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口蹄疫病毒2B基因的生物信息学分析及其siRNA真核表达系统的建立

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畜牧与兽医 2010年第5期42卷 51-54页

作者：崔丽瑾王兴龙段小宇刘铠党源郎需龙李晓艳军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062 吉林大学人兽共患病研究所吉林长春130062 吉林省华康牧业有限责任公司吉林四平136100 内蒙古民族大学内蒙古通辽028000 吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

应用RT-PCR方法扩增口蹄疫WLF株2B基因,将其克隆到pMD18-T载体中,测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析,筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求,合成shRNA表达模板,连接到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口... 详细信息

应用RT-PCR方法扩增口蹄疫WLF株2B基因,将其克隆到pMD18-T载体中,测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析,筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求,合成shRNA表达模板,连接到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口蹄疫2B基因的真核表达系统,为进一步研究靶向2B基因的RNA干扰对口蹄疫病毒的抑制作用奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 2B基因序列分析 siRNA 真核表达系统

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犬布鲁氏菌菌壳疫苗的制备

中国畜牧兽医 2014年第1期41卷 38-43页

作者：钱晶尹秋丹卜昭阳陈思王兴龙王秀然郎需龙王晓旭吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130122

菌壳技术是一种新型的灭活疫苗制备方法,通过非变性的灭活方式保存细菌表面多个抗原表位,所制备的菌壳可作为预防细菌病的理想疫苗。本试验从噬菌体PhiX174DNA钓取裂解E基因,连接至温控原核表达载体pBV220,通过PCR在所构建的pBV220+E上... 详细信息

菌壳技术是一种新型的灭活疫苗制备方法,通过非变性的灭活方式保存细菌表面多个抗原表位,所制备的菌壳可作为预防细菌病的理想疫苗。本试验从噬菌体PhiX174DNA钓取裂解E基因,连接至温控原核表达载体pBV220,通过PCR在所构建的pBV220+E上扩增出蛋白裂解部件(protein lysis component,PLC),该部件包含阻遏蛋白cI857、溶菌E基因及终止序列rrnbT1T2,然后将其克隆至广宿主表达载体pBBR1MCS-2中,最终将构建的广宿主裂解质粒pBBR+PLC电转入犬布鲁氏菌RM6/66中。试验结果表明,经42℃诱导后,广宿主裂解质粒对犬布鲁氏菌RM6/66的裂解率达100%,成功制备了犬布鲁氏菌RM6/66菌壳疫苗。本试验通过菌壳技术制备的犬布鲁氏菌疫苗对预防宠物犬布鲁氏菌病起到重要作用,同时也对人兽布鲁氏菌疫苗的研制提供新策略。

关键词：犬布鲁氏菌菌壳疫苗

口蹄疫病毒2B基因绿色荧光蛋白融合表达质粒的构建及表达

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中国生物制品学杂志 2008年第9期21卷 756-758页

作者：崔丽瑾王兴龙梅英武任林柱闫广谋张辉郎需龙段小宇路浩吉林大学畜牧兽医学院长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所长春130062

目的构建口蹄疫病毒(FMDV)2B基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达。方法RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2B基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色荧光... 详细信息

目的构建口蹄疫病毒(FMDV)2B基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达。方法RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2B基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和2B基因转录水平。结果经双酶切及PCR鉴定,目的基因片段大小与预期相符,测序结果与WFL株相应序列一致。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有2B基因的转录。结论已成功构建了FMDV2B基因GFP融合表达质粒,并在BHK-21细胞中获得了表达。

关键词：口蹄疫病毒 2B基因绿色荧光蛋白融合表达

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丹顶鹤大肠杆菌病的诊治

动物医学进展 2002年第5期23卷 99-100页

作者：高丰成军郎需龙陈巍潘耀谦解放军军需大学基础兽医学教研室吉林长春130062

通过对某动物园 6只发病死亡的丹顶鹤进行剖检 ,见 3例呈纤维素性心包炎变化 ,肝脏肿大且质地脆弱 ,脾有针尖大的出血点。取心、肝、脾等组织进行涂片 ,革兰氏染色 ,镜检 ,在各组织中均可见两端钝圆的革兰氏阴性杆菌。取心、肝、脾等脏... 详细信息

通过对某动物园 6只发病死亡的丹顶鹤进行剖检 ,见 3例呈纤维素性心包炎变化 ,肝脏肿大且质地脆弱 ,脾有针尖大的出血点。取心、肝、脾等组织进行涂片 ,革兰氏染色 ,镜检 ,在各组织中均可见两端钝圆的革兰氏阴性杆菌。取心、肝、脾等脏器进行石蜡包埋、切片 ,HE染色 ,镜检。主要病理组织学变化为 :心外膜增厚 ,有大量纤维蛋白及异嗜性白细胞 ,巨噬细胞浸润 ,部分心肌细胞、肝细胞、脾细胞发生凝固性坏死。取其肝、脾作电镜负染 ,未发现病毒颗粒。综合流行病学、病原学检查及病理变化等 ,可确诊为大肠杆菌感染。

关键词：丹顶鹤大肠杆菌病微生物学检查治疗

布鲁氏菌新型多重PCR方法的建立与初步应用

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黑龙江畜牧兽医 2016年第4期 176-180,288页

作者：李争李诗语卢晓冉沙洲程慧敏卜昭阳郎需龙吴大成王兴龙吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 军事医学科学院军事兽医研究所长春130122 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室长春130062 广东省农业科学院动物卫生研究所广州510640

布鲁氏菌病是一种分布于世界各地,由革兰氏阴性布鲁氏菌引起的人兽共患病[1]。现已发现10个种,其中流行广泛、影响较大的是羊布鲁氏菌、牛布鲁氏菌、猪布鲁氏菌,对人兽危害最为严重,传统检测布鲁氏菌病的方法是通过病原分离、血清学诊断... 详细信息

布鲁氏菌病是一种分布于世界各地,由革兰氏阴性布鲁氏菌引起的人兽共患病[1]。现已发现10个种,其中流行广泛、影响较大的是羊布鲁氏菌、牛布鲁氏菌、猪布鲁氏菌,对人兽危害最为严重,传统检测布鲁氏菌病的方法是通过病原分离、血清学诊断等[2],这些方法的病原分离周期长、阳性率低甚至致使兽医相关人员感染。

关键词：血清学诊断试管凝集试验补体结合临床样本鲍氏不动杆菌人兽共患病病原分离金黄色葡萄球菌传统检测周期长

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牛布鲁氏菌膜蛋白的免疫抗原筛选

中国畜牧兽医 2010年第7期37卷 136-139页

作者：唐婕杨艳玲王兴龙郎需龙李晓艳中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所长春130062 吉林大学畜牧兽医学院长春130062

试验旨在通过免疫蛋白质组学筛选布鲁氏菌保护性抗原。利用双向电泳技术对试验条件下培养的布鲁氏菌强毒株544A膜蛋白进行分离,结合Western blotting技术分别用豚鼠、牛抗布鲁氏菌血清寻找发生免疫反应的蛋白质。16个免疫蛋白点经胶内... 详细信息

试验旨在通过免疫蛋白质组学筛选布鲁氏菌保护性抗原。利用双向电泳技术对试验条件下培养的布鲁氏菌强毒株544A膜蛋白进行分离,结合Western blotting技术分别用豚鼠、牛抗布鲁氏菌血清寻找发生免疫反应的蛋白质。16个免疫蛋白点经胶内酶切、质谱(LC-MS/MS)进行鉴定。利用生物信息学工具发现这些蛋白不全是膜蛋白,还存在胞质蛋白,其功能涉及生物合成和物质代谢等领域。成功建立了布鲁氏菌膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,为寻找保护性抗原及为新型疫苗抗原候选提供新思路。

关键词：牛种布鲁氏菌544A 免疫蛋白质组学双向电泳免疫抗原