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人巨细胞病毒重组基因表达质粒的构建

第三军医大学学报 2002年第6期24卷 716-718页

作者：郑育声谢琪璇潘善培芦春斌肖銮娟暨南大学生殖免疫研究中心广州510632

目的　用基因工程技术克隆人巨细胞病毒 (Humancytomegalovirus ,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段—gp5 2C末端和pp15 0C末端的DNA序列 ,插入pPIC9K质粒 ,构建适于酵母表达系统的重组表达质粒。方法　根据人巨细胞病毒糖蛋白gp5 2和磷酸蛋... 详细信息

目的　用基因工程技术克隆人巨细胞病毒 (Humancytomegalovirus ,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段—gp5 2C末端和pp15 0C末端的DNA序列 ,插入pPIC9K质粒 ,构建适于酵母表达系统的重组表达质粒。方法　根据人巨细胞病毒糖蛋白gp5 2和磷酸蛋白pp15 0C末端的cDNA序列 ,设计出 2对引物。利用PCR的方法 ,以病毒培养液上清为模板 ,进行二轮PCR扩增 ,把两个目的基因串联在一起 ,将所得的DNA片段经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,筛选出阳性转化子 ,并用PCR和双酶切鉴定阳性重组子。结果　从人巨细胞病毒培养液上清中扩增出目的基因 ,PCR反应和双酶切鉴定结果与预期相符。

关键词：基因表达人巨细胞病毒重组PCR 质粒pPIC9K

油棕(Elaeis guineensis)中果皮发育过程中miRNA的表达动态分析

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植物科学学报 2013年第3期31卷 304-312页

作者：方良梁远学李东栋曹献英郑育声海南省热带生物资源可持续利用重点实验室海南大学材料化工学院海口570228

以CTAB法提取油棕(Elaeis guineensis)中果皮5个不同发育时期(G1～G5)的小RNA。从前期研究获得的油棕小RNA测序数据库中筛选12个候选miRNA,实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测其在果实发育过程中的表达量变化,并进一步对显著差异表达的miRN... 详细信息

以CTAB法提取油棕(Elaeis guineensis)中果皮5个不同发育时期(G1～G5)的小RNA。从前期研究获得的油棕小RNA测序数据库中筛选12个候选miRNA,实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测其在果实发育过程中的表达量变化,并进一步对显著差异表达的miRNA进行靶基因预测。结果表明:中果皮5个不同发育时期小RNA的OD260/OD280比值在1.7～2.0之间;浓度分别是289、364、476、213、390 ng/μL;qRT-PCR检测结果显示,12个候选miRNA在5个发育时期均显著性差异表达,特别是在中果皮发育第4个时期(G4)和第5个时期(G5)表达量极显著增高,其中miR395和miR156在第4个时期表达量最高;miR395和miR528在发育第5时期表达量最高;靶基因预测结果显示差异表达的部分miRNA,其靶基因可能参与了脂肪酸代谢通路,如磷脂酸磷酸脂酶和磷脂酶D。本研究筛选的与脂肪酸代谢相关的miRNA为今后油棕脂肪酸代谢调控通路研究提供了可能的线索。

关键词：油棕脂肪酸代谢 miRNA 实时定量PCR 靶基因预测

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对虾生态养殖综合技术研究

水利渔业 2006年第2期26卷 46-46,72页

作者：方哲鲍时翔邓传明郑育声中国热带农业科学研究院热带生物技术研究所热带生物技术国家重点实验室海口570228 中国科学院广州分院海南办事处海口570228 海南大学理工学院海口570228

在养殖基地实施生态养虾试验,利用微生物制剂对水质进行调控,用人参皂甙增强虾体免疫力,用绿色环保天然抗病毒剂综合防治虾病。虾体无违规药物残留,产出的虾全部出口美国、日本,具有很好的经济效益和社会效益。

关键词：对虾生态养殖微生物制剂海南

油棕脂肪酸脱饱和酶基因ω3启动子区的克隆及其表达组织特异性分析

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分子植物育种 2016年第3期14卷 570-577页

作者：王雷郜凌超郑育声李东栋海南大学农学院海口570228 海南大学材料化工学院生物工程系海口570228

本研究是以油棕叶片基因组DNA为模板,通过数据库预测的油棕脱饱和酶基因ω3的启动子序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增及TA克隆的方法得到了长度为1 144 bp油棕脱饱和酶基因ω3启动子序列。通过Plant CARE软件分析该序列的顺式作用元... 详细信息

本研究是以油棕叶片基因组DNA为模板,通过数据库预测的油棕脱饱和酶基因ω3的启动子序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增及TA克隆的方法得到了长度为1 144 bp油棕脱饱和酶基因ω3启动子序列。通过Plant CARE软件分析该序列的顺式作用元件,发现该启动子不仅含有转录必备的CAAT-box和TATA box,还有大量相关的光反应元件和激素响应元件。通过构建含gus的植物表达载体,农杆菌介导转化转基因拟南芥,对转基因拟南芥进行活性表达分析。结果表明:克隆获得的启动子序列和下游gus基因已经稳定的整合到获得的转基因拟南芥基因组当中;同时,gus基因在拟南芥不同组织中体现出明显的组织特异性,其中,茎干处表达量最高,在叶片的叶脉处表达次之。说明ω3启动子具有活性,可以启动目的基因的转录,本研究为进一步研究启动子的功能及基因表达调控奠定了基础。

关键词：油棕 ω3 启动子序列分析 gus基因

油棕中果皮MYB转录因子家族的鉴定与表达分析

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分子植物育种 2021年第19期19卷 6277-6289页

作者：徐鑫郑育声李东栋海南大学化学工程与技术学院海口570228 海南大学热带作物学院海口570228

油棕(Elaeis guineensis Jacq.)是世界上最重要的油料作物之一,其中果皮含有的棕榈油极其丰富。MYB蛋白是一类广泛存在于真核生物中的转录因子,在植物的生长发育中发挥重要调控作用。本研究基于油棕中果皮转录组的测序结果为基础,利用... 详细信息

油棕(Elaeis guineensis Jacq.)是世界上最重要的油料作物之一,其中果皮含有的棕榈油极其丰富。MYB蛋白是一类广泛存在于真核生物中的转录因子,在植物的生长发育中发挥重要调控作用。本研究基于油棕中果皮转录组的测序结果为基础,利用生物信息学对油棕MYB基因家族进行全面鉴定,并对这些基因的结构、保守域和果实发育不同时期动态表达进行研究,解析油棕MYB转录因子在油棕发育过程中的生物学功能。结果发现,本研究中的38个油棕MYB转录因子,包含26个R2R3-MYB型和8个MYB-related型,以及2个3R-MYB型,不包含4R-MYB类型;MYB蛋白编码约200~700个氨基酸,等电点在4.5~9.5之间;亚细胞定位预测结果显示,所有MYB基因均定位于细胞核中;油棕MYB蛋白具有相似的保守基序组成,38个基因主要分布在13条染色体上,含有1到10个外显子数目;油棕MYB转录因子与多个物种的MYB转录因子具有序列同源性和进化亲缘性;表达模式分析发现,MYB家族基因存在差异表达,且具有几种不同的表达趋势。该研究结果为今后油棕MYB转录因子的脂类代谢途径研究以及功能和调控机制提供重要的研究基础。

关键词：油棕(Elaeis guineensis) MYB转录因子生物信息学表达模式

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瘦素对生殖调节的研究进展

中国病理生理杂志 2001年第3期17卷 277-280页

作者：郑育声朱伟杰谢琪璇暨南大学生殖免疫研究中心广东广州510632

Obese gene was cloned and its protein product which named leptin was found to be expressed specially in fat tissues in 1994. As a metabolic signal of reproductive system, leptin reflects the situations of nutrition and energy, which the body supplys to the brain, and stimulates reproductive endocrinology system, then regulates the functions of reproduction through hypothalamic-pituitary-gonadal *** present status of eptin in this field was reviewed.

关键词：生殖基因瘦素女性不育症肥胖基因 Leptin 受体生殖调节

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浒苔多糖的提取及结构活性对比研究

食品科技 2013年第4期38卷 205-209页

作者：田华刘芳尹学琼郑育声杨冬云沈琦黄瑶海南大学海南省精细化工工程研究中心海口570228 海南惠普森医药生物技术有限公司海口570216

采用去离子水和NaOH溶液对海口白沙门咸淡水交汇处所采的浒苔(Enteromorpha prolifera)进行超声浸提,通过Sevage法脱蛋白、透析脱盐,分离得白色海绵状水溶性浒苔多糖(EPS)。在0.2%NaOH溶液中,90℃超声提取1h后,再在90℃恒温水浴提4h,所... 详细信息

采用去离子水和NaOH溶液对海口白沙门咸淡水交汇处所采的浒苔(Enteromorpha prolifera)进行超声浸提,通过Sevage法脱蛋白、透析脱盐,分离得白色海绵状水溶性浒苔多糖(EPS)。在0.2%NaOH溶液中,90℃超声提取1h后,再在90℃恒温水浴提4h,所得EPS提取率最高,为3.71%。EPS苯酚-硫酸显色反应呈阳性。红外光谱分析显示EPS含硫酸基团和羧基。对水提浒苔多糖(EPS1)和碱提浒苔多糖(EPS2)进行DEAE-32纤维素柱层析分离,分别得到2种精多糖EPS1-1、EPS1-2和EPS2-1、EPS2-2,凝胶渗透色谱测得这4种精多糖的重均分子量为122、198ku和99、106ku,峰形单一对称。电子自旋共振测试显示1、10mg/mLEPS1对羟基自由基的清除能力分别为36.3%、56.8%。EPS1-2和EPS2-2对人急性前髓性白血病细胞(HL60)生长均具有抑制作用,水提多糖比碱提多糖活性更好。

关键词：浒苔多糖抗癌活性抗氧化活性

油棕(Elaeis guineensis Jacq.)中果皮3个生长时期酚类化合物含量变化分析

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分子植物育种 2017年第6期15卷 2394-2402页

作者：李小丽石佳孙汝浩李东栋郑育声海南大学材料与化工学院基因与代谢工程实验室海口570228

以油棕果为材料,分别提取3个生长时期(G1~G3)油棕中果皮酚类物质,采用高效液相色谱法分离,检测其中没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸、丁香酸、香草酸、阿魏酸、香豆素等成分和含量,并分析其变化规律。结果表明,所采用提取和分离方法可获得... 详细信息

以油棕果为材料,分别提取3个生长时期(G1~G3)油棕中果皮酚类物质,采用高效液相色谱法分离,检测其中没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸、丁香酸、香草酸、阿魏酸、香豆素等成分和含量,并分析其变化规律。结果表明,所采用提取和分离方法可获得油棕中果皮中没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸、丁香酸、香草酸、阿魏酸、香豆素,并完全分离。油棕中果皮3个发育时期总酚类化合物含量分别为:677.6μg/10 g、1 384.1μg/10 g和1 456.2μg/10 g,表明随着油棕果实发育成熟,酚类物质含量也随之增加。可溶性游离形态(SFP)、不溶性结合形态(ISBP)和酯化形态(EFP)3种酚类化合物中ISBP和EFP的含量较为丰富;EFP呈现极显著升高趋势。7种酚酸物质中,香草酸、阿魏酸和香豆素的含量相当丰富,香草酸含量尤为凸显,3个不同发育时期的含量分别为185.9μg/10 g、959.4μg/10 g、1 009.7μg/10 g,各占总酚类化合物的27.4%、69.3%、69.3%。咖啡酸、丁香酸和香草酸随油棕中果皮发育成熟含量递增;而没食子酸、原儿茶酸和阿魏酸则呈递减趋势,其中阿魏酸最为显著。

关键词：油棕酚类化合物高效液相色谱

拟南芥长链脂肪酰辅酶A合成酶基因(LACS1)的克隆及功能分析

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分子植物育种 2017年第5期15卷 1623-1629页

作者：陈红余春娥孙汝浩李东栋郑育声海南大学材料与化工学院基因与代谢工程实验室海口570228

长链脂肪酰辅酶A合成酶(LACS,EC6.2.1)催化脂肪酸生成脂肪酰辅酶A,进入脂肪酸的β-氧化途径。本课题从拟南芥中克隆了LACS家族成员At LACS1,构建表达载体,通过Li Ac转化法转入酵母表达系统中表达,气质色谱(GC-MS)检测酵母细胞中脂肪酸... 详细信息

长链脂肪酰辅酶A合成酶(LACS,EC6.2.1)催化脂肪酸生成脂肪酰辅酶A,进入脂肪酸的β-氧化途径。本课题从拟南芥中克隆了LACS家族成员At LACS1,构建表达载体,通过Li Ac转化法转入酵母表达系统中表达,气质色谱(GC-MS)检测酵母细胞中脂肪酸组成。结果表明,拟南芥LACS1基因全长为1 983 bp,编码一个含660个氨基酸的多肽。以含空载酵母细胞中脂肪酸组成为对照,过表达LACS1的酵母细胞中棕榈一烯酸(16:1)相对含量显著增加,硬脂酸(18:0)的相对含量显著减少。这些结果提示,At LACS1对脂肪酸代谢有一定的影响,能够活化游离的长链脂肪酸,尤其偏好C16和C18底物。

关键词：拟南芥长链脂酰辅酶A合成酶酵母INVSc1 进化树脂肪酸