慢病毒GV115-caspase-3 siRNA重组表达系统的构建及鉴定

作     者：赛佳明 马学晓 邱晨生 陈伯华 胡有谷 

作者机构：青岛大学附属医院脊柱外科266003 

出 版 物：《医学研究杂志》 (Journal of Medical Research)

年 卷 期：2015年第44卷第11期

页      面：40-43页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81171758) 

主　　题：慢病毒 caspase-3 RNA干扰 基因治疗 

摘      要：目的构建高效的慢病毒GV115-caspase-3 siRNA重组表达系统。方法根据RNA干扰序列设计原则,设计4个可能的caspase-3 siRNA序列。应用全基因合成技术和亚克隆技术构建GV115-caspase-3 siRNA并采用PCR和测序对其鉴定。病毒包装后转染人胚肾293T细胞,通过应用RT-PCR技术检测转染后caspase-3基因敲减效率,筛选高效的GV115-caspase-3 siRNA。结果 GV115-caspase-3 siRNA质粒PCR鉴定显示位于341bp附近的条带,测序结果与设计的基因序列完全吻合,4个可能的caspase-3 siRNA序列中基因敲减效率最高的可达到84.2%。结论成功构建高效的慢病毒GV115-caspase-3 siRNA重组表达系统。