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微滴式数字PCR绝对定量应用研究进展

中国预防兽医学报 2017年第8期39卷 686-690页

作者：龚永平郝中香陈珍容颜其贵四川农业大学动物医学院四川温江611130

1前言PCR是在核酸聚合酶作用下体外扩增DNA或RNA的实验技术。1985年美国科学家Kary Mullis申请了有关PCR的第一个专利[1],至此PCR发展成为科学研究领域的一项关键和常规技术,这种以PCR技术进行定性分析作为第一代PCR,此PCR也可以进行定... 详细信息

1前言PCR是在核酸聚合酶作用下体外扩增DNA或RNA的实验技术。1985年美国科学家Kary Mullis申请了有关PCR的第一个专利[1],至此PCR发展成为科学研究领域的一项关键和常规技术,这种以PCR技术进行定性分析作为第一代PCR,此PCR也可以进行定量检测,但仅能进行终点检测.

关键词：微滴绝对定量 PCR 体外扩增实验技术聚合酶实时观察 DNA 应用研究拷贝数

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大熊猫源肠球菌分布特点的研究

中国兽医科学 2015年第1期45卷 25-31页

作者：郝中香廖红刘丹郭玲杨绍林刘杰赵珊侯蓉齐敦武兰景超颜其贵四川农业大学动物医学院四川雅安625014 成都大熊猫繁育研究基地四川成都610081

采用全自动微生物分析系统VITEK 2-COMPACT,结合16SrDNA分子鉴定以及菌落形态特征分别对野生、野化和圈养环境下大熊猫源肠球菌进行鉴定,共计分离鉴定得到11种肠球菌,共计381株。野生大熊猫样品中分离得到10种肠球菌,共103株,占27.03%;... 详细信息

采用全自动微生物分析系统VITEK 2-COMPACT,结合16SrDNA分子鉴定以及菌落形态特征分别对野生、野化和圈养环境下大熊猫源肠球菌进行鉴定,共计分离鉴定得到11种肠球菌,共计381株。野生大熊猫样品中分离得到10种肠球菌,共103株,占27.03%;圈养大熊猫样品中分离得到8种肠球菌,共149株,占39.11%;野化放归前大熊猫样品分离得到6种肠球菌,放归后增加到9种,共129株,占33.86%。粪肠球菌、小肠肠球菌、坚韧肠球菌和屎肠球菌是野化和圈养大熊猫肠球菌的优势菌,粪肠球菌、鹑鸡肠球菌、鸟肠球菌和棉子糖肠球菌为野生大熊猫肠球菌的优势菌。野化大熊猫源肠球菌的种类介于野生大熊猫和圈养大熊猫之间,野化放归后,大熊猫粪便中肠球菌的种类增加,各类肠球菌所占比例更均衡,有利于放归大熊猫快速适应野外生存环境。

关键词：大熊猫肠球菌分布特点

大熊猫源轮状病毒CH-1株VP3基因的克隆与生物信息学分析

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黑龙江畜牧兽医 2015年第6期 4-8,283页

作者：侯蓉郝中香廖红郭玲刘丹杨绍林颜其贵齐敦武兰景超成都大熊猫繁育研究基地成都610081 四川农业大学动物医学院四川雅安625014

为了研究大熊猫轮状病毒VP3基因,为以后研究此基因的生物学功能、建立该病毒的检测方法以及研制新型大熊猫轮状病毒基因疫苗奠定基础,试验采用MA-104细胞培养增殖大熊猫轮状病毒CH-1株,提取总RNA,运用RT-PCR扩增外衣壳蛋白VP3基因,将其... 详细信息

为了研究大熊猫轮状病毒VP3基因,为以后研究此基因的生物学功能、建立该病毒的检测方法以及研制新型大熊猫轮状病毒基因疫苗奠定基础,试验采用MA-104细胞培养增殖大熊猫轮状病毒CH-1株,提取总RNA,运用RT-PCR扩增外衣壳蛋白VP3基因,将其与p MD19-T Simple载体连接并转化DH5α,经PCR扩增和测序分析进行鉴定,用生物信息学软件预测其功能,并构建系统进化树。结果表明:成功获得大熊猫轮状病毒VP3蛋白基因,长为2 591 bp,包含1个2 508 bp的开放阅读框,编码835个氨基酸,测序结果在Gen Bank中的登录号为HQ641295。VP3蛋白基因编码产物分子质量为97 937.91 u,最大疏水指数为2.256,最小疏水指数为-3.000;无信号肽序列;无跨膜结构;在线预测VP3有37个抗原表位;预测其可能包含10个N-糖基化位点,1个c AMP-c GMP独立蛋白激酶磷酸化位点,20个蛋白激酶C磷酸化作用位点,18个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点,1个酪氨酸激酶磷酸化作用位点,5个N-豆蔻酰化位点。大熊猫轮状病毒的VP3基因与猪轮状病毒VP3基因的进化距离最近。

关键词：大熊猫轮状病毒 VP3基因克隆生物信息学分析

大熊猫轮状病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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兽类学报 2016年第4期36卷 445-451页

作者：陈珍容廖红郝中香马磊龚永平王成东陈欣韩国全兰景超颜其贵四川农业大学动物医学院成都611130 成都大熊猫繁育研究基地成都610081 四川农业大学食品学院雅安625014

为了能对大熊猫轮状病毒的早期感染和隐性感染做出有效诊断,并为病毒定量分析提供技术支持。本研究根据Gen Bank中登录的大熊猫轮状病毒(GPRV)VP4基因序列设计1对引物,建立一种快速准确的检测大熊猫轮状病毒的荧光定量RT-PCR方法,并对... 详细信息

为了能对大熊猫轮状病毒的早期感染和隐性感染做出有效诊断,并为病毒定量分析提供技术支持。本研究根据Gen Bank中登录的大熊猫轮状病毒(GPRV)VP4基因序列设计1对引物,建立一种快速准确的检测大熊猫轮状病毒的荧光定量RT-PCR方法,并对引物浓度、退火温度和循环数进行优化,同时建立标准曲线,并将建立的荧光定量方法与常规RT-PCR方法比较。结果显示,本试验建立的荧光定量RT-PCR方法灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,比常规RT-PCR灵敏度高出至少100倍。特异性和重复性检测结果表明,该方法具有良好的特异性和较高的重复性。研究结果表明该方法可以对大熊猫轮状病毒进行稳定、可靠的检测,可以满足大熊猫轮状病毒特性研究和感染诊断的需要。

关键词：大熊猫轮状病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量RT-PCR

鲤疱疹病毒2型微滴式数字PCR快速检测方法的建立

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中国兽医科学 2016年第2期46卷 167-173页

作者：郝中香林华佘容廖红陈世界杨苗薛昌华赵珊韩国全颜其贵四川农业大学动物医学院四川成都611130 四川出入境检验检疫局技术中心四川成都610041 通威股份有限责任公司检测中心四川成都610041 四川农业大学食品学院四川雅安625014

根据GenBank上登录的鲤疱疹病毒2型(cyprinid herpesvirus 2,Cy HV-2)ORF6基因序列(登录号:JQ815364.1)用Primer Express 3.0设计并合成ORF6基因特异性引物及Taq Man探针,建立了检测鲤疱疹病毒2型的微滴式数字PCR(dd PCR)方法。结果显示,dd PCR的检测灵敏度比qPCR高5倍。特异性和重复性检测结果表明,ddPCR和qPCR均具有良好的特异性和较高的重复性。qPCR和dd PCR标准曲线的r2值分别为0.999 2和0.997 5,表明ddPCR和qPCR均具有良好的线性关系。研究结果表明,该方法可以对CyHV-2进行可靠的检测,可以满足CyHV-2特性研究和感染诊断的需要。对60份临床样品的检测结果显示,在检出阳性的34份样品中,包含肾、脾、腮、肝、心和脑,表明该病毒在这些器官均有分布,其中肾的病毒含量相对最高,脑的病毒含量相对最低。总之,本研究建立的ddPCR方法灵敏度高、特异性强、能快速检测到极低含量的病毒,适用于CyHV-2的快速检测和病原流行病学调查。

关键词：鲤疱疹病毒2型微滴式数字PCR 检测

马鞍山市2022年春季主要动物疫病免疫抗体监测情况分析

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畜牧兽医科技信息 2023年第5期 60-62页

作者：郝中香谢成芳谢长明马鞍山市农业农村局畜牧兽医技术服务中心安徽马鞍山243000

为全面掌握马鞍山市2022年春季主要动物疫病的免疫抗体水平,科学评价马鞍山市2022年春季主要动物疫病免疫抗体效果,对马鞍山市五个县(区)的11个家禽养殖(屠宰)场、23个家畜养殖(屠宰)场共1020份血清样品进行免疫抗体水平检测。结果表明... 详细信息

为全面掌握马鞍山市2022年春季主要动物疫病的免疫抗体水平,科学评价马鞍山市2022年春季主要动物疫病免疫抗体效果,对马鞍山市五个县(区)的11个家禽养殖(屠宰)场、23个家畜养殖(屠宰)场共1020份血清样品进行免疫抗体水平检测。结果表明马鞍山市口蹄疫野毒感染率较低,禽流感、口蹄疫、小反刍兽疫、猪瘟、蓝耳病、新城疫、狂犬病免疫抗体总体合格率达到农业部要求标准,但蓝耳病及狂犬病的免疫水平参差不齐,要加强蓝耳病、狂犬病等重点动物疫病的防控,落实好监测预警、检疫监管等各项综合防治措施。

关键词：马鞍山市主要动物疫病免疫抗体监测

马鞍山市2019年春季猪口蹄疫、猪瘟及蓝耳病抗体水平监测与分析

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农家致富顾问 2019年第8期 126-127页

作者：郝中香谢成芳刘蓉蓉马鞍山市农业农村局畜牧兽医技术服务中心安徽马鞍山243000

为科学评价马鞍山市重大动物疫病春季集中免疫工作成效,及时掌握重大动物疫病免疫抗体水平,确保不发生区域性重大动物疫病,对五个县(区)的12个规模化养猪场进行了重大动物疫病免疫抗体检测与评估。结果表明,马鞍山市猪口蹄疫野毒感染率... 详细信息

为科学评价马鞍山市重大动物疫病春季集中免疫工作成效,及时掌握重大动物疫病免疫抗体水平,确保不发生区域性重大动物疫病,对五个县(区)的12个规模化养猪场进行了重大动物疫病免疫抗体检测与评估。结果表明,马鞍山市猪口蹄疫野毒感染率极低,全市O型猪口蹄疫、猪瘟及蓝耳病免疫效果较好,但不同猪场免疫效果存在差异,猪瘟免疫状况不容乐观。

关键词：猪口蹄疫猪瘟蓝耳病血清学检测免疫抗体监测

犬瘟热病毒自然感染宠物犬不同部位检出率的分析

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中国畜牧兽医 2012年第12期39卷 216-218页

作者：郝中香夏丹郭玲刘晓文彩芳颜其贵四川农业大学动物医学院四川雅安625014 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川雅安625014

本试验利用RT-PCR检测方法对犬瘟热病毒(CDV)自然感染宠物犬的不同部位样品进行检测,确定CDV在感染犬组织中的分布情况。对14只CDV阳性犬的血液、眼分泌物、鼻液、唾液、粪便和尿液进行检测,RT-PCR方法检出的阳性率分别为92.9%、85.7%、... 详细信息

本试验利用RT-PCR检测方法对犬瘟热病毒(CDV)自然感染宠物犬的不同部位样品进行检测,确定CDV在感染犬组织中的分布情况。对14只CDV阳性犬的血液、眼分泌物、鼻液、唾液、粪便和尿液进行检测,RT-PCR方法检出的阳性率分别为92.9%、85.7%、100%、85.7%、100%和66.7%,结果显示粪便和鼻液样品的检出率最高,检出率达100%,宜于作为检测对象取材。

关键词：犬不同部位犬瘟热病毒检出率