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口腔卟啉单胞菌属外膜囊泡以非RANKL依赖方式促进破骨细胞分化

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口腔卟啉单胞菌属外膜囊泡以非RANKL依赖方式促进破骨细胞分化

中华口腔医学会牙体牙髓病学专业委员会第十四次全国牙体牙...

作者：邱秋劲鄢晓媛郭佳杰仇丽鸿中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科

目的:牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,Pe)和牙周卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)是牙周病及根尖周病的主要致病菌。本文主要研究Pe和Pg的外膜囊泡(Outer membrane vesicles,OMVs)对破骨细胞分化的促进作用及分子机制。方法:厌氧培养牙髓卟啉单胞菌和牙周卟啉单胞菌,分离纯化获取,并行透射电子显微镜检测OMVs的形态及直径。Pe OMV和Pg OMV连同或不连同核因子κB受体活化因子配体(RANKL)作用于小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7) 5日,行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色统计破骨细胞(Osteoclast,OC)数(细胞核数≥3);利用罗丹明标记的鬼笔环肽对OC进行F-actin染色,荧光显微镜下观察OC形成的伪足小体;利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测OC分化标志基因NFATc1、OSCAR、Cathepsin K及TRAP的表达。RANKL、Pe OMV和Pg OMV连同或不连同可溶性骨保护素(OPG)作用RAW264.7细胞5日,行TRAP染色和F-Actin环荧光染色检测OC生成。Pe OMV和Pg OMV作用RAW264.7细胞24、48 h,RT-PCR检测巨噬细胞M1向极化标志基因IL-1β、IL-6、TNF-α和胞内模式识别受体NOD2的基因表达。结果:Pe、Pg OMV连同或不连同RANKL作用RAW264.7细胞5日,TRAP染色显示Pe、Pg OMV促进RANKL诱导的OC生成,且多为10核以上的巨大OC,有较大的红色伪足小体F-actin环;Pe、PgOMV在无RANKL作用时也可促进OC生成,多为5-10核的OC,F-actin环大小与RANKL组相当;Pe、Pg OMV显著促进了NFATc1、OSCAR、Cathepsin K及TRAP的基因表达。加入OPG后,RANKL组OC生成显著减少,而Pe OMV和Pg OMV组OC生成未见显著减少。Pe OMV和Pg OMV作用RAW264.7细胞24、48 h,IL-1β、IL-6、TNF-α、NOD2基因表达均呈现不同程度的升高。结论:Pe OMV和Pg OMV以非RANKL依赖的方式促进了破骨细胞分化,该过程可能与NOD2受体的激活和IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达,从而替代了RANKL信号导致破骨细胞分化相关,但具体机制仍有待一进步验证。

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口腔卟啉单胞菌外膜囊泡通过损伤线粒体活性抑制成骨细胞分化

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口腔卟啉单胞菌外膜囊泡通过损伤线粒体活性抑制成骨细胞分化

第十六次全国牙体牙髓病学学术大会

作者：邱秋劲张泽颖鄢晓媛仇丽鸿郭佳杰中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科辽宁省口腔医学疾病重点实验室

目的:研究牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,Pe)和牙周卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)外膜囊泡(Outer membrane vesicles,OMVs)对成骨细胞分化的影响及作用机制。方法:厌氧培养Pe和Pg,分离提取OMVs,透射电子显微镜和纳米粒度电位仪行形态及粒径分析。DIL染料标记Pe OMV和Pg OMV,荧光共聚焦显微镜检测Pe OMV和Pg OMV被小鼠前成骨细胞MC3T3-E1内化情况。ALP染色、茜素红染色、成骨分化标志蛋白表达检测Pe OMV和Pg OMV对MC3T3-E1成骨向分化的影响。ATP、JC-1及Mitosox检测Pe OMV和Pg OMV对MC3T3-E1线粒体功能、膜电位及氧化应激的影响。提取成骨向分化MC3T3-E1活线粒体,并作用于Pe OMV和Pg OMV诱导的MC3T3-E1,检测细胞线粒体相关功能及成骨向分化情况。结果:Pe OMV和Pg OMV呈直径约为180 nm的单层囊泡样结构,可快速被MC3T3-E1内化。Pe OMV和Pg OMV显著抑制MC3T3-E1细胞ALP活性、茜素红活性和成骨分化标志蛋白的表达。Pe OMV和Pg OMV抑制MC3T3-E1胞内ATP水平、降低线粒体膜电位并升高线粒体氧化应激水平。添加外源性活线粒体能部分逆转Pe OMV和Pg OMV对MC3T3-E1成骨向分化的抑制。结论:Pe OMV和Pg OMV通过降低线粒体膜电位、诱导线粒体氧化应激、损伤线粒体功能抑制成骨细胞分化。

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氧化石墨烯量子点通过促进线粒体自噬依赖的牙髓干细胞成骨向分化修复骨缺损的实验研究

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氧化石墨烯量子点通过促进线粒体自噬依赖的牙髓干细胞成骨向分化...

第十六次全国牙体牙髓病学学术大会

作者：鄢晓媛张泽颖邱秋劲仇丽鸿郭佳杰中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科辽宁省口腔医学疾病重点实验室

目的:检验水凝胶包装的经氧化石墨烯量子点(Graphene Oxide Quantum Dots,GOQDs)诱导后的牙髓干细胞(Dental pulp stem cells,DPSCs)体内修复骨缺损的效果,并探索GOQDs促进DPSCs成骨向分化的分子生物学机制。方法:CCK-8检测GOQDs作用于D...

目的:检验水凝胶包装的经氧化石墨烯量子点(Graphene Oxide Quantum Dots,GOQDs)诱导后的牙髓干细胞(Dental pulp stem cells,DPSCs)体内修复骨缺损的效果,并探索GOQDs促进DPSCs成骨向分化的分子生物学机制。方法:CCK-8检测GOQDs作用于DPSCs的安全浓度。ALP染色、茜素红染色及成骨分化标志蛋白表达检测验证GOQDs能否促进DPSCs成骨向分化。体外构建GOQDs/DPSCs/水凝胶复合物,活死染色及ALP染色检测DPSCs在水凝胶中的生长及成骨向分化情况。构建大鼠颅骨缺损,Micro-CT及免疫组化检测GOQDs/DPSCs/水凝胶复合物修复骨缺损效果。体外检测GOQDs作用下DPSCs线粒体自噬的变化,及抑制线粒体自噬后GOQDs对DPSCs成骨活性的影响。结果:5μg/mL GOQDs不影响DPSCs活性,且促进DPSCs的ALP活性、茜素红活性及成骨标志蛋白Col-1和OPN的表达。GOQDs能促进水凝胶包装的DPSCs的ALP活性。GOQDs/DPSCs/水凝胶复合物促进大鼠颅骨骨缺损区的新骨形成及成骨标志蛋白Osterix、Runx2、Col-1及OPN的表达。GOQDs促进DPSCs线粒体自噬相关分子Parkin和PINK1的表达;抑制线粒体自噬后,GOQDs促DPSCs成骨分化作用显著降低。结论:GOQDs通过升高线粒体自噬水平促进DPSCs成骨向分化,且GOQDs/DPSCs/水凝胶复合物显著促进大鼠颅骨缺损的修复。

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ATF4调控BNIP3线粒体自噬促进牙髓干细胞成牙本质向分化的研究

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ATF4调控BNIP3线粒体自噬促进牙髓干细胞成牙本质向分化的研究

第十六次全国牙体牙髓病学学术大会

作者：张泽颖郭佳杰杨谛鄢晓媛邱秋劲仇丽鸿中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科辽宁省口腔医学疾病重点实验室

目的:探究BCL-2/腺病毒E1B 19-kDa相互作用蛋白3(BNIP3)线粒体自噬调控牙髓干细胞(DPSCs)成牙本质向分化中的作用,及活化转录因子4(ATF4)调控上述过程的分子机制。方法:(1)生物信息学筛选DPSCs成牙本质向分化所涉及的差异表达基因及相...

目的:探究BCL-2/腺病毒E1B 19-kDa相互作用蛋白3(BNIP3)线粒体自噬调控牙髓干细胞(DPSCs)成牙本质向分化中的作用,及活化转录因子4(ATF4)调控上述过程的分子机制。方法:(1)生物信息学筛选DPSCs成牙本质向分化所涉及的差异表达基因及相关通路后,RT-qPCR、western blot验证关键通路和差异基因。(2)细胞实验中,沉默或过表达BNIP3探究体外环境中BNIP3对DPSCs成牙分化的影响;动物实验模型分析体内环境中BNIP3对DPSCs的分化影响。(3)双荧光素酶报告实验和Chip实验探究ATF4对BNIP3直接调控的分子机制。(4)IF、流式细胞术和seahorse实验探究ATF4-BNIP3对DPSCs内线粒体功能影响。(5)IP-MS筛选ATF4的互作蛋白--核转运蛋白β1(KPNB1)。构建ATF4核定位序列野生型及突变型质粒,明确KPNB1识别ATF4位点和该位点对DPSCs成牙分化的影响。结果:(1)DPSCs成牙本质向分化中自噬通量升高,伴随BNIP3线粒体自噬信号增强;体内、外实验均表明BNIP3同DPSCs成牙分化标记蛋白DSPP、DMP1表达正相关,发挥促DPSCs成牙分化作用。(2)ATF4直接靶向BNIP3启动子区内多个位点激活转录。线粒体功能实验表明ATF4通过BNIP3增加DPSCs线粒体自噬水平、线粒体功能和成牙本质分化潜能。(3)KPNB1识别ATF4后引领其入核,调控BNIP3表达和DPSCs成牙本质分化。结论:ATF4经KPNB1识别其核定位序列后入核激活BNIP3转录,从而优化线粒体功能,促进DPSCs成牙本质向分化。

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纳米氧化锌表面修饰对羟基磷灰石晶须成骨诱导性的影响

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纳米氧化锌表面修饰对羟基磷灰石晶须成骨诱导性的影响

第十六次全国牙体牙髓病学学术大会

作者：尉鹏功张泽颖鄢晓媛邱秋劲王万锋仇丽鸿中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科辽宁省口腔医学疾病重点实验室

目的:拥有高长径比的羟基磷灰石晶须(HAw)具有提高基质材料力学性能的优势,但HAw的低成骨诱导性限制了其在骨缺损修复中的应用。本研究制备表面含纳米氧化锌颗粒的羟基磷灰石晶须(nano-ZnO/HAw),探索具有增强基质材料力学性能,同时兼备...

目的:拥有高长径比的羟基磷灰石晶须(HAw)具有提高基质材料力学性能的优势,但HAw的低成骨诱导性限制了其在骨缺损修复中的应用。本研究制备表面含纳米氧化锌颗粒的羟基磷灰石晶须(nano-ZnO/HAw),探索具有增强基质材料力学性能,同时兼备良好成骨诱导性的骨缺损修复材料。方法:检测nano-ZnO/HAw对基质材料抗压强度的影响;扫描电镜(SEM)观测HAw对成骨细胞形貌的影响,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验定量分析细胞膜完整性;对nano-ZnO/HAw在体外对成骨细胞分化、及体内大鼠股骨缺损修复的影响进行验证。结果:Nano-ZnO/HAw对基质材料的增强作用高于HAw。SEM可捕捉到HAw刺破成骨细胞。与HAw共培养的成骨细胞上清液中LDH含量显著升高,而5%和10%nano-ZnO颗粒表面修饰可降低HAw造成的细胞内LDH外泄。相比于HAw,与nano-ZnO/HAw共培养的成骨细胞的碱性磷酸酶活性及成骨向分化标志基因表达水平升高。同时,植入nano-ZnO/HAw骨缺损区的影像学密度、骨体积分数和新生骨组织量高于HAw组。结论:Nano-ZnO/HAw具有更好的增强基质材料抗压强度的性能;同时,nano-ZnO颗粒表面修饰降低HAw对成骨细胞的机械性损伤,提高HAw的成骨诱导性。

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书信里的账簿——张爱玲“美国时期”的经济状况

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新文学史料 2024年第1期 23-29页

作者：竺劲浙江大学哲学学院

1955年10月,张爱玲离开中国香港,乘坐克利夫兰总统号邮轮赴美,开启了她的“美国时期”。①与她早年成名的“上海时期”相较,此后又是一番天地。由于张爱玲刻意避世的生活方式,外人难以了解作家生活、创作的具体情形,一度有人讹传她晚景... 详细信息

1955年10月,张爱玲离开中国香港,乘坐克利夫兰总统号邮轮赴美,开启了她的“美国时期”。①与她早年成名的“上海时期”相较,此后又是一番天地。由于张爱玲刻意避世的生活方式,外人难以了解作家生活、创作的具体情形,一度有人讹传她晚景凄凉,甚至在1988年误传出死讯②。

关键词：张爱玲克利夫兰中国香港避世成名

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miR-138-5p在微炎症环境中对人牙髓干细胞成牙本质向分化作用研究

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中国实用口腔科杂志 2023年第4期16卷 444-451页

作者：鄢晓媛张泽颖喻施文邱秋劲尉鹏功郭佳杰仇丽鸿中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科辽宁省口腔疾病重点实验室辽宁沈阳110002

目的研究miR-138-5p在微炎症环境对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)成牙本质向分化过程中的作用。方法研究于2021年5月至2022年3月在中国医科大学口腔医学院中心实验室进行。原代培养并分离细胞,通过流式细胞术检... 详细信息

目的研究miR-138-5p在微炎症环境对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)成牙本质向分化过程中的作用。方法研究于2021年5月至2022年3月在中国医科大学口腔医学院中心实验室进行。原代培养并分离细胞,通过流式细胞术检测细胞表面间充质干细胞表面标记分子CD29、CD105、CD146及造血干细胞表面标记分子CD14、CD45的细胞阳性率,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色鉴定是否为hDPSCs及其成骨分化能力。根据ALP染色结果确定提高h DPSCs ALP活性的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)有效质量浓度,按照hDPSCs培养条件的不同分为生长培养液(GM)组(仅使用GM培养)、成牙本质向分化诱导培养液(OM)组(仅使用OM培养)、OM+LPS组(使用含有效质量浓度LPS的OM培养)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组hDPSCs白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、成牙本质向分化相关指标[牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)]及miR-138-5p的表达差异。将上述3组分别分为敲减miRNA阴性对照小干扰RNA(以下简称“NC”)亚组及敲减miR-138-5p小干扰RNA(以下简称“i-138”)亚组,通过qRT-PCR检测各亚组的成牙本质向分化相关指标,以及通过ALP染色检测敲减miR-138-5p后对微炎症环境中hDPSCs成牙本质向分化的影响。结果分离出的原代细胞中表达间充质干细胞表面标记分子CD29、CD105的细胞阳性率超过95%,表达CD146的细胞阳性率超过30%,而表达造血干细胞表面标记分子CD14、CD45的细胞阳性率低于2%,且OM培养下细胞的ALP染色强于GM。ALP染色结果显示,含有0.01μg/mL质量浓度LPS的OM能有效促进hDPSCs成牙本质向分化。qRTPCR结果显示,OM+LPS组IL-6和TNF-α相对表达量均高于OM组,差异均有统计学意义(均P <0.001)。细胞培养7 d后,OM组DSPP、miR-138-5p相对表达量均显著高于GM组;细胞培养4、7 d后,OM组DMP1相对表达量显著高于GM组;细胞培养1、4、7 d后,OM+LPS组DSPP与DMP1相对表达量均显著高于OM组;细胞培养4、7 d后,OM+LPS组miR-138-5p相对表达量显著高于OM组,差异均有统计学意义(均P <0.001)。敲减miR-138-5p后,i-138 OM组和i-138 OM+LPS组分别与NC OM组和NC OM+LPS组相比,miR-138-5p、DSPP、DMP1相对表达量均减少,差异均有统计学意义(均P <0.001),且ALP染色强度均减弱。结论微炎症环境可促进hDPSCs的成牙本质向分化,miR-138-5p可能在此过程中对h DPSCs成牙本质向分化起促进作用。

关键词：微炎症微小RNA 人牙髓干细胞成牙本质向分化脂多糖

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钢管混凝土超大型冷却塔抗倒塌性能研究

华中科技大学学报（自然科学版） 2024年第2期52卷 134-141页

作者：查晓雄汪凯超陈德劲哈尔滨工业大学(深圳)土木与环境工程学院广东深圳518055

提出一种施工性能优异的钢管混凝土冷却塔,并对其抗倒塌性能展开研究.首先,给出钢管混凝土冷却塔几何设计的计算公式;然后,利用有限元研究该冷却塔在不同缺口圆心角(删除支柱所对应的圆心角)下的倒塌原因及倒塌形态,从倒塌的难易程度、... 详细信息

提出一种施工性能优异的钢管混凝土冷却塔,并对其抗倒塌性能展开研究.首先,给出钢管混凝土冷却塔几何设计的计算公式;然后,利用有限元研究该冷却塔在不同缺口圆心角(删除支柱所对应的圆心角)下的倒塌原因及倒塌形态,从倒塌的难易程度、影响范围及动能大小三个方面对比了钢管混凝土和钢筋混凝土冷却塔的抗倒塌性能.研究结果表明:钢管混凝土冷却塔的倒塌主要由筒壁的局部失稳引起;仅当缺口圆心角超过126°时,冷却塔才会发生整体倒塌破坏;钢管混凝土冷却塔的抗倒塌性能优于钢筋混凝土冷却塔,即相对于钢筋混凝土冷却塔,钢管混凝土冷却塔开始发生倒塌时的缺口圆心角较大,倒塌过程中的动能峰值仅为钢筋混凝土冷却塔的1/10左右,且倒塌后的废墟尺寸较小.

关键词：自然通风冷却塔超大型钢混凝土组合结构抗倒塌性能倒塌形态

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冷却塔定向拆除时剩余支柱的轴力计算方法

哈尔滨工业大学学报 2024年第2期56卷 10-17页

作者：查晓雄汪凯超陈德劲哈尔滨工业大学(深圳)土木与环境工程学院广东深圳518055

为了使冷却塔的定向拆除更加安全可控,对冷却塔保留柱轴向力的计算方法展开研究。根据力的相似关系给出支柱轴向力与其Z向力之间的关系式,基于平截面假定推导保留柱Z向力的计算公式;利用有限元研究环梁和支柱的弹性模量、支柱高度、保... 详细信息

为了使冷却塔的定向拆除更加安全可控,对冷却塔保留柱轴向力的计算方法展开研究。根据力的相似关系给出支柱轴向力与其Z向力之间的关系式,基于平截面假定推导保留柱Z向力的计算公式;利用有限元研究环梁和支柱的弹性模量、支柱高度、保留柱数量以及相邻柱柱顶所对应的圆心角5种参数对保留柱Z向力的影响;根据有限元的结果对保留柱Z向力的计算公式进行修正,并研究修正后公式的适用性。结果表明:爆破后的冷却塔在所有保留柱上并不满足平截面假定;在实际工程范围内,上述5种参数不影响保留柱Z向力的分布规律为Z向力沿着y轴方向上的分布形态始终“两端受压,中间受拉”,且保留柱中的最大压力始终出现在第n排保留柱上,最大拉力始终出现在第(n-4)排保留柱上;当爆破圆心角为200°~240°时,修正后计算值的相对误差在21%以内,且该公式在不同冷却塔上具有良好的适用性。保留柱轴向力的计算公式从力学角度为冷却塔的拆除提供了理论支撑,增加了拆除工作的安全性。

关键词：自然通风冷却塔钢筋混凝土结构建筑拆除爆破拆除轴力

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