检索结果-南通市图书馆

重组丙酮酸磷酸双激酶与荧光素酶偶联催化ATP-AMP循环反应

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物化学与分子生物学报 2008年第11期24卷 1081-1084页

作者：邹秉杰陈颖马寅姣周国华中国药科大学生命科学与技术学院南京210009 华东医学生物技术研究所南京210002 南京大学医学院南京210093

丙酮酸磷酸双激酶(pyruvate phosphate dikinase,PPDK;EC 2.***.9.1)能够可逆催化磷酸烯醇式丙酮酸(phosphoenolpyruvate,PEP)、单磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)和焦磷酸盐(pyrophosphate,PPi)生成三磷酸腺苷(adenosinetriphosphate,ATP)、无机磷酸盐(orthophosphate,Pi)和丙酮酸(pyruvate).以热玫瑰小双孢菌基因组DNA为模板,PCR扩增得到了编码PPDK的基因,将此基因片段插入表达载体pET24a(+),在大肠杆菌中表达C端融合His-Tag的重组PPDK.与我们先前表达的N端融合His-Tag的PPDK相比,酶的活性提高了20倍,提示该酶的N端对活性十分重要.重组PPDK单体分子量为98 kD.经过镍亲和层析和超滤后,重组PPDK基本达到电泳纯.重组PPDK与荧光素酶偶联能够形成1个ATP-AMP循环反应,在该循环反应中,荧光素酶催化ATP生成的AMP和PPi能够被PPDK重新转化成ATP,产生一个持续稳定的信号.

关键词：丙酮酸磷酸双激酶热玫瑰小双孢菌 ATP-AMP循环

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

多重环介导等温扩增技术研究进展

遗传 2015年第9期37卷 899-910页

作者：林文慧邹秉杰宋沁馨周国华中国药科大学生命科学与技术学院南京210009 南京大学医学院附属金陵医院药理科南京210002 南京大学生命分析化学国家重点实验室南京210008

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)因其扩增速度快、灵敏度和特异性高、仪器要求低等优点而被广泛应用于核酸诊断领域。为充分利用LAMP技术优势、提高诊断检测的效率与可靠性、扩展其应用范围,同时节约... 详细信息

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)因其扩增速度快、灵敏度和特异性高、仪器要求低等优点而被广泛应用于核酸诊断领域。为充分利用LAMP技术优势、提高诊断检测的效率与可靠性、扩展其应用范围,同时节约试剂成本,近年来多重LAMP技术的研究成为一大热点。常规的LAMP扩增产物检测方法多数以聚合反应的双链DNA产物或其副产物为基础,只能判断有无扩增反应发生,而难以识别多重扩增产物的靶标来源及其特异性。为实现多重扩增产物的高特异检测,各国学者通过对该技术巧妙的改进或与其他技术相偶联,发展了一系列多重LAMP扩增检测技术。然而上述狭义的多重LAMP技术依然存在因引物间相互干扰、扩增效率存在差异而引发歧视性扩增的局限,限制了多重扩增的重数。近年研究活跃的微型扩增技术以其实现多个平行、互不干扰的小体积单重扩增的技术优势打破了这一局限,由此产生了新型的广义多重LAMP扩增技术。这些技术还具有试剂消耗少、自动化程度较高、交叉污染风险更小以及更适合对较多靶标进行现场快速检测等优势。本文分别从狭义多重LAMP的方法原理及其扩增反应体系优化、广义多重LAMP的方法原理以及多重LAMP技术在诊断检测中的应用等方面对近年来多重LAMP技术的研究进展进行了综述。

关键词：多重环介导等温扩增特异扩增产物检测微型扩增技术微流控芯片

基于核酸侵入反应偶联PCR的粪便样本基因甲基化定量分析方法及用于结直肠癌无创筛查

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

分析化学 2018年第10期46卷 1552-1559页

作者：刘琳琳齐谢敏邹秉杰宋沁馨周国华中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室南京军区南京总医院药理科

从粪便中检测BMP3基因甲基化水平可实现对结直肠癌的无创筛查,但对检测方法的灵敏度与特异性要求很高。本研究将核酸侵入反应与实时荧光聚合酶链式反应(PCR)偶联,建立了BMP3基因甲基化检测方法,以ACTB基因作为参比基因,通过优化反应体... 详细信息

从粪便中检测BMP3基因甲基化水平可实现对结直肠癌的无创筛查,但对检测方法的灵敏度与特异性要求很高。本研究将核酸侵入反应与实时荧光聚合酶链式反应(PCR)偶联,建立了BMP3基因甲基化检测方法,以ACTB基因作为参比基因,通过优化反应体系中探针浓度、Flap核酸内切酶与Taq酶用量,提高BMP3目标基因与ACTB参比基因的扩增效率至接近100%,实现了利用ΔCT法进行BMP3基因甲基化水平的相对定量,可对低至10 copies的甲基化BMP3基因进行检测,并可从非甲基化模板中准确定量0.01%的甲基化模板,非甲基化模板不产生非特异性信号,表明本方法具有极高的灵敏度与良好的特异性。将本方法用于16例结直肠癌患者、7例结直肠腺瘤患者及19例健康人粪便样本中BMP3基因甲基化检测,结果表明,有5例结直肠癌患者的粪便样本检出BMP3基因甲基化,2例结直肠腺瘤患者的粪便样本检出BMP3甲基化,健康人的粪便样本均没有检出甲基化,表明本方法可用于检测粪便样本中基因的甲基化水平,为临床开展基于粪便中基因甲基化检测的无创结直肠癌筛查提供了新方法。

关键词： DNA甲基化实时荧光聚合酶链式反应核酸侵入反应结直肠癌粪便DNA

三酶焦测序体系的建立及其在唐氏综合征快速诊断中的应用

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

遗传 2010年第5期32卷 517-523页

作者：刘夕群朱术会邹秉杰马寅姣周国华南京医科大学基础医学院南京210029 华东医学生物技术研究所南京210002

为了避免四酶焦测序体系中由于三磷酸腺苷双磷酸酶(apyrase)造成的测序结果偏差,文章建立了一种定量性能好的无三磷酸腺苷双磷酸酶的三酶焦测序体系。方法是将生物素修饰的DNA模板、荧光素酶和ATP硫酸化酶固定在磁性微球表面进行焦测序... 详细信息

为了避免四酶焦测序体系中由于三磷酸腺苷双磷酸酶(apyrase)造成的测序结果偏差,文章建立了一种定量性能好的无三磷酸腺苷双磷酸酶的三酶焦测序体系。方法是将生物素修饰的DNA模板、荧光素酶和ATP硫酸化酶固定在磁性微球表面进行焦测序反应,当加入一种dNTP进行焦测序反应完后,采用磁性分离技术,除去焦测序反应产生的ATP和剩余的dNTP,然后加入另一种dNTP进行测序,按同样的方法去除影响下一轮测序反应的成分,实现循环测序。此体系能准确判读待测DNA的碱基序列,且可定量测定单核苷酸序列多态性(SNP)中两种等位基因型的相对比值。文章成功检测了16例正常人和8例唐氏综合征患者样本中21号染色体上两个杂合率较高位点(rs1042917和rs4818219)的等位基因型比值,所得结果能够明确说明待测样本中来自于父方和母方的21号染色体数目是否相等。该法具有良好的定量性能,适合于SNP等位基因型的定量分析,可以用于唐氏综合征的快速检测。

关键词：腺苷双磷酸酶三酶焦测序体系唐氏综合征单核苷酸序列多态性

热玫瑰小双孢菌来源的丙酮酸磷酸双激酶的表达及应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2008年第4期24卷 679-683页

作者：邹秉杰陈之遥周国华中国药科大学生命科学与技术学院南京210009

以热玫瑰小双孢菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到了编码PPDK的基因,将此基因片段插入到表达载体pET28a(+)中构建得到了重组表达质粒pET28a(+)-PPDK,将重组表达质粒pET28a(+)-PPDK转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经过IPTG诱导,重组菌成功... 详细信息

以热玫瑰小双孢菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到了编码PPDK的基因,将此基因片段插入到表达载体pET28a(+)中构建得到了重组表达质粒pET28a(+)-PPDK,将重组表达质粒pET28a(+)-PPDK转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经过IPTG诱导,重组菌成功表达了N端带有6-His Tag的重组PPDK。经SDS-PAGE分析,重组PPDK单体分子量为101 kD。经过镍亲和层析和超滤后,重组PPDK蛋白基本达到电泳纯,并被成功应用于焦测序中。

关键词： PPDK 热玫瑰小双孢菌大肠杆菌焦测序

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

粪便中人基因组DNA提取技术及其应用

中华检验医学杂志 2014年第1期37卷 72-75页

作者：王勇邹秉杰周国华南京大学医学院临床学院(南京军区南京总医院)药理科 210002

无创早期诊断有助于降低大肠癌的致死率并减少受检者的痛苦，粪便DNA检测是进行大肠癌无创早期诊断的重要途径之一，从粪便中提取大量的且高质量的人基因组DNA产物是保证诊断正确性的前提。然而，由于粪便样本的成分十分复杂，使粪便DN... 详细信息

无创早期诊断有助于降低大肠癌的致死率并减少受检者的痛苦，粪便DNA检测是进行大肠癌无创早期诊断的重要途径之一，从粪便中提取大量的且高质量的人基因组DNA产物是保证诊断正确性的前提。然而，由于粪便样本的成分十分复杂，使粪便DNA提取较为困难。因此，开发高效的粪便人基因组DNA提取技术，对提高基于粪便DNA检测的大肠癌早期诊断水平起到关键作用。目前，用于粪便人基因组DNA提取方法主要包括两类：粪便DNA直接提取和富集粪便中肠壁脱落细胞后提取。本文就这两类粪便人基因组DNA提取方法进行简要介绍，并对其应用前景进行了展望。

关键词：粪便 DNA 基因组人结直肠肿瘤早期诊断

用于无创产前诊断的SRY基因高灵敏高特异检测方法研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

分析化学 2017年第10期45卷 1448-1454页

作者：刘琳琳郑梦琳邹秉杰宋沁馨周国华中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室南京军区南京总医院药理科

通过检测母体外周血中胎儿游离DNA(cffDNA)的SRY基因,确定胎儿性别,可评估胎儿性连锁遗传病的发病风险,降低病儿出生率。本研究建立了高灵敏、高特异、闭管检测不易污染的实时荧光PCR偶联核酸侵入反应方法用于SRY基因的检测。通过优化... 详细信息

通过检测母体外周血中胎儿游离DNA(cffDNA)的SRY基因,确定胎儿性别,可评估胎儿性连锁遗传病的发病风险,降低病儿出生率。本研究建立了高灵敏、高特异、闭管检测不易污染的实时荧光PCR偶联核酸侵入反应方法用于SRY基因的检测。通过优化反应体系中的检测探针浓度、FEN1酶用量、Taq酶用量及预扩增退火温度,确定了最佳的反应条件,即检测探针浓度为250 nmol/L、FEN1酶用量为7.5 U、Taq酶用量为0.5 U、预扩增退火温度为67℃。在最佳反应条件下,实现对含量低至4‰(4 copies/μL)的模拟样本的检测,并成功检测两例孕期分别为9周和10周的临床实际样本。结果表明,所建立的方法可用于母体外周血cffDNA的SRY基因检测,为临床开展基于SRY基因的无创产前诊断提供了新方法。

关键词：实时荧光PCR 核酸侵入反应胎儿游离DNA SRY基因无创产前诊断

新型冠状病毒SARS-CoV-2核酸检测技术平台的研究进展

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

分析化学 2020年第10期48卷 1279-1287页

作者：盛楠马雪萍逄淑云宋沁馨邹秉杰周国华东部战区总医院药理科药物质量与安全预警教育部重点实验室中国药科大学南京大学生命分析化学国家重点实验室南方医科大学第一临床医学院

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)已蔓延至全球,严重威胁人类的健康。SARS-CoV-2传染性强、潜伏期长,且存在无症状感染者,因此,准确检测SARS-CoV-2对疫情防控至关重要。核酸检测技术在防控工作中发挥了举足轻重的作用,目前已开发出多种用于SARS... 详细信息

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)已蔓延至全球,严重威胁人类的健康。SARS-CoV-2传染性强、潜伏期长,且存在无症状感染者,因此,准确检测SARS-CoV-2对疫情防控至关重要。核酸检测技术在防控工作中发挥了举足轻重的作用,目前已开发出多种用于SARS-CoV-2核酸检测的方法,有些方法已被开发成试剂盒应用于临床检测。然而,这些方法原理各异,检测平台也不同,因此,选择合适的SARS-CoV-2核酸检测方法对疫情防控至关重要。本文介绍了目前核酸检测方法的原理与技术平台,比较了各方法的优缺点,明确了各类方法的应用范围,以期为选择合适的SARS-CoV-2核酸检测方法提供参考,对今后开发类似SARS-CoV-2的病原体检测方法提出展望。

关键词：新型冠状病毒核酸检测技术原理评述

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

SNP检测技术与个体化药物治疗

SNP检测技术与个体化药物治疗