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孕激素治疗子宫内膜癌研究进展

中国临床药理学与治疗学 2024年第2期29卷 230-235页

作者：张立仪郭紫芬南华大学衡阳医学院药学院药物药理研究所湖南衡阳421001

子宫内膜癌原发于子宫内膜,是常见的妇科恶性肿瘤之一,其发病率及死亡率仍在逐年上升。虽然子宫内膜癌多见于围绝经期和绝经后女性,但近年来该病有着明显的年轻化趋势。对于未生育但有生育意愿的年轻患者,应用孕激素治疗子宫内膜癌近年... 详细信息

子宫内膜癌原发于子宫内膜,是常见的妇科恶性肿瘤之一,其发病率及死亡率仍在逐年上升。虽然子宫内膜癌多见于围绝经期和绝经后女性,但近年来该病有着明显的年轻化趋势。对于未生育但有生育意愿的年轻患者,应用孕激素治疗子宫内膜癌近年来在临床上取得了很大的进展。鉴于孕激素临床应用个体差异大、作用机制不明确等问题,本文就孕激素的临床应用现状、疗效、孕激素抵抗及其机制进行综述。

关键词：孕激素子宫内膜癌临床应用孕激素抵抗

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抗人血栓调节蛋白单克隆抗体的制备及初步应用研究

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抗人血栓调节蛋白单克隆抗体的制备及初步应用研究

作者：郭紫芬南华大学

学位级别：硕士

目的:建立稳定表达人血栓调节蛋白(hTM)的克隆细胞株,制备抗hTM单克隆抗体(McAb),为心血管疾病的研究提供基础。方法:(1) 重组表达质粒pThr402提纯后经lipofectamine脂质体转染CHO,经G418筛选,流式细胞术及Western blotting检测,获得稳... 详细信息

目的:建立稳定表达人血栓调节蛋白(hTM)的克隆细胞株,制备抗hTM单克隆抗体(McAb),为心血管疾病的研究提供基础。方法:(1) 重组表达质粒pThr402提纯后经lipofectamine脂质体转染CHO,经G418筛选,流式细胞术及Western blotting检测,获得稳定高表达hTM的克隆细胞株CHO-TM。(2) 采用CHO-TM细胞作为免疫原,免疫Balb/c雌性小鼠,按常规方法融合并经CELISA法筛选,制备稳定分泌抗人血栓调节蛋白MaAb的克隆细胞株,并对McAb的亚类、免疫活性、细胞与组织特异性及识别抗原特异性进行鉴定。(3) 收集动脉粥样硬化病人血标本,将抗人血栓调节蛋白McAb应用于Western blotting检测病人的sTM水平。结果:(1) 成功获得了稳定、高效表达hTM的克隆细胞株CHO-TM1、CHO-TM3～6。其中CHO-TM6的表达量最高,阳性细胞百分率与平均荧光强度分别为89.00%和9.84。(2) 成功制备了抗人血栓调节蛋白McAb,命名为NH-1。琼脂糖免疫双扩散法鉴定NH-1的重链为IgGl亚类。CELISA法测定其腹水效价为5×10,M750-B紫外分光光度仪测定腹水抗体含量为20mg/ml。流式细胞仪检测该抗体与CHO-TM6和HUVEC呈阳性反应,与CHO及正常人外周红细胞、白细胞、未活化血小板呈阴性反应。ABC免疫组织化学法检测正常人组织切片显示其该抗体除与子宫和前列腺有交叉反应外,与小肠、胸腺、脾、甲状腺、胆囊、卵巢、膀胱、肝脏、肾脏、胃等组织呈阴性反应,各组织中的血管内皮细胞均有hTM表达。Western blotting分析显示McAb NH-1可特异地识别还原条件下相对分子量为105KD左右的蛋白多肽。(3) McAb NH-1可用于Western blotting检测动脉粥样硬化病人的sTM水平。结论:(1) 获得了稳定、高效表达hTM的克隆细胞株CHO-TM1、CHO-TM3～6;(2) 制备了一株具有较高免疫活性和细胞、组织特异性的抗人血栓调节蛋白McAb NH-1,并成功用于动脉粥样硬化病人sTM水平的Western blotting检测。

关键词：血栓调节蛋白单克隆抗体稳定表达鉴定应用

环磷酰胺免疫删减法制备细胞表面抗原单克隆抗体小鼠模型的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第11期24卷 1099-1101页

作者：郭紫芬何淑雅朱炳阳廖端芳南华大学药物药理研究所湖南衡阳421001 南华大学生物化学教研室湖南衡阳421001

目的:观察不同剂量环磷酰胺(CP)诱导免疫耐受的作用,建立一个免疫删减法制备细胞表面抗原单克隆抗体(mAb)的动物免疫模型。方法:雌性BALB/c小鼠经CHO细胞免疫后分别给予不同剂量的CP诱导免疫耐受,选择血清抗体效价最低的一组小鼠按常规... 详细信息

目的:观察不同剂量环磷酰胺(CP)诱导免疫耐受的作用,建立一个免疫删减法制备细胞表面抗原单克隆抗体(mAb)的动物免疫模型。方法:雌性BALB/c小鼠经CHO细胞免疫后分别给予不同剂量的CP诱导免疫耐受,选择血清抗体效价最低的一组小鼠按常规方式腹腔注射CHO-TM5细胞进行免疫。ELISA测定各小鼠血清中CHO抗体及CHO-TM5抗体效价,检测血清抗体对CHO细胞与CHO-TM5细胞结合反应的差异性。结果:BALB/c小鼠腹腔注射不同剂量的CP后,各剂量组均出现不同程度的免疫耐受作用。CP100mg/kg组与CP125mg/kg组小鼠血清抗体效价较低,接近阴性对照组。ELISA检测显示CP100mg/kg组血清抗体与CHO-TM5细胞呈阳性结合反应,不与CHO细胞结合;而CP0mg/kg组血清抗体与CHO细胞与CHO-TM5细胞的结合反应均呈阳性。结论:CP100mg/kg具有良好诱导小鼠对CHO和CHO-TM5细胞的共同抗原表位产生免疫耐受,相对增强对CHO-TM5细胞目的抗原hTM的免疫应答的作用,为免疫删减法制备细胞表面抗原mAb提供了一个理想的动物免疫模型。

关键词：免疫耐受环磷酰胺细胞表面抗原 ELISA

利用hTM表达细胞株制备抗人血栓调节蛋白单克隆抗体

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生物化学与生物物理进展 2009年第4期36卷 441-447页

作者：郭紫芬何淑雅朱炳阳李斌元廖端芳南华大学药物药理研究所衡阳421001 南华大学生物化学教研室衡阳421001

为了研制抗人血栓调节蛋白(hTM)的单克隆抗体(mAb),给经CHO细胞免疫的BALB/c小鼠腹腔注射环磷酰胺诱导其对CHO和CHO-TM5细胞的共同抗原表位产生免疫耐受,再用高效表达hTM的CHO-TM5常规免疫小鼠.细胞融合后,ELISA筛选分泌抗hTM的特异性mA... 详细信息

为了研制抗人血栓调节蛋白(hTM)的单克隆抗体(mAb),给经CHO细胞免疫的BALB/c小鼠腹腔注射环磷酰胺诱导其对CHO和CHO-TM5细胞的共同抗原表位产生免疫耐受,再用高效表达hTM的CHO-TM5常规免疫小鼠.细胞融合后,ELISA筛选分泌抗hTM的特异性mAb阳性克隆,并将其腹腔注射BALB/c小鼠诱生腹水.腹水中的mAb经亲和层析纯化后,采用ELISA、流式细胞术、免疫组织化学染色法及Westernblotting对其进行特异性鉴定.结果显示,共获得了5株阳性克隆,其中2F7可稳定分泌IgG1亚型的mAb,腹水抗体效价为1×10-6,含量为19.56g/L.2F7在体内与正常组织的交叉反应极少,对HUVEC、CHO-TM5有特异性结合,并可识别细胞裂解液还原条件下分子质量为105ku左右的蛋白质多肽.2F7的解离常数Kd约为1.22×10-9mol/L.实验结果表明,通过采用新的技术路线,直接应用hTM表达细胞株免疫小鼠,成功制备了具有高度特异性与高亲和力的抗hTMmAb,为其他来源困难的蛋白质mAb制备提供了可借鉴的技术方案,同时2F7的研究鉴定为进一步应用抗hTMmAb进行hTM生物学功能及临床意义研究提供了新的物质基础.

关键词：免疫耐受环磷酰胺血栓调节蛋白单克隆抗体

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持续静水压对细胞增殖的影响

中国组织工程研究与临床康复 2011年第50期15卷 9353-9355页

作者：郭紫芬冯勇李凯廖端芳南华大学药物药理研究所湖南省衡阳市421001

背景:血管平滑肌细胞在静水压替代血清培养的条件下能良好生长。目的:探讨无血清水平状态下,持续性静水压对细胞增殖的影响。方法:采用自行研制的压力可调细胞培养箱在0,12,16,20,24和28kPa条件下培养血管平滑肌细胞A10与血管内皮细胞HU... 详细信息

背景:血管平滑肌细胞在静水压替代血清培养的条件下能良好生长。目的:探讨无血清水平状态下,持续性静水压对细胞增殖的影响。方法:采用自行研制的压力可调细胞培养箱在0,12,16,20,24和28kPa条件下培养血管平滑肌细胞A10与血管内皮细胞HUVEC-12。结果与结论:A10细胞在16kPa压力的条件下增殖最明显,活性最强;HUVEC-12细胞在20kPa压力的条件下增殖最明显,活性最强。说明一定范围内的静水压可促进体外培养的A10与HUVEC-12细胞增殖、使其活性增加。

关键词：高静水压无血清细胞培养血管内皮细胞:血管平滑肌细胞增殖

线粒体12SrRNA突变与耳聋相关性研究进展

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中国抗生素杂志 2015年第3期40卷 228-233页

作者：陈方方郭紫芬轩贵平南华大学药物药理研究所衡阳421001

耳聋是影响人类健康和造成人类残疾的常见疾病,它是由遗传和环境因素共同作用引起的。遗传性耳聋包括综合征型耳聋和非综合征型耳聋,其中,线粒体12S r RNA基因突变与其甚是关系密切,位于12S r RNA解码区的A1555G、C1494T、961del T/ins ... 详细信息

耳聋是影响人类健康和造成人类残疾的常见疾病,它是由遗传和环境因素共同作用引起的。遗传性耳聋包括综合征型耳聋和非综合征型耳聋,其中,线粒体12S r RNA基因突变与其甚是关系密切,位于12S r RNA解码区的A1555G、C1494T、961del T/ins C(n)等突变与氨基糖苷类抗生素耳毒性和非综合征型耳聋密切相关。A1555G和C1494T的致聋机理已得到确定:A1555G或C1494T突变在12S r RNA的A区形成一个新的结合碱基对,使12S r RNA的二级结构与细菌的1 6S r RNA更为相似,促进了氨基糖苷类抗生素与之结合,使得带该类突变的个体在使用氨基糖苷类抗生素后会发生听力缺失。通过对线粒体12S r RNA基因突变的研究,能够明确部分非综合征型耳聋的病因,从而为患者及其家族成员提供准确的遗传咨询和指导,为防聋治聋提供帮助。

关键词：线粒体DNA 12SrRNA 耳聋基因突变

聚合酶3′外切活性对3′硫化修饰引物聚合反应的影响

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中华医学遗传学杂志 2003年第4期20卷 328-330页

作者：郭紫芬陈琳玲张佳彭翠英杨向东张旭何淑雅廖端芳李凯南华大学药物药理研究所衡阳421001 津脉公司南华大学生物化学与分子生物学研究所衡阳421001

目的　探讨硫化修饰的次 3′末端不配对引物能否引发高保真 DNA聚合酶介导的聚合反应的非成熟性终止 ,即所谓聚合反应的“关”效应。方法　采用配对及非末端不配对的 3′硫化修饰引物 ,研究其对不同保真度 DNA聚合酶引物延伸反应的影响... 详细信息

目的　探讨硫化修饰的次 3′末端不配对引物能否引发高保真 DNA聚合酶介导的聚合反应的非成熟性终止 ,即所谓聚合反应的“关”效应。方法　采用配对及非末端不配对的 3′硫化修饰引物 ,研究其对不同保真度 DNA聚合酶引物延伸反应的影响。结果　非末端不配对的 3′硫化修饰引物也能引发高保真 DNA聚合酶介导的聚合反应非成熟性终止 ,而对低保真 DNA聚合酶所介导的聚合反应则无明显影响。同时 ,3′硫化修饰的配对引物对不同保真度 DNA聚合酶引物延伸反应均无影响。结论　硫化修饰的次 3′末端不配对引物与 3′末端不配对引物对引物延伸的影响相似 ,同样能引起高保真 DNA聚合酶介导的聚合反应的“关”的效应。显然 ,在单基因遗传病的诊断及单核苷酸多态性 (single nucleotide polymorphism,SNP)的高通量分析等方面 ,硫化修饰的碱基特异性引物与高保真 DNA聚合酶所构成的对 SNP敏感的“开 /关”系统 ,具有广阔的应用前景。

关键词：单核酸多态性高保真聚合酶硫化修饰引物 DNA 聚合反应单基因遗传病诊断

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临床药物治疗学教学中案例教学法的实施

基础医学教育 2014年第5期16卷 363-365页

作者：郭紫芬南华大学药理学教研室衡阳421001

案例教学是一种行之有效的教学模式,正越来越被教育界广泛关注。充分考虑南华大学药学专业的课程体系与教学现状,结合临床药物治疗学课程特征,针对临床药物治疗学课程实施案例教学过程中如何建立案例素材库、怎样组织实施案例教学、评... 详细信息

案例教学是一种行之有效的教学模式,正越来越被教育界广泛关注。充分考虑南华大学药学专业的课程体系与教学现状,结合临床药物治疗学课程特征,针对临床药物治疗学课程实施案例教学过程中如何建立案例素材库、怎样组织实施案例教学、评价和考核案例教学提出看法与建议,为培养创新型、应用型药学专业人才将来临床合理用药和开展药学服务奠定基础。

关键词：临床药物治疗学药学案例教学

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氨基糖苷类抗生素性耳聋的研究进展

实用医学杂志 2013年第23期29卷 3830-3831页

作者：轩贵平郭紫芬李天平陈方方南华大学药物药理研究所湖南省衡阳市421001

氨基糖苷类抗生素（aminoglycosideantibiotics，AmAn）是具有氨基糖与氨基环醇结构的一类抗生素，包括链霉素、新霉素、庆大霉素、阿米卡星等。AmAn对铜绿假单胞菌、肺炎杆菌、大肠杆菌等常见革兰阴性杆菌的抗生素后效应较长，目前仍... 详细信息

氨基糖苷类抗生素（aminoglycosideantibiotics，AmAn）是具有氨基糖与氨基环醇结构的一类抗生素，包括链霉素、新霉素、庆大霉素、阿米卡星等。AmAn对铜绿假单胞菌、肺炎杆菌、大肠杆菌等常见革兰阴性杆菌的抗生素后效应较长，目前仍然被用于治疗敏感需氧革兰阴性杆菌所致的严重感染，如脑膜炎和呼吸道、泌尿道、骨关节感染等。

关键词：氨基糖苷类抗生素革兰阴性杆菌耳聋铜绿假单胞菌抗生素后效应骨关节感染庆大霉素阿米卡星