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荔枝LcWRKY47基因的克隆、亚细胞定位、表达及延缓果实褐变的功能初探

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热带作物学报 2024年

作者：程南谱王鑫 Muhammad Muzammal ASLAM 邵远志李雯海南大学三亚南繁研究院海南大学热带农林学院海南大学食品科学与工程学院海南大学生命健康学院

荔枝（Litchi chinensis Sonn.）是亚热带地区重要的经济作物之一，但荔枝采后难贮存、易褐变，是目前保鲜过程中存在的最大问题之一。WRKY家族是植物中常见的一类转录因子，主要调控植物的逆境胁迫响应以及成熟衰老等生理过程。为了探... 详细信息

荔枝（Litchi chinensis Sonn.）是亚热带地区重要的经济作物之一，但荔枝采后难贮存、易褐变，是目前保鲜过程中存在的最大问题之一。WRKY家族是植物中常见的一类转录因子，主要调控植物的逆境胁迫响应以及成熟衰老等生理过程。为了探究WRKY对采后荔枝果实成熟衰老的影响，本研究以‘妃子笑’荔枝为试验对象，克隆出LcWRKY47基因，长度为1077 bp;LcWRKY47蛋白中含有WRKY保守结构域，二级结构以无规则卷曲为主，占比65.64%，三级结构主要为无规则卷曲和α螺旋。通过motif分析及多序列比对，发现LcWRKY47蛋白属于第Ⅱ类WRKY转录因子；系统进化分析树表明荔枝LcWRKY47与同为无患子科的龙眼DlWRKY47亲缘关系最近；亚细胞定位实验表明，LcWRKY47蛋白定位在细胞核中；RTqPCR分析表明，2 mmol/L草酸处理后LcWRKY47基因在荔枝果皮和果肉中的表达趋势相同，均先升后降，后期处理组表达量均显著高于对照组，推测草酸处理后该转录因子在荔枝果实成熟衰老过程中起正调控作用。过表达LcWRKY47基因发现，转基因果实中LcWRKY47的表达量显著高于对照果实，且转基因荔枝衰老褐变情况明显优于处理组。综上推测，LcWRKY47转录因子可能在荔枝衰老与褐变过程中起着一定的调节作用。

关键词：荔枝 WRKY转录因子基因克隆亚细胞定位表达分析

暹罗芽孢杆菌N-1对芒果果实采后贮藏品质和诱导抗病性的影响

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保鲜与加工 2024年

作者：李佳怡赵波邵远志李雯李蕊邹士成海南大学三亚南繁研究院海南大学食品科学与工程学院海南大学热带农林学院

为探究拮抗菌暹罗芽孢杆菌（B. siamensis N-1）对芒果果实贮藏品质和抗病性的影响，以“台农”芒果为试材，经过菌液浸泡处理后于25 ℃下贮藏，分析了芒果果实采后贮藏品质、抗病相关酶活性及对应基因转录水平变化。结果表明：与对照... 详细信息

为探究拮抗菌暹罗芽孢杆菌（B. siamensis N-1）对芒果果实贮藏品质和抗病性的影响，以“台农”芒果为试材，经过菌液浸泡处理后于25 ℃下贮藏，分析了芒果果实采后贮藏品质、抗病相关酶活性及对应基因转录水平变化。结果表明：与对照相比，B. siamensis N-1处理能够有效地抑制病情指数的升高，减少丙二醛（MDA）积累，延缓果实硬度下降，保持较高的类黄酮含量，维持过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、β-1，3-葡聚糖酶（GLU）、几丁质酶（CHT）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）和査尓酮异构酶（CHI）活性。转录组数据分析表明共有9 987个差异表达基因，主要富集在植物激素信号转导途径、代谢途径、光合作用、次生代谢物的生物合成途径以及光合作用-天线蛋白途径途径等途径。B. siamensis N-1显著诱导了PAL基因和WRKY转录因子基因表达量的上调。综上，暹罗芽孢杆菌可有效地维持芒果果实的贮藏品质，诱导芒果果实抗病相关基因表达，抑制病害的发生。

关键词：芒果果实拮抗微生物贮藏品质诱导抗病性

芒果MiUFGT43启动子和MiMYB1基因的克隆、序列及互作分析

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分子植物育种 2024年第15期22卷 4873-4883页

作者：寇明睿窦雅琪王莹邵远志李雯海南大学三亚南繁研究院海南大学园艺学院海南大学生命科学学院

类黄酮3-O-糖基转移酶(UFGT)和MYB TF是花青苷生物合成的关键调节因子，本研究旨在明确MiUFGT43启动子与MiMYB1基因的序列特征和互作关系，为采后芒果色泽调控提供理论依据。根据芒果转录组和基因组数据，克隆MiUFGT43启动子和MiMYB1基... 详细信息

类黄酮3-O-糖基转移酶(UFGT)和MYB TF是花青苷生物合成的关键调节因子，本研究旨在明确MiUFGT43启动子与MiMYB1基因的序列特征和互作关系，为采后芒果色泽调控提供理论依据。根据芒果转录组和基因组数据，克隆MiUFGT43启动子和MiMYB1基因序列，利用RT-qPCR检测MiMYB1和MiUFGT43的相对表达水平。利用生物信息学，预测MiUFGT43启动子的核心区域、转录起始位点和顺式作用元件，MiMYB1的结构域和理化性质，利用MEGA-X构建系统进化树，构建表达载体pHis-MiUFGT43-pro和Mi MYB1-AD并转入Y1H Gold菌株，通过酵母单杂(Y1H)试验，验证MiUFGT43启动子与蛋白MiMYB1的互作关系。MiUFGT43启动子含有一个核心区域，位于-532～-582 bp，转录起始位点为G，且包含多个MYB结合位点。MiMYB1基因具有MYB结构域，CDS全长846 bp，编码282个氨基酸，是一个不稳定的亲水蛋白。系统进化分析结果显示，与MiMYB1同源性最高的是Pv MYB1。在贮藏期间，MiMYB1的表达量整体呈上升的趋势，但在第12天有所下降，而MiUFGT43的表达量第6天上升后在第12天显著下降，随后呈上升趋势。能够抑制MiUFGT43启动子自激活的3-AT浓度为10 mmol/L。酵母单杂(Y1H)结果表明，DNA结合蛋白MiMYB1与其在MiUFGT43启动子中的靶序列之间的相互作用能够刺激His的转录。本研究证实MiMYB1能通过直接与MiUFGT43启动子结合而激活MiUFGT43的转录，从而影响采后芒果花青苷的合成。

关键词：芒果 MiUFGT43启动子 MiMYB1 序列分析互作分析

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高效液相色谱法(HPLC)测定芒果多种植物生长调节剂含量

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植物生理学报 2022年第5期58卷 981-988页

作者：王丽荣贾文君陈明敏邵远志李雯海南大学园艺学院海口570228 海南大学生命科学学院海口570228 海南省热带园艺作物品质调控重点实验室海口570228

为了能高效、快速检测果实中的多种植物生长调节剂含量,本文以‘贵妃’芒果为材料,以6-苄氨基嘌呤(6-BA)、噻苯隆(TDZ)、氯吡脲(CPPU)、赤霉素(GA3)和多效唑(PBZ)5种植物生长调节剂为检测对象,通过对色谱条件的优化,建立了利用高效液相... 详细信息

为了能高效、快速检测果实中的多种植物生长调节剂含量,本文以‘贵妃’芒果为材料,以6-苄氨基嘌呤(6-BA)、噻苯隆(TDZ)、氯吡脲(CPPU)、赤霉素(GA3)和多效唑(PBZ)5种植物生长调节剂为检测对象,通过对色谱条件的优化,建立了利用高效液相色谱仪(HPLC)结合紫外检测器的分析方法。该方法能够高效、准确地检测不同产地、不同采收成熟度和采后处理芒果果实中的多种植物生长调节剂含量,研究结果不仅可为生产中准确检测植物生长调节剂提供科学方法,也为合理施用植物生长调节剂提供理论指导。

关键词：高效液相色谱法植物生长调节剂芒果果实

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番木瓜果实6个bHLH基因克隆及表达分析

分子植物育种 2022年第22期20卷 7374-7383页

作者：王楠年宇薇邵远志李蕊李雯海南大学园艺学院海南省热带园艺作物品质调控重点实验室海口570228 海南大学生命科学学院海口570228

bHLH转录因子是调控植物生长发育过程的第二大转录因子超家族,在植物生长发育和果实成熟过程中扮演着重要角色。为探究bHLH转录因子在‘日升’番木瓜(Carica papaya ***’SunUp’)果实采后贮藏期间的表达特性,本研究基于番木瓜转录组数... 详细信息

bHLH转录因子是调控植物生长发育过程的第二大转录因子超家族,在植物生长发育和果实成熟过程中扮演着重要角色。为探究bHLH转录因子在‘日升’番木瓜(Carica papaya ***’SunUp’)果实采后贮藏期间的表达特性,本研究基于番木瓜转录组数据,通过TA克隆及RT-PCR技术,克隆得到了6个bHLH基因,命名为CpbHLH4~CpbHLH9。利用生物信息学方法对CpbHLH4~CpbHLH的理化性质,亲缘关系,保守结构域和进行分析。结果表明,6个bHLH基因序列全长663 bp(CpbHLH5)~1965 bp(CpbHLH9),具有完整的开放阅读框,编码221 aa(CpbHLH5)~654 aa(CpbHLH9)个氨基酸,除CpbHLH6表现为疏水性之外,其他5个bHLH蛋白均为亲水性蛋白,并且6个bHLH蛋白不具有跨膜结构和信号肽,预测定位于细胞核中。系统发育树和多序列比对结果显示,6个bHLH转录因子分布于不同的亚族,同时它们也都具有bHLH保守结构域。RT-qPCR结果表明CpbHLH4、CpbHLH5、CpbHLH6、CpbHLH7、CpbHLH8的表达水平在贮藏前期显著上调,而CpbHLH9的表达水平在果实成熟过程中持续降低。本研究鉴定了6个bHLH转录因子,明确了它们在采后番木瓜果实成熟过程中的表达模式,为进一步解析bHLH转录因子在采后番木瓜果实成熟中的功能和调控机制提供基础。

关键词：番木瓜(Carica papaya L.) 果实成熟 bHLH转录因子表达分析

芒果ERF基因家族鉴定及外源乙烯诱导下MiERF-AP2的基因表达分析

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分子植物育种 2022年第15期20卷 4958-4966页

作者：陈明敏王丽荣邵远志李蕊李雯海南大学园艺学院海南省热带园艺作物品质调控重点实验室海口570228 海南大学生命科学学院海口570228

ERF基因家族在乙烯信号转导和内源乙烯合成的过程中扮演着重要角色。为探究ERF在外源乙烯处理过程中的响应及表达调控机制,本实验对芒果转录组序列进行测序分析,从获得的Unigenes中筛选出31个具有AP2保守结构域的ERF基因家族成员,并对... 详细信息

ERF基因家族在乙烯信号转导和内源乙烯合成的过程中扮演着重要角色。为探究ERF在外源乙烯处理过程中的响应及表达调控机制,本实验对芒果转录组序列进行测序分析,从获得的Unigenes中筛选出31个具有AP2保守结构域的ERF基因家族成员,并对这些基因进行了序列分析,预测了这些基因所含有的motif结构。结果表明,这些基因都属于亲水蛋白,但在其他理化性质方面存在着较大差别;在多序列比对后,发现该家族成员都含有YRG元件和RAYD元件。6个芒果ERF家族基因的表达情况显示,MiERF-AP2-5、MiERF-AP2-6、MiERF-AP2-17、MiERF-AP2-20及MiERF-AP2-29在外源乙烯处理后的表达量均有所上升,预示着这5个基因在外源乙烯处理条件下可能对其代谢起到正向调控的作用,而MiERF-AP2-9在处理后却出现下降趋势,预示着该基因或许是起负向调控作用或是扮演着转录抑制因子的角色。

关键词：芒果(Mangifera indica L.) ERF基因家族外源乙烯

拮抗菌N-1的分离鉴定及对采后荔枝果实相关酶活性的影响

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中国南方果树 2022年第1期51卷 67-74,81页

作者：尤文静葛春晖汤月成梓瑜邵远志海南大学食品科学与工程学院海口570228 海南大学生命科学学院海口570228

从果园根系土壤与果树不同组织混样分离筛选对果树7种致病菌的拮抗菌株,结合形态学、生理生化特性和分子生物学鉴定筛选的菌株,并测定拮抗菌浸果处理后对贮藏期间"妃子笑"荔枝果实腐烂率、好果率及相关酶活性的影响。结果表明,筛选出对... 详细信息

从果园根系土壤与果树不同组织混样分离筛选对果树7种致病菌的拮抗菌株,结合形态学、生理生化特性和分子生物学鉴定筛选的菌株,并测定拮抗菌浸果处理后对贮藏期间"妃子笑"荔枝果实腐烂率、好果率及相关酶活性的影响。结果表明,筛选出对7种致病菌抑制效果均较好的菌株1株,编号为菌株N-1,鉴定为暹罗芽孢杆菌Bacillus siamensis。相比对照(无菌蒸馏水),拮抗菌N-1浸果处理能够显著降低荔枝果实采后贮藏期的腐烂率;基于采后贮藏期荔枝褐变的发生,果实好果率得到提升;拮抗菌N-1浸果处理后诱导果实抗病相关酶过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶活性提高,有效降低多酚氧化酶对采后果实贮藏的不利影响。

关键词：荔枝果实拮抗菌分离鉴定酶活性芽孢杆菌

1-MCP和乙烯利处理对番木瓜果实软化生理的影响

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中国食品学报 2013年第2期13卷 143-148页

作者：邵远志高毫杰贾志伟程江波李雯海南大学食品学院海口570228 海南省热带园艺产品采后生理与保鲜重点实验室广东湛江524091 海南大学园艺园林学院海口570228

以"日升"番木瓜果实为材料,研究1-甲基环丙烯(1-methycyclopropene,1-MCP)与乙烯利处理对番木瓜果实软化相关酶活性的影响,结果表明:单独乙烯利处理、乙烯利处理后立即用1-MCP处理和乙烯利处理24h后再用1-MCP处理,都能明显提高番木瓜果... 详细信息

以"日升"番木瓜果实为材料,研究1-甲基环丙烯(1-methycyclopropene,1-MCP)与乙烯利处理对番木瓜果实软化相关酶活性的影响,结果表明:单独乙烯利处理、乙烯利处理后立即用1-MCP处理和乙烯利处理24h后再用1-MCP处理,都能明显提高番木瓜果实多聚半乳糖醛酸酶(PG)、纤维素酶(CX)和果胶甲脂酶(PME)活性,促进水溶性果胶含量的上升,使番木瓜果皮的细胞膜透性增加,加速果实软化进程;而单独1-MCP处理和1-MCP处理1d后再用乙烯利处理,明显抑制番木瓜果实PG酶、CX酶以及PME酶活性,抑制原果胶的降解以及番木瓜果实的软化进程。1-MCP抑制果实成熟软化的作用与外源乙烯的处理时间密切相关。

关键词： 1-MCP 番木瓜果实乙烯利果实软化

不同贮藏温度及包装对莲雾采后生理和贮后品质的影响

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中国南方果树 2007年第3期36卷 53-54页

作者：邵远志李雯海南大学公共实验中心海口570228 海南大学生命科学与农学院

莲雾Syzygium spp．，是桃金娘科Myrtaceae蒲桃属植物。莲雾果实色泽美观，富含营养，果实除鲜食外还可加工成果汁饮料、果酱等产品。莲雾为热带水果，果皮极薄，果肉含水分多，不耐贮藏。本试验采用不同贮藏温度和包装处理莲雾果实，... 详细信息

莲雾Syzygium spp．，是桃金娘科Myrtaceae蒲桃属植物。莲雾果实色泽美观，富含营养，果实除鲜食外还可加工成果汁饮料、果酱等产品。莲雾为热带水果，果皮极薄，果肉含水分多，不耐贮藏。本试验采用不同贮藏温度和包装处理莲雾果实，研究其对采后生理和贮藏品质的影响，对于解决莲雾果实的贮运问题，提高莲雾的经济效益具有重要的理论与实践意义。

关键词：采后生理贮藏温度贮藏品质莲雾包装果实色泽桃属植物桃金娘科