检索结果-南通市图书馆

作者：贠小芸广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:萜类化合物(Terpenoids)为主要存在于植物的根、茎、花、叶、花、果实中的天然产物。三萜及三萜皂苷是由6个异戊二烯单元组成的萜类化合物,化学结构复杂,药理活性多样。乌索烷型三萜皂苷是由α-香树脂醇(α-amyrin)衍生而来的五环... 详细信息

目的:萜类化合物(Terpenoids)为主要存在于植物的根、茎、花、叶、花、果实中的天然产物。三萜及三萜皂苷是由6个异戊二烯单元组成的萜类化合物,化学结构复杂,药理活性多样。乌索烷型三萜皂苷是由α-香树脂醇(α-amyrin)衍生而来的五环三萜类化合物。多种乌索烷型三萜,如熊果酸、18-去氢乌索酸等,具有抗菌消炎、抗血栓、保肝等生物学活性,有着较高的药物开发价值。可大多数植物所含的三萜及三萜皂苷组成成分复杂,含量不均,分离提纯提取困难,严重限制了它们的开发与利用。近年来,随着合成生物学的发展,异源生物合成使得大量获得有药用价值的天然活性成分成为了可能。因此,本论文根据合成生物学的原理,以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WAT11为宿主,并结合酵母内源萜类合成通路相关关键酶基因的调控,构建高产α-amyrin的酵母菌株,为后期构建完整的三萜皂苷合成通路,并实现在酿酒酵母中持续、大量生产熊果酸、18-去氢乌索酸等乌索烷型三萜化合物奠定基础。方法:***11基因编辑靶点分析通过查阅文献,明确本实验室保存的酿酒酵母菌种WAT11的营养缺陷型。在NCBI上搜索各个缺陷基因在酿酒酵母S288c染色体的分布位置,提取基因组,PCR扩增各缺陷基因,测序,分析基因序列,了解WAT11营养缺陷基因的失活方式以及各个基因编码区的上下游序列,以营养缺陷基因位点作为基因编辑靶点。***11基因编辑根据靶位点的实际序列,用在线软件CHOPCHOP(http://***)设计gRNA序列,以带有trp1-gRNA序列的pRS42H-trp质粒为模板,用反向PCR(Inverse PCR,iPCR)方法扩增出含有目标靶位点gRNA序列的线性化片段,经T4连接酶环化后,构建各个靶位点的特定gRNA质粒。分别以酿酒酵母WAT11、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的基因组为模板,扩增MVA途径的关键基因,插入p426-GPD载体。设计带有相应靶位点同源臂的引物,扩增包含目的基因表达盒的供体片段,用CRISPR/Cas9技术实现目的基因的基因组整合或靶点的基因敲除,获得WAT11衍生菌株。***11衍生菌株代谢产物分析以相同条件培养WAT11衍生菌株,以角鲨烯为标示化合物评价衍生菌株的产量。用GC/MS测定三萜的共同中间体角鲨烯(经氧化、环合后可生成α-amyrin)含量,以WAT11为参照,筛选出角鲨烯产率最高的衍生菌株。进一步,将课题组前期构建的香树脂醇合酶基因IaAS1基因的表达质粒pEXPR-IaAS1转入该衍生菌株,获得带游离质粒的酵母菌株,与此同时用CRISPR/Cas9的技术构建将IaAS1基因表达盒整合进基因组的酵母菌株,比较带游离质粒菌株与整合基因组菌株的α-amyrin的产量,筛选出α-amyrin积累量较高的目标菌株。结果:1.确定了对WAT11基因编辑的靶点由文献可知,WAT11为trp1、ade2、can1、ura3、his3、leu2营养缺陷型菌株,且基因序列连续,不具内含子。此外,WAT11A萜类合成通路中二萜分支通路编码GGPPS的BTS1基因完整连续。故选定LEU2、TRP1、CAN1、URA3、ADE2、HIS3、BTS1这7个靶点作为基因编辑位点,进行后续实验。2.构建了10种WAT11衍生菌株针对萜类合成通路中tHMGR(记为t)、FPPS(f)、SS(s)、IPPI1(i1)、IPPI2(i2)、ACS(A),成功构建了WAT11t、WAT11f、WAT11s、WAT11i1、WAT11i2、WAT11ts、WAT11ti1、WAT11tf、WAT11tfA这9株基因敲入菌株,还构建了1株敲除二萜通路途径BTS1(g)基因的菌株WAT11Δg。在相同条件下培养72h,比较这10株酿酒酵母的角鲨烯产量,发现WAT11tfA菌株的角鲨烯产量比WAT11提高了近20倍。3.获得了高产α-amyrin的酿酒酵母工程菌将pEXPR-IaAS1表达质粒转入上述获得的WAT11tfA细胞,构建WAT11tfA/IaAS1菌株;用CRISPR/Cas9技术将IaAS1基因表达盒整合进WAT11tfA基因组的HIS3位点上,构建WAT11tfAX菌株。分别用SC-U/Gal和YPD培养基培养3 d,比较了2株菌株积累α-amyrin的情况。结果证明,与WAT11/IaAS1比较,WAT11tfA/IaAS1和WAT11tfAX菌株的α-amyrin产率均明显提高,WAT11tfA/IaAS1菌株的α-amyrin产量为4.67±0.21 mg/L,约是WAT11的21倍,WAT11tfAX菌株的α-amyrin产量为2.18±0.14mg/L,约是WAT11的10倍,WAT11t

关键词：酿酒酵母合成生物学 CRISPR/Cas9 α-香树脂醇代谢调控

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毛冬青三萜C-28位氧化修饰相关CYP450基因的发掘和功能鉴定

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中国药科大学学报 2019年第4期50卷 459-467页

作者：陈媛媛赖美红贠小芸王魁徐晖广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室

药用植物毛冬青Ilex pubescens *** Arn.含有大量的五环三萜及三萜皂苷,化学结构复杂多样。三萜类化合物骨架的修饰与其生物合成途径下游的一类关键酶——细胞色素P450单加氧酶(CYP450)密切相关。本研究通过分析毛冬青转录组数据,筛选到... 详细信息

药用植物毛冬青Ilex pubescens *** Arn.含有大量的五环三萜及三萜皂苷,化学结构复杂多样。三萜类化合物骨架的修饰与其生物合成途径下游的一类关键酶——细胞色素P450单加氧酶(CYP450)密切相关。本研究通过分析毛冬青转录组数据,筛选到1个可能具有五环三萜C-28位氧化功能的CYP450基因(IpAO2)。克隆IpAO2基因并将其通过质粒转化法导入能高效合成amyrin的酿酒酵母工程菌中,GC-MS分析重组酵母代谢产物,发现IpAO2基因编码的蛋白可以将α-amyrin和β-amyrin分别氧化为熊果酸和齐墩果酸,确定IpAO2是一个五环三萜C-28位氧化酶基因。IpAO2基因的鉴定对全面阐明毛冬青三萜及三萜皂苷的生物合成机制具有重要意义,为后期开展毛冬青活性三萜类化合物的代谢工程研究奠定了基础。

关键词：毛冬青三萜生物合成 C-28氧化酶熊果酸酿酒酵母

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毛冬青三萜C-28位氧化酶基因的克隆与功能研究

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时珍国医国药 2019年第2期30卷 303-307页

作者：覃嘉良贠小芸纪晓宇詹若挺徐晖广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的对毛冬青三萜C-28位氧化酶基因进行挖掘与功能鉴定。方法在前期获得的毛冬青转录组数据中,筛选出1个可能参与毛冬青三萜C-28位氧化的CYP基因(IpAO1),将IpAO1与毛冬青三萜合酶IpAS1共转化酿酒酵母,验证IpAO1的功能。结果 Western Blo... 详细信息

目的对毛冬青三萜C-28位氧化酶基因进行挖掘与功能鉴定。方法在前期获得的毛冬青转录组数据中,筛选出1个可能参与毛冬青三萜C-28位氧化的CYP基因(IpAO1),将IpAO1与毛冬青三萜合酶IpAS1共转化酿酒酵母,验证IpAO1的功能。结果 Western Blot结果表明,重组酵母能够表达与预期大小相符的IpAS1蛋白和IpAO1蛋白。GC-MS分析结果显示,仅表达IpAS1基因的重组酵母产生了α-香树脂醇和β-香树脂醇,而共表达IpAS1和IpAO1基因的重组酵母合成了熊果酸和齐墩果酸。结论来源于毛冬青的IpAO1是编码一个α-香树脂醇/β-香树脂醇的C-28位氧化酶。

关键词：毛冬青三萜生物合成齐墩果酸熊果酸 C-28氧化酶异源表达

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生态瞬时评估在自杀研究中的应用

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心理科学进展 2024年

作者：吴才智贠芸肖志华周忠英童婷任志洪青少年网络心理与行为教育部重点实验室人的发展与心理健康湖北省重点实验室华中师范大学心理学院郑州商学院心理健康教育中心四川警察学院学生心理健康教育与咨询中心武汉体育学院大学生心理健康教育中心华中师范大学第一附属中学初中部

生态瞬时评估作为一种数据采集方法,通过使用智能手机等设备,实时监测被试的自杀意念、情绪状态和行为,捕捉其在不同时间和环境下的变化,在自杀研究领域中发挥着重要作用。生态瞬时评估采用事件相关设计、时间相关设计或混合设计收集数... 详细信息

生态瞬时评估作为一种数据采集方法,通过使用智能手机等设备,实时监测被试的自杀意念、情绪状态和行为,捕捉其在不同时间和环境下的变化,在自杀研究领域中发挥着重要作用。生态瞬时评估采用事件相关设计、时间相关设计或混合设计收集数据,适用于不同来源与年龄的样本,具有较高的生态效度,能够有效减少被试的回忆偏差和主观解释。以往研究证明,在自杀领域开展生态瞬时评估研究不仅是可行的而且是安全的。生态瞬时评估证实了自杀危险的短期变异性,改善了对自杀危险性及其近端因素的理解。未来除了加强本土化研究、关注数据的隐私保护外,还需要结合数字技术和人工智能开展自杀危险性动态监测的生态瞬时评估研究,进一步提高理解、预测和预防自杀的能力。

关键词：生态瞬时评估自杀危险因素可行性安全性

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6种动物类药材中黄曲霉毒素污染的液质联用检测

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中国实验方剂学杂志 2018年第3期24卷 67-71页

作者：罗朝权张敏玲郑润生蔡晓吟徐晖贠小芸覃嘉良广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室

目的：建立一种快速检测动物类药材污染黄曲霉毒素B1（AFB1）和黄曲霉毒素G1（AFG1）的液质联用方法,并用于水蛭等6种动物类中药材污染情况的分析。方法：药材样品加84%乙腈提取,提取液挥干后用甲醇溶解,采用高效液相串联质谱检测方法,... 详细信息

目的：建立一种快速检测动物类药材污染黄曲霉毒素B1（AFB1）和黄曲霉毒素G1（AFG1）的液质联用方法,并用于水蛭等6种动物类中药材污染情况的分析。方法：药材样品加84%乙腈提取,提取液挥干后用甲醇溶解,采用高效液相串联质谱检测方法,C18色谱柱（2.1 mm×100 mm,3μm）,以甲醇-4.0 mmol·L^-1乙酸铵-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,质谱使用ESI离子源,正离子扫描模式,选择反应检测（SRM）模式进行定量。结果：6种药材中AFB1,AFG1的基质效应介于82%~119%;以水蛭作为代表性基质,进行加样回收率试验,按低、中、高3个浓度水平添加时,AFB1与AFG1的提取回收率、绝对回收率介于80%~117%。方法学考察精密度RSD 1.8%~7.5%,重复性RSD 5.1%~14%。将该方法应用于55份动物药材样品检测,结果显示包括水蛭和土鳖虫在内的4份样品受到污染,其中土鳖虫污染率达33.3%,污染水平处于1.26~26.3μg·kg^-1。结论：土鳖虫等动物类药材受黄曲霉毒素污染的情况应当引起足够的重视。针对药材生产的各个环节,采取恰当的措施降低黄曲霉毒素污染的风险是十分必要的。

关键词：黄曲霉毒素B1 黄曲霉毒素G1 动物类药材液质联用分析水蛭

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微波等离子体推力器谐振腔数值模拟研究

微波等离子体推力器谐振腔数值模拟研究

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作者：彭小芸电子科技大学

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工业用地市场化改革冲击与城市产业模式选择:来自工业用地招拍挂政策的证据

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南方经济 2024年第2期 21-39页

作者：龚小芸杨进刘蓉西南财经大学财政税务学院

如何激励地方政府合理配置土地资源以推动二三产业协调发展是我国当前经济发展和产业转型的重要问题。文章以工业用地招拍挂政策出台作为准自然实验,研究工业用地市场化改革产生的财政激励如何影响地方政府在产业发展上的政策选择。基于... 详细信息

如何激励地方政府合理配置土地资源以推动二三产业协调发展是我国当前经济发展和产业转型的重要问题。文章以工业用地招拍挂政策出台作为准自然实验,研究工业用地市场化改革产生的财政激励如何影响地方政府在产业发展上的政策选择。基于2003—2013年277个地级市的面板数据,并以招拍挂政策出台以后协议出让土地的面积占比下降程度作为各地受到政策冲击的强度指标,文章通过构造连续双重差分模型研究发现:①工业用地招拍挂政策实施使得原来高度依靠协议出让工业用地的地区工业发展受到冲击,工业产值增长减缓,其中外资企业受到的冲击尤为显著。②受冲击地区第二产业增速减慢,企业利税总额在财政收入中的比重下降,导致地区财政压力显著上升。③地方政府为了应对财政压力一方面大力发展高污染高耗能产业,另一方面大幅增加土地出让和房地产开发投资,推动以房地产为核心的土地财政行业扩张。以上结果表明工业用地出让市场化改革在提高土地资源配置效率的同时,也对地方政府长期依赖的以廉价工业用地为基础的“以地引资”模式形成冲击。文章研究结论有助于理解财政激励对地方政府产业发展模式选择的影响,对我国在新发展阶段推进产业协调发展具有重要现实意义。

关键词：以地引资财政激励工业发展土地财政

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中国地方非税收入规模与结构演变(1999-2019)--基于人大预算监督法制化的视角

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中央财经大学学报 2024年第6期 10-24页

作者：刘蓉龚小芸杨进西南财经大学财政税务学院

非税收入作为税费改革的重点,是深化供给侧结构性改革中降成本的核心与关键。纵观世界各国税收收入和非税收入的演变,尽管比例不同,但都有一个共同特点,就是经济增长与税收呈现同向关系,与非税收入呈现反向关系。2018年以来我国经济下... 详细信息

非税收入作为税费改革的重点,是深化供给侧结构性改革中降成本的核心与关键。纵观世界各国税收收入和非税收入的演变,尽管比例不同,但都有一个共同特点,就是经济增长与税收呈现同向关系,与非税收入呈现反向关系。2018年以来我国经济下行压力加大,税收收入增长缓慢,地方政府倾向于寻求新的财源,使得非税收入规模呈现异常增长态势。笔者利用省级预算审查监督条例立法的准自然实验,借助1999—2019年省级面板数据研究人大预算监督对地方政府非税收入的影响。研究发现:(1)在已实施省级预算审查监督条例的地区,非税收入预决算规模均有所下降;(2)异质性分析表明,在新《预算法》实施后和财政分权度更高的地区该效应更强;(3)机制分析表明,地方人大主要是通过加强对行政事业性收费的监督,进而压缩非税收入规模。本文结论进一步丰富了税费政策相关的研究,而且对更好权衡减税降费政策与地方财政可持续之间的关系,完善非税收入和人大预算监督体系构建提供了实证证据和经验借鉴。

关键词：减税降费非税收入收入结构效应地方人大预算监督

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不锈钢管混凝土构件力学性能研究现状与展望

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北京工业大学学报 2024年 1386-1398页

作者：杨璐代鹏贠翔北京工业大学城市与工程安全减灾教育部重点实验室清华大学土木工程系布里斯托大学土木系

不锈钢管混凝土构件兼具钢管混凝土构件的特性和不锈钢材料的耐腐性。由于不锈钢的非线性特性,其力学行为与传统钢材显著不同。为了解决不锈钢管混凝土构件在应用中可能遇到的设计挑战,特别是由于忽视不锈钢的应变硬化和显著的非线性特... 详细信息

不锈钢管混凝土构件兼具钢管混凝土构件的特性和不锈钢材料的耐腐性。由于不锈钢的非线性特性,其力学行为与传统钢材显著不同。为了解决不锈钢管混凝土构件在应用中可能遇到的设计挑战,特别是由于忽视不锈钢的应变硬化和显著的非线性特性而导致对钢管截面强度过于保守的估计问题,对国内外不锈钢管混凝土构件的静力性能、界面黏结性能和动力性能的研究进展进行了详细阐述,并指出当前研究主要集中在静力性能,特别是截面轴压承载力的计算方法,而界面黏结性能和动力性能的研究还处于初步阶段。此外,针对目前不锈钢管混凝土构件的研究尚未充分考虑不锈钢材料应变硬化阶段的问题,对连续强度法的应用进行了总结和改进,提出了进一步的研究工作展望,以期更准确地描述和预测不锈钢管混凝土构件的力学性能,从而在结构设计中最大化其应用优势。

关键词：不锈钢管混凝土构件力学性能非线性和应变硬化连续强度法结构设计研究现状与展望

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基于联合参数辨识的粒子群优化扩展粒子滤波的锂电池荷电状态估计

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电工技术学报 2024年第2期39卷 595-606页

作者：贠祥张鑫王超范兴明桂林电子科技大学电气工程及其自动化系桂林541004

提高参数辨识的精度和SOC算法的精度是提高SOC估计的关键,该文提出了基于联合参数辨识的粒子群优化扩展粒子滤波的荷电状态(SOC)估计方法。在参数辨识阶段,结合遗忘因子递推最小二乘法在线辨识的优势,弥补粒子群辨识精度高但前期缺乏数... 详细信息

提高参数辨识的精度和SOC算法的精度是提高SOC估计的关键,该文提出了基于联合参数辨识的粒子群优化扩展粒子滤波的荷电状态(SOC)估计方法。在参数辨识阶段,结合遗忘因子递推最小二乘法在线辨识的优势,弥补粒子群辨识精度高但前期缺乏数据无法实时辨识的劣势,联合进行参数辨识;在SOC估计阶段,利用扩展卡尔曼滤波生成重要性密度函数,去克服粒子退化,同时采用粒子群优化算法优化重采样策略改进采样过程缓解粒子贫化。最后在联邦城市运行(FUDS)和US06高速公路运行(US06)工况下将所提算法与F-PF、F-PSO-PF、FPSO-PSO-PF进行了对比,结果表明,在FUDS工况下,方均根误差分别提高了65.4%、56.3%和43.5%;在US06工况下,方均根误差分别提高了45.8%、35.9%和35.1%,验证了所提算法具有较好的适应性和鲁棒性。

关键词：锂电池粒子群算法扩展粒子滤波算法荷电状态

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