIH/3T3细胞免疫组织化学染色显示胞浆中有hBDNF表达。hBDNF-pLXSN具有促进PC12细胞增殖的作用,并可以使培养的背根神经节长出神经突。结论hBDNF-pLXSN病毒可以感染NIH/3T3细胞并使其表达和分泌具有生物学活性的hBDNF,可以作为面瘫基因治疗研究的工具。

关键词：人脑源性神经营养因子基因转染成纤维细胞逆转录病毒

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牙髓干细胞研究进展

现代口腔医学杂志 2005年第5期19卷 528-530页

作者：郭红延王常勇吴补领军事医学科学院基础医学研究所北京100850 第四军医大学口腔医学院口腔内科

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,它包括胚胎干细胞和成体干细胞.牙髓干细胞具有成体干细胞所界定的两大特征:较强的自我更新能力和分化潜能.牙髓干细胞因具有临床取材容易并可特异性地分化为牙体矿化结构等特性,目前正受到... 详细信息

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,它包括胚胎干细胞和成体干细胞.牙髓干细胞具有成体干细胞所界定的两大特征:较强的自我更新能力和分化潜能.牙髓干细胞因具有临床取材容易并可特异性地分化为牙体矿化结构等特性,目前正受到广泛关注.

关键词：干细胞研究牙髓干细胞自我更新能力成体干细胞分化潜能胚胎干细胞细胞因

肌肉组织工程的基础研究-肌肉冻伤模型的建立

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现代口腔医学杂志 2008年第5期22卷 514-516页

作者：杨成郭红延顾晓明武警总医院口腔医学中心北京100039

目的为研究卫星细胞在表情肌修复中的作用，需要建立动物模型。本实验通过冷冻的原理建立肌肉冻伤模型，并研究该模型在肌肉组织工程研究中的可行性。方法取18只8周龄c57小鼠随机分6组．采用液氮冷冻头冷冻腓肠肌的中下部分，每次40s，... 详细信息

目的为研究卫星细胞在表情肌修复中的作用，需要建立动物模型。本实验通过冷冻的原理建立肌肉冻伤模型，并研究该模型在肌肉组织工程研究中的可行性。方法取18只8周龄c57小鼠随机分6组．采用液氮冷冻头冷冻腓肠肌的中下部分，每次40s，通过2个冻融周期，建立c57小鼠腓肠肌的冻伤模型。分别于3天，1、2．4、6、8周取材，通过采用苏木精一伊红染色观察骨骼肌受冻伤后肌组织病理变化，研究肌肉在冻伤下的自我修复能力和冻伤后组织学变化，确定植入卫星细胞的最佳时机。结果实验证实冷冻条件下可以造成肌肉的完全性损坏，4周后肌肉的原有结构完全消失，8周后表现为均质的变性，没有再生现象。2—4周是移植细胞的最佳时机。结论冻伤后骨骼肌内未发生自体的修复，并且保留了肌肉原有的肌膜样结构，有利于研究植入卫星细胞的生物学活性，可以作为肌肉细胞移植的模型。

关键词：冷冻动物肌肉损伤模型

大鼠骨髓间充质干细胞和脂肪干细胞体外成骨能力的比较

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实用口腔医学杂志 2018年第6期34卷 730-735页

作者：卓丽丹冯顶丽芦笛郭红延李红锦州医科大学研究生院 121000 山西医科大学口腔医学院.口腔医院中国人民解放军总医院第一医学中心中国人民解放军总医院第三医学中心北京市军事医学科学院

目的:比较大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs)与脂肪干细胞(ADSCs)成骨分化能力。方法:取同一大鼠髂骨及腹股沟脂肪组织,分别提取BMSCs和ADSCs,贴壁筛选培养并传代。显微镜下观察细胞形态;用P3代细胞计数法检测细胞的增殖能力;诱导成骨后进... 详细信息

目的:比较大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs)与脂肪干细胞(ADSCs)成骨分化能力。方法:取同一大鼠髂骨及腹股沟脂肪组织,分别提取BMSCs和ADSCs,贴壁筛选培养并传代。显微镜下观察细胞形态;用P3代细胞计数法检测细胞的增殖能力;诱导成骨后进行碱性磷酸酶染色、茜素红染色以及q PCR检测成骨相关基因。结果:2种细胞均可传代至P10代,细胞形态均一,稳定;细胞增殖实验显示P3代ADSCs的增殖能力强于BMSCs;碱性磷酸酶染色及茜素红染色表明BMSCs成骨能力强于ADSCs; q PCR显示BMSCs成骨相关基因升高更为显著。结论:BMSCs和ADSCs生物学性状稳定,具有成骨分化潜能,BMSCs成骨能力强于ADSCs。

关键词：骨髓间充质干细胞(BMSCs) 脂肪干细胞(ADSCs) 定向诱导成骨分化

鼠牙乳头细胞核心结合因子cDNA片段的克隆与序列测定

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第三军医大学学报 2001年第11期23卷 1309-1311页

作者：郭红延吴补领郭希民陆怀秀余擎第四军医大学口腔医学院牙体科西安710032

目的　从培养的大鼠牙乳头细胞中克隆核心结合因子 (cbfa1)的cDNA片段。方法　原代培养大鼠牙乳头细胞 ,提取培养细胞的总RNA ,逆转录合成cDNA ,用PCR的方法扩增cbfa1基因片段。将获得的预期大小的PCR产物插入pUC18克隆载体中 ,转化TOP1... 详细信息

目的　从培养的大鼠牙乳头细胞中克隆核心结合因子 (cbfa1)的cDNA片段。方法　原代培养大鼠牙乳头细胞 ,提取培养细胞的总RNA ,逆转录合成cDNA ,用PCR的方法扩增cbfa1基因片段。将获得的预期大小的PCR产物插入pUC18克隆载体中 ,转化TOP10感受态细胞 ,蓝白筛选白色克隆 ,进行体外扩增 ,提取质粒进行酶切鉴定 ,含目的插段的克隆在PE317 A自动测序仪上进行序列测定。结果　从培养的鼠牙乳头细胞提取的总RNA中成功克隆出 6 91bpcbfa1基因片段 ,测序结果和GenBank报道序列完全一致。结论　从鼠牙乳头细胞中成功克隆到cbfa1基因片段 ,确切的证实了核心结合因子 (cbfa1)基因在鼠牙乳头细胞中的表达。

关键词：鼠牙乳头细胞核心结合因子 cDNA片段基因表达成骨细胞转录因子

不同炎性微环境对脂肪来源间充质干细胞增殖及分化的影响

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实用口腔医学杂志 2020年第6期36卷 845-849页

作者：原芳芳王丽刘伟吴松芳郭红延山西医科大学口腔医学院·口腔医院太原030001 锦州医科大学研究生院北京军事科学院军事医学研究所

目的:研究不同类型巨噬细胞介导的炎性微环境对脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)增殖和分化的影响。方法:利用M1、M2型巨噬细胞条件培养基(conditioned media,CMs)模拟不同的炎性微环境。分别在不同环境下(CM1组、CM2组以及Norm组)培养并诱... 详细信息

目的:研究不同类型巨噬细胞介导的炎性微环境对脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)增殖和分化的影响。方法:利用M1、M2型巨噬细胞条件培养基(conditioned media,CMs)模拟不同的炎性微环境。分别在不同环境下(CM1组、CM2组以及Norm组)培养并诱导ADSCs。利用CCK-8法检测细胞增殖能力,茜素红染色、油红O染色以及RT-PCR检测各组细胞成骨或成脂情况。结果:CCK-8检测结果显示CM1组ADSCs增殖能力强于其他两组;茜素红染色及RT-PCR检测结果显示CM2可显著提高ADSCs成骨能力;油红O染色及RT-PCR检测结果显示CM1可显著提高ADSCs成脂能力。结论:CM1可以增强ADSCs的增殖和脂肪形成能力,CM2对ADSCs的成骨分化有显著促进作用。

关键词：巨噬细胞条件培养基炎性微环境脂肪干细胞(ADSCs) 细胞分化

DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达

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实用口腔医学杂志 2005年第5期21卷 614-617页

作者：郭红延徐蓬郭希民余擎高杰吴补领王常勇北京武警总医院口腔科 100039 北京军事医学科学院基础医学研究所西安第四军医大学口腔医学院

目的检测DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达,为大鼠牙髓干细胞的生物学功能研究提供基础。方法采用免疫组织化学染色的方法,对DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达进行检测,然后采用矿化液对大鼠牙髓干细胞... 详细信息

目的检测DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达,为大鼠牙髓干细胞的生物学功能研究提供基础。方法采用免疫组织化学染色的方法,对DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达进行检测,然后采用矿化液对大鼠牙髓干细胞进行诱导,并对诱导后细胞进行DSP、DMP1表达的检测。结果大鼠牙髓干细胞DMP1仅个别细胞阳性表达,DSP少量细胞阳性表达,CBFA1、BMP2为阳性染色。经矿化液诱导后,大鼠牙髓干细胞DSP染色出现部分细胞强阳性,DMP1出现阳性结果。结论CBFA1、BMP2阳性表达表明大鼠牙髓干细胞具有一定的未成熟性,而经过诱导后出现牙本质特异性DSP的表达,表明大鼠牙髓干细胞可以被诱导向成牙本质细胞方向分化。

关键词：牙本质涎蛋白牙本质基质蛋白核心结合因子1 骨形成蛋白质类牙髓干细胞大鼠

大鼠棕色脂肪干细胞与白色脂肪干细胞成骨能力的比较

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中华口腔医学杂志 2018年第11期53卷 771-776页

作者：冯顸丽卓丽丹芦笛李红王妍郭红延山西医科大学口腔医学院·口腔医院太原03000l 武警总医院口腔医学中心北京100039 军事科学院军事医学研究所北京100850 解放军总医院整形科北京100853

目的比较大鼠棕色脂肪干细胞（brown adipose stem cell，BADSC）和白色脂肪干细胞（white adipose stem cell，WADSC）的体外成骨能力，为脂肪源性干细胞的进一步研究和临床应用提供依据。方法分离SD大鼠肩胛骨下棕色脂肪及腹股沟处白... 详细信息

目的比较大鼠棕色脂肪干细胞（brown adipose stem cell，BADSC）和白色脂肪干细胞（white adipose stem cell，WADSC）的体外成骨能力，为脂肪源性干细胞的进一步研究和临床应用提供依据。方法分离SD大鼠肩胛骨下棕色脂肪及腹股沟处白色脂肪组织，获得BADSC和WADSC。倒置相差显微镜观察细胞形态，细胞计数检测增殖能力。成骨诱导后进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）染色及茜素红染色。实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）检测成骨标志基因[Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor-2，RUNX2）、骨钙蛋白]的表达情况。结果BADSC和WADSC均可成骨向分化。成骨诱导后各时间点BADSC的ALP活性均显著大于WADSC；成骨诱导5周后BADSC形成面积较大的钙结节（累积光密度为92 558±1 507），显著大于WADSC（累积光密度为52 319±1 786）（t=29.81，P〈0.05）。BADSC成骨标志基因（RUNX2和骨钙蛋白）的表达均显著大于相同时间点WADSC（P〈0.05）。结论BADSC和WADSC均具有成骨分化的潜能，但BADSC成骨分化能力强于WADSC。

关键词：干细胞组织工程脂肪干细胞成骨分化

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重建牙本质-牙髓复合体样结构的实验研究

中华口腔医学杂志 2005年第6期40卷 511-514页

作者：郭红延吴补领郭希民杨成徐蓬王常勇武警总医院口腔科北京100039 第四军医大学口腔医学院牙体牙髓科军事医学科学院基础医学研究所

目的采用组织工程学的方法重建牙本质-牙髓复合体样结构。方法以大鼠牙髓干细胞为种子细胞,将羟基磷灰石-磷酸三钙(HA-TCP)复合支架材料接种至裸鼠背部皮下,8周后取材进行组织学及免疫组织化学检测。结果移植物组织学切片可见支架材料... 详细信息

目的采用组织工程学的方法重建牙本质-牙髓复合体样结构。方法以大鼠牙髓干细胞为种子细胞,将羟基磷灰石-磷酸三钙(HA-TCP)复合支架材料接种至裸鼠背部皮下,8周后取材进行组织学及免疫组织化学检测。结果移植物组织学切片可见支架材料孔隙内有3层组织结构,由外向内分别为矿化牙本质、前期牙本质及牙髓组织,其中牙本质小管明显,牙髓组织外层细胞密集,部分出现极化,呈现出成牙本质细胞样细胞特征。免疫组织化学染色证实人牙本质特异性蛋白、DMP1在前期牙本质区及成牙本质细胞样细胞为阳性表达。结论采用牙髓干细胞为种子细胞、HA-TCP为支架材料可成功构建牙本质-牙髓复合体样结构,为进一步进行牙齿组织工程再造奠定基础。

关键词：牙本质牙髓组织工程