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重组大肠杆菌全细胞转化苹果酸合成丙酮酸

中国食品学报 2024年第7期24卷 219-228页

作者：付声亮邹诗瑶高娃赵筱王金华王永泽工业发酵省部共建协同创新中心武汉430068 湖北省工业微生物重点实验室武汉430068 湖北工业大学生物工程与食品学院武汉430068

拟建立一条以苹果酸为原料,通过大肠杆菌全细胞转化获得丙酮酸的合成途径。以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,在pET28a上共表达内源的苹果酸酶(ME)和来自博伊丁假丝酵母(Candida boidinii)的醛糖还原酶(AR),并对细胞浓度、底物浓度、温度和pH... 详细信息

拟建立一条以苹果酸为原料,通过大肠杆菌全细胞转化获得丙酮酸的合成途径。以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,在pET28a上共表达内源的苹果酸酶(ME)和来自博伊丁假丝酵母(Candida boidinii)的醛糖还原酶(AR),并对细胞浓度、底物浓度、温度和pH值等催化关键因素进行研究。共表达后大肠杆菌苹果酸酶和博伊丁假丝酵母醛糖还原酶酶活分别为(2.8±0.21),(3.1±0.34)U/mL。适宜的催化条件为:细胞浓度OD600nm值为30,底物苹果酸质量浓度为30 g/L,木糖和苹果酸物质的量比为1.0,温度为40℃,反应体系pH值为7.8,丙酮酸产量最高可达23.16 g/L。本研究为生物法合成丙酮酸提供了一种新的方法。

关键词：丙酮酸全细胞催化苹果酸苹果酸酶醛糖还原酶

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2023年台湾社情民意综述

两岸关系 2024年第3期 19-21页

作者：赵筱婧李昊不详

2023年台湾地区民众对民进党施政的不满意度持续增加,对美疑虑上升,呼吁台海和平。中国内地出台一系列推动两岸同胞往来,完善台胞权益保障,深化两岸融合发展的政策措施,深受台湾地区民众好评。岛内民意支持两岸和平发展的声音越来越多。

关键词：两岸和平发展民进党两岸同胞社情民意台湾地区政策措施台海和平权益保障

基于开放数据的城市内涝点空间分布特征及集群识别分析——以昆明市主城区为例

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云南大学学报（自然科学版） 2024年第4期46卷 697-708页

作者：罗兴云赵筱青张正欣罗桑扎西云南大学地球科学学院云南昆明650500 云南大学建筑与规划学院云南昆明650500 江苏省智慧城市设计仿真与可视化技术工程实验室江苏南京210093

以城市内涝点空间分布特征和同质性内涝点集群的识别及其孕灾环境分析为核心,选取昆明市主城区为案例地展开研究.以2020年新闻媒体公布的内涝点信息作为数据源,首先使用核密度和K函数分析内涝点的整体分布和集聚程度;其次,采用HDBSCAN... 详细信息

以城市内涝点空间分布特征和同质性内涝点集群的识别及其孕灾环境分析为核心,选取昆明市主城区为案例地展开研究.以2020年新闻媒体公布的内涝点信息作为数据源,首先使用核密度和K函数分析内涝点的整体分布和集聚程度;其次,采用HDBSCAN空间聚类算法识别昆明市主城区不同类型的内涝点集群,并分析其集群特征;最后,结合孕灾环境数据,以集群为最小研究单元,探讨其孕灾环境的差异性.研究结果显示:①内涝点分布在空间上存在显著的尺度分异,呈现出大离散、小集聚的空间分布模式;②昆明市内涝点可划分为8种类型,每种类型至少有2个集群,最多有4个集群;③不同内涝点集群的孕灾环境存在一定差异,其中地形起伏对内涝点分布的影响最大,即集群范围内地形越崎岖不平,其发生内涝灾害的可能性越大.在城市内涝防治工作中可依据集群空间范围及孕灾特征制定差异化的防治措施,从而科学合理的分配防治力度,提高城市内涝治理工作的科学性及精细度.

关键词：城市内涝空间分布集群特征开放数据昆明

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后618时代，除了价格还能拼什么？

后618时代，除了价格还能拼什么？

厌氧表达乳酸脱氢酶以提高大肠杆菌产D-乳酸光学纯度

21世纪经济报道

作者：赵筱妤

618结束一周后，纷纷扰扰的讨论仍未平息。和去年一样，各平台不再公布具体的GMV数据。甚至连品牌方也少有分享战报。在此背后，是我国网上零售额增速放缓的大趋势。“没有参加618，也没有关注，平时该买的都买了。”在深圳工作的杨女... 详细信息

618结束一周后，纷纷扰扰的讨论仍未平息。和去年一样，各平台不再公布具体的GMV数据。甚至连品牌方也少有分享战报。在此背后，是我国网上零售额增速放缓的大趋势。“没有参加618，也没有关注，平时该买的都买了。”在深圳工作的杨女士在消费者访谈中说道。而这并非个例，基......

关键词：电商平台品牌商消费者家电品牌

来源： cnki报纸评论

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生物技术通报 2024年第5期40卷 290-299页

作者：王周余杰王金华王永泽赵筱湖北工业大学生命科学与健康工程学院武汉430068 发酵工程教育部重点实验室武汉430068 工业发酵省部共建协同创新中心武汉430068

【目的】为解决在D-乳酸工业发酵生产中使用农业粗加工或废弃物等廉价原料(含有少量L-乳酸)而导致终产物D-乳酸光纯降低的问题。【方法】构建了带有不同启动子的L-乳酸脱氢酶基因lldD的表达质粒:pUC19-PLD(PpflBp6)、pUC19-NLD(PnirB)及... 详细信息

【目的】为解决在D-乳酸工业发酵生产中使用农业粗加工或废弃物等廉价原料(含有少量L-乳酸)而导致终产物D-乳酸光纯降低的问题。【方法】构建了带有不同启动子的L-乳酸脱氢酶基因lldD的表达质粒:pUC19-PLD(PpflBp6)、pUC19-NLD(PnirB)及pUC19-PNLD(PpflBp6-PnirB),并将它们分别转化入大肠杆菌D-乳酸工程菌HBUT-D中,得到菌株HBUT-D3、HBUT-D5和HBUT-D7。通过LldD的酶活检测以及对NBS培养基(添加1 g/L L-乳酸)发酵结果的TOPSIS多元评估,优选出可快速去除L-乳酸且不影响D-乳酸发酵的菌株,并使用农业廉价原料进行发酵。【结果】HBUT-D7的LldD比酶活为64 U/g,L-乳酸的消耗速率为34 mg/(L·h),D-乳酸的生产强度为4.09 g/(L·h),综合评估为最优菌株。以玉米浆为原料进行发酵时,HBUT-D及HBUT-D7的L-乳酸消耗速率分别为10.41 mg/(L·h)及34.75 mg/(L·h);D-乳酸生产强度分别为4.24 g/(L·h)及3.87 g/(L·h);D-乳酸光学纯度分别为99.07%及99.92%。以糖蜜为原料进行发酵时,HBUT-D及HBUT-D7的L-乳酸消耗速率为6.87 mg/(L·h)和17.18 mg/(L·h);D-乳酸生产强度分别为1.93 g/(L·h)及1.88 g/(L·h);D-乳酸光学纯度分别为99.22%及99.99%。【结论】厌氧诱导启动子的表达质粒可提高菌株HBUT-D7的L-乳酸脱氢酶酶活,使其在使用廉价原料发酵时能有效消除L-乳酸,提高发酵终产物D-乳酸的光学纯度。

关键词： D-乳酸光学纯度大肠杆菌 L-乳酸脱氢酶 nirB启动子 pflB启动子串联启动子

基于线粒体形态特征与UPLC-Triple-TOF-MS整合分析的人参/三七心肌保护物质辨析研究

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中国中药杂志 2024年第10期49卷 2766-2775页

作者：史雪敬陈彦羽蔡思怡邵青赵筱萍浙江中医药大学基础医学院浙江杭州310053 浙江大学药学院浙江杭州310058 浙江中医药大学中医药科学院浙江杭州310053

人参为补气强身之要药,三七具有散血定痛之功,常用于治疗心脉瘀阻所致的心肌缺血性疾病。线粒体功能障碍常伴随线粒体形态的异常改变,其可塑性和动态性在心血管疾病中至关重要。该研究将原代乳鼠心肌细胞缺氧培养4 h再复氧2 h,构建心肌... 详细信息

人参为补气强身之要药,三七具有散血定痛之功,常用于治疗心脉瘀阻所致的心肌缺血性疾病。线粒体功能障碍常伴随线粒体形态的异常改变,其可塑性和动态性在心血管疾病中至关重要。该研究将原代乳鼠心肌细胞缺氧培养4 h再复氧2 h,构建心肌细胞缺氧复氧损伤模型。采用荧光探针MitoTracker Deep Red标记心肌细胞线粒体,Hoechst 33342标记细胞核,使用高内涵荧光成像系统采集心肌细胞荧光图像,运用ImagePro Plus软件对图像自动批量处理并提取线粒体形态特征的量化参数,选取代表性参数用于评价线粒体形态功能改变进而筛选人参、三七有效组分;进一步整合UPLC-Triple-TOF-MS技术,筛选人参、三七有效成分。结果显示组分RS-2、RS-4、SQ-1、SQ-4可以同时显著提高线粒体3个形态参数值,增加线粒体长度、分支程度和面积,有效改善缺氧复氧损伤引起的心肌细胞线粒体形态改变。对有效组分的主要成分筛选发现20(R)-人参皂苷Rg_(3)、人参皂苷Re、七叶胆苷ⅩⅦ对心肌细胞线粒体保护作用最佳,进一步研究表明20(R)-人参皂苷Rg_(3)可能通过上调视神经萎缩蛋白1(optic atrophy 1,OPA1)和线粒体融合蛋白2(mitofusin 2,MFN2)表达,人参皂苷Re和七叶胆苷ⅩⅦ通过上调OPA1蛋白表达,促进线粒体膜融合,减轻线粒体损伤,从而发挥心肌细胞的保护作用。该研究为从人参、三七中发现创新药物提供了实验依据,也为中药心肌保护有效组分与有效成分的规模化筛选提供了新方法。

关键词：人参三七线粒体形态缺氧复氧活性成分心肌保护荧光成像

强化厌氧表达dld基因以提高大肠杆菌工程菌发酵产L-乳酸的光学纯度

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中国酿造 2024年第8期43卷 115-121页

作者：余杰李正王金华王永泽高娃赵筱湖北工业大学生命科学与健康工程学院湖北武汉430068 湖北工业大学发酵工程教育部重点实验室湖北武汉430068 湖北工业大学工业发酵省部共建协同创新中心湖北武汉430068

为去除廉价发酵原料中的D-乳酸从而提高发酵最终产物L-乳酸的光学纯度,该研究通过构建带有不同厌氧诱导启动子(pflBp6、pnirB、pflBp6-pnirB)的D-乳酸脱氢酶基因(dld)的表达质粒,并将其分别转入大肠杆菌(Escherichia coli)HBUT-L,加强... 详细信息

为去除廉价发酵原料中的D-乳酸从而提高发酵最终产物L-乳酸的光学纯度,该研究通过构建带有不同厌氧诱导启动子(pflBp6、pnirB、pflBp6-pnirB)的D-乳酸脱氢酶基因(dld)的表达质粒,并将其分别转入大肠杆菌(Escherichia coli)HBUT-L,加强其在发酵产L-乳酸的同时消除外源D-乳酸的能力。通过装液量与转速的单因素试验筛选最优的质粒表达条件及菌株,并在无机盐培养基与玉米浆培养基中进行发酵验证。结果表明,在装液量为200 mL/250 mL、转速为150 r/min的条件下,含有启动子pflBp6-pnirB的表达质粒的工程菌株HBUT-L4发酵18 h时D-乳酸脱氢酶活力最高,为81.1 U/g。在此条件下进行无机盐培养基和玉米浆培养基发酵时,工程菌株HBUT-L4相对于出发菌株HBUT-L,D-乳酸消耗速率分别提高250%、217%,L-乳酸的光学纯度分别从96.32%、98.48%提升至99.95%、99.98%。在大肠杆菌工程菌发酵L-乳酸的过程中,带有厌氧诱导启动子pflBp6-pnirB的表达质粒可提高D-乳酸脱氢酶活力,强化菌株消除外源D-乳酸,进而提高L-乳酸的光学纯度的能力,具有重要的工业化应用价值。

关键词： L-乳酸光学纯度启动子 D-乳酸脱氢酶基因大肠杆菌