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AAV-TGFβ3的构建及其与AV-TGFβ1表达系统对反分化髓核细胞蛋白多糖合成的影响

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中国脊柱脊髓杂志 2006年第12期16卷 946-950,I0024页

作者：赛佳明胡有谷王德春青岛大学医学院附属医院骨科山东省创伤骨科研究所山东省青岛市266003

目的:比较转化生长因子(TGF)β3腺相关病毒(AAV-TGFβ3)与TGFβ1腺病毒(AV-TGFβ1)表达系统对反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖合成的生物学效应。方法:制备具有感染活性的AAV-TGFβ3并采用酶切电泳和免疫荧光对其进行鉴定。将AAV-TGFβ3... 详细信息

目的:比较转化生长因子(TGF)β3腺相关病毒(AAV-TGFβ3)与TGFβ1腺病毒(AV-TGFβ1)表达系统对反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖合成的生物学效应。方法:制备具有感染活性的AAV-TGFβ3并采用酶切电泳和免疫荧光对其进行鉴定。将AAV-TGFβ3和AV-TGFβ1分别转染反分化早、晚期髓核细胞,采用免疫印迹法检测TGFβ3和TGFβ1蛋白的表达,并通过Antonopulos法分别检测AAV-TGFβ3和AV-TGFβ1对蛋白多糖合成的生物学效应。结果:AAV-TGFβ3转染可提高反分化早、晚期髓核细胞TGFβ3蛋白的表达,并促进其蛋白多糖的合成。转染后第12天,蛋白多糖含量达到峰值,分别为0.399±0.029和0.152±0.011,此后蛋白多糖含量缓慢降低;于转染后第2个月,蛋白多糖含量稳定在较高水平,分别为0.309±0.021和0.115±0.009。AV-TGFβ1转染亦可提高反分化早、晚期髓核细胞TGFβ1蛋白的表达,但其仅促进反分化早期髓核细胞蛋白多糖的合成,转染后第10天蛋白多糖含量达到峰值(0.413±0.041),此后蛋白多糖含量快速降低,转染后第2个月时蛋白多糖含量降至较低水平(0.198±0.013);对于反分化晚期髓核细胞,AV-TGFβ1则抑制其蛋白多糖的合成。结论:AAV-TGFβ3可稳定地促进反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖的合成;AV-TGFβ1仅一过性地促进反分化早期髓核细胞蛋白多糖的合成,而且抑制反分化晚期髓核细胞蛋白多糖的合成。

关键词：腺相关病毒腺病毒转化生长因子β3 转化生长因子β1 髓核蛋白多糖

慢病毒GV115-caspase-3 siRNA重组表达系统的构建及鉴定

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医学研究杂志 2015年第11期44卷 40-43页

作者：赛佳明马学晓邱晨生陈伯华胡有谷青岛大学附属医院脊柱外科 266003

目的构建高效的慢病毒GV115-caspase-3 siRNA重组表达系统。方法根据RNA干扰序列设计原则,设计4个可能的caspase-3 siRNA序列。应用全基因合成技术和亚克隆技术构建GV115-caspase-3 siRNA并采用PCR和测序对其鉴定。病毒包装后转染人胚肾... 详细信息

目的构建高效的慢病毒GV115-caspase-3 siRNA重组表达系统。方法根据RNA干扰序列设计原则,设计4个可能的caspase-3 siRNA序列。应用全基因合成技术和亚克隆技术构建GV115-caspase-3 siRNA并采用PCR和测序对其鉴定。病毒包装后转染人胚肾293T细胞,通过应用RT-PCR技术检测转染后caspase-3基因敲减效率,筛选高效的GV115-caspase-3 siRNA。结果 GV115-caspase-3 siRNA质粒PCR鉴定显示位于341bp附近的条带,测序结果与设计的基因序列完全吻合,4个可能的caspase-3 siRNA序列中基因敲减效率最高的可达到84.2%。结论成功构建高效的慢病毒GV115-caspase-3 siRNA重组表达系统。

关键词：慢病毒 caspase-3 RNA干扰基因治疗

AAV-TGFβ_1的构建及其与AV-TGFβ_1对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较

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中国骨与关节损伤杂志 2008年第2期23卷 116-118页

作者：赛佳明胡有谷王德春青岛大学医学院附属医院骨科山东省创伤骨科研究所山东省青岛市266021

目的探讨转化生长因子β1腺相关病毒表达系统(AAV-TGFβ1)的构建及其与转化生长因子β1腺病毒表达系统(AV-TGFβ1)对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较。方法采用PCR技术扩增转化生长因子β1(TGFβ1)基因,并于其两端分别连接EcoRI和SalI... 详细信息

目的探讨转化生长因子β1腺相关病毒表达系统(AAV-TGFβ1)的构建及其与转化生长因子β1腺病毒表达系统(AV-TGFβ1)对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较。方法采用PCR技术扩增转化生长因子β1(TGFβ1)基因,并于其两端分别连接EcoRI和SalI酶切位点。将TGFβ1基因亚克隆于腺相关病毒(AAV)载体中,并经酶切和测序分析进行鉴定。AAV-TGFβ1病毒被包装并转染H293细胞,通过免疫荧光检测AAV介导的目的基因表达。利用AAV-EGFP病毒检测AAV对髓核细胞的转染效率。AAV-TGFβ1和AV-TGFβ1分别转染髓核细胞后,通过Antonopulos法检测蛋白多糖的合成。结果测序分析证明TGFβ1序列与NCBI Gene Bank所报道的一致。经酶切鉴定证实AAV-TGFβ1重组质粒被成功构建。AAV可介导TGFβ1高效表达并高效转染髓核细胞。AV-TGFβ1可快速一过性地促进髓核细胞蛋白多糖合成,而AAV-TGFβ1可稳定促进蛋白多糖合成。结论AAV-TGFβ1病毒被成功构建并可稳定地促进髓核细胞蛋白多糖的合成。

关键词：腺相关病毒腺病毒转化生长因子β1 髓核蛋白多糖

反分化早、晚期髓核细胞的建立及AV-TGFβ_1对其蛋白多糖的影响

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颈腰痛杂志 2006年第6期27卷 455-458页

作者：赛佳明胡有谷王德春青岛市骨伤医院骨科实验室山东青岛266021 青岛大学医学院附属医院骨科 266003

目的建立反分化早、晚期兔腰椎间盘髓核细胞模型,并比较腺病毒(AV)介导TGFβ1对其蛋白多糖合成的生物学作用。方法选用一月龄纯种新西兰兔3只。无菌分离髓核组织,并用0.125%的胰蛋白0.25%的Ⅰ型胶原消化分离细胞。通过反复消化传代的方... 详细信息

目的建立反分化早、晚期兔腰椎间盘髓核细胞模型,并比较腺病毒(AV)介导TGFβ1对其蛋白多糖合成的生物学作用。方法选用一月龄纯种新西兰兔3只。无菌分离髓核组织,并用0.125%的胰蛋白0.25%的Ⅰ型胶原消化分离细胞。通过反复消化传代的方法建立反分化早、晚期髓核细胞模型并通过细胞形态的观察和Ⅱ型胶原表达水平的的检测对其鉴定。采用Antonopulos法检测AV-TGFβ1转染后反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖的含量。结果原代培养细胞呈多欠形或圆形,反分化早期细胞呈梭形,反分化晚期细胞类似于成纤维细胞。伴随着细胞形态的改变,Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达亦逐渐降低。AV-TGFβ1可促进反分化早期髓核细胞蛋白多糖的合成。而对于反分化晚期髓核细胞,AV-TGFβ1则抑制其蛋白多糖的合成。结论体外传代培养的方法可用于建立反分化早、晚期髓核细胞模型。AV-TGFβ1仅可促进反分化早、期髓核细胞蛋白多糖的合成。

关键词：转化生长因子β1(TGFβ1 ) 腺病毒髓核细胞蛋白多糖

BMP_2-海藻酸钠-壳聚糖微球对骨折愈合影响

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青岛大学医学院学报 2016年第1期52卷 68-70页

作者：赛佳明陈东亮江晓路山东大学齐鲁医院(青岛院区)手足外科山东青岛266021 中国海洋大学

目的探讨骨形态发生蛋白2(BMP_2)-海藻酸钠-壳聚糖微球的制备及其促进兔桡骨骨折愈合的作用。方法采用脉冲电场法制备BMP_2-海藻酸钠-壳聚糖微球,观测其形态、尺寸,测定BMP_2载药量、包封率,并进行体外释放实验。制备新西兰兔骨缺损模型... 详细信息

目的探讨骨形态发生蛋白2(BMP_2)-海藻酸钠-壳聚糖微球的制备及其促进兔桡骨骨折愈合的作用。方法采用脉冲电场法制备BMP_2-海藻酸钠-壳聚糖微球,观测其形态、尺寸,测定BMP_2载药量、包封率,并进行体外释放实验。制备新西兰兔骨缺损模型,随机分BMP_2微球组、BMP_2注射组、空微球组及空白对照组4组。于术后第30天行X线检查,比较各组骨折愈合情况。结果微球具有很好的圆形形态,平均粒径为900.79μm;微球的平均包封率为(84.97±3.49)%,BMP_2载药量平均为(16.34±0.48)%。体外模拟体液中,微球所载BMP_2被缓释出来,在第7天时87.33%的BMP_2被释放出来,在第14天时BMP_2被完全释放出来。术后第30天BMP_2微球组的骨折愈合情况较各对照组好,差异有显着性(H=6.87,P<0.05)。结论 BMP_2-海藻酸钠-壳聚糖微球具有良好的缓释效果,局部植入能促进骨折修复愈合。

关键词：骨形态发生蛋白质2 海藻酸钠壳聚糖微球体骨折愈合

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生长激素生物学效应的研究进展

现代生物医学进展 2009年第17期9卷 3390-3392页

作者：赛佳明张亦军江晓路青岛市骨伤科医院山东青岛266021 中国海洋大学山东青岛266021

人类生长激素(growth hormone,GH)最先作为替代疗法用于治疗儿童GH缺乏性侏儒症,后来的研究表明,它具有明显的节氮效应,因而广泛用于烧伤、感染及严重创伤,并取得了良好疗效。此后,进一步研究表明GH能促进胰岛素样生长因子(IGF)的形成... 详细信息

人类生长激素(growth hormone,GH)最先作为替代疗法用于治疗儿童GH缺乏性侏儒症,后来的研究表明,它具有明显的节氮效应,因而广泛用于烧伤、感染及严重创伤,并取得了良好疗效。此后,进一步研究表明GH能促进胰岛素样生长因子(IGF)的形成进而促进骨折愈合,使其应用范围进一步扩大。本文就生长激素生物学效应进行综述。

关键词：生长激素(GH) 生物学效应

江苏连云港张庄墓地五代至北宋时期墓葬发掘简报

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华夏考古 2024年第1期 21-32页

作者：朱良赛杜平陈渊明连云港市文物保护和考古研究所江苏连云港市222000 连云港市博物馆江苏连云港市222000

2018年度,连云港海州张庄墓地发掘清理了13座五代至北宋时期的船形砖室墓,其墓室形制、结构特征、出土器物特征及墓室构筑工艺与长江中下游地区同时期船形砖室墓差异较大,显示出较强的地域性。新的考古发现为研究五代至北宋时期船形砖... 详细信息

2018年度,连云港海州张庄墓地发掘清理了13座五代至北宋时期的船形砖室墓,其墓室形制、结构特征、出土器物特征及墓室构筑工艺与长江中下游地区同时期船形砖室墓差异较大,显示出较强的地域性。新的考古发现为研究五代至北宋时期船形砖室墓的墓葬形制、构筑工艺、分期断代和分布传播提供了新材料。

关键词：连云港海州张庄墓地五代至北宋船形砖室墓