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真正柑橘果树类植物基于AFLP分子标记的分类与进化研究

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植物分类学报 2008年第5期46卷 682-691页

作者：谢让金周志钦邓烈中国农业科学院-西南大学柑橘研究所

用AFLP分子标记技术对芸香科Rutaceae柑橘亚科Aurantioideae真正柑橘果树类(the True Citrus Fruit Trees Group)6属植物的59个生物类型以及九里香Murraya exotica L.、蚝壳刺Severinia buxifolia Tenore和酒饼簕Atalantia buxifolia Oliv.进行了分析。从64对引物组合中筛选出15对分辨率好的引物对全部材料进行了扩增,共获得312条带,其中多态型带305条,多态位点达97.8%。利用PAUP软件构建了全部材料基于AFLP数据的UPGMA距离树。结果表明,AFLP证据支持基于形态特征建立的真正柑橘果树群以及群内各属的划分,只是金柑属Fortunella Swingle作为一个独立的分支嵌于柑橘属CitrusL.内。对于柑橘属,我们的分子证据支持Swingle关于亚属的划分以及Scora等关于***、***和***是真正柑橘亚属***三个基本种的观点。AFLP分子证据显示宜昌橙*** Swingle位于真正柑橘亚属中,与香橙*** ***的亲缘关系最近,而与大翼橙亚属***中马蜂柑*** DC.相隔甚远。另外,莽山野橘*** *** & ***在系统树上居于宽皮柑橘类的基部。最后,对真正柑橘果树群6属植物间以及柑橘属各主要类型(种)的进化关系进行了详细的讨论。

关键词： AFLP 进化谱系关系真正柑橘果树类

柑橘属及其近缘植物基于AFLP分子标记的分类与进化研究

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柑橘属及其近缘植物基于AFLP分子标记的分类与进化研究

作者：谢让金西南大学

学位级别：硕士

柑橘属(Citrus L.)由林奈1753年订立,系芸香科(Rutaceae)柑橘亚科(Aurantioideae)植物。在过去250余年的时间里国内外学者对柑橘属植物的分类和系统发生问题从形态到分子开展了一系列研究。然而,现有的柑橘分类系统在亚属划分和种的数... 详细信息

柑橘属(Citrus L.)由林奈1753年订立,系芸香科(Rutaceae)柑橘亚科(Aurantioideae)植物。在过去250余年的时间里国内外学者对柑橘属植物的分类和系统发生问题从形态到分子开展了一系列研究。然而,现有的柑橘分类系统在亚属划分和种的数目等问题上分歧依然很大。柑橘属植物系统进化的基本框架(即原始野生类型的种类、起源及其系统进化关系)迄今仍不清楚。Swingle(1943)根据雄蕊数目及汁胞构造将柑橘及其近缘的五个属,枳属(Poncirus)、金柑属(Fortunella)、澳枳檬属(Microcitrus)、澳沙檬属(Eremocitrus)、多蕊檬属(Clymenia)一起划分到真正柑橘果树类。由于柑橘芽变、栽培历史悠久以及与近缘属之间的有性杂交等因素,柑橘及其近缘属植物之间的分类和系统进化关系迄今仍无定论。柑橘类果树具有很高的经济价值,准确地弄清柑橘及其近缘属植物之间的系统进化关系,对柑橘属植物的遗传育种、种质资源的深入研究、保护利利用都具有重要的理论和实践价值。 AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism)是一种高效、快速、可靠的DNA分子标记。在本研究中,我们采用AFLP分子标记技术对芸香科(Rutaceae)柑橘亚科(Aurantioideae)柑橘及其近缘属植物的59个生物类型以及九里香(Murraya exotica L.)、蚝壳刺(Severiniabuxifolia Tenore)和酒饼簕(Atalantia buxifolia Oliv.)进行了分析。从64对引物组合中筛选出15对分辨率好的引物对全部材料进行了扩增,共获得312条带,其中多态型带305条,多态位点达97.8%。利用PAUP软件构建了全部材料基于AFLP数据的UPGMA距离树。结果表明,AFLP证据支持基于形态特征建立的真正柑橘果树类以及群内各属的划分,只是金柑属(Fortunlla Swingle)作为一个独立的分支嵌于柑橘属(Citrus L.)内。对于柑橘属,我们的分子证据支持Swingle关于亚属的划分以及Scora等关于***,***和***是真正柑橘亚属(Subgenus Eucitrus)三个基本种的观点。AFLP分子证据显示宜昌橙(***)位于真正柑橘亚属中,与香橙(*** *** Tanaka)的亲缘关系最近,而与大翼橙亚属(Subgenus Papeda)中马蜂柑(*** D.C.)相隔甚远。另外,莽山野橘(*** & ***)在系统树上居于宽皮柑橘类的基部。最后,对柑橘属及其近缘属植物间以及柑橘属各主要类型(种)的进化关系进行了详细的讨论。

关键词：柑橘属 AFLP 谱系关系进化

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柑橘CitPG34的克隆、定位与表达分析

中国农业科学 2019年第19期52卷 3404-3416页

作者：葛廷黄雪谢让金西南大学柑桔研究所/中国农业科学院柑桔研究所

【目的】多聚半乳糖醛酸酶是一类参与细胞壁降解的水解酶,在植物生长发育和器官脱落过程中发挥着重要作用。本研究克隆柑橘CitPG34及其启动子(CitPG34-P)并进行表达分析,为深入研究柑橘PG在幼果脱落过程的生物功能奠定基础。【方法】以... 详细信息

【目的】多聚半乳糖醛酸酶是一类参与细胞壁降解的水解酶,在植物生长发育和器官脱落过程中发挥着重要作用。本研究克隆柑橘CitPG34及其启动子(CitPG34-P)并进行表达分析,为深入研究柑橘PG在幼果脱落过程的生物功能奠定基础。【方法】以‘塔罗科’血橙(Citrus sinensis L. Osbeck)为材料,克隆CitPG34及其启动子,利用ProtParam、Cello、CLUSTALX、MEGA5.2、PlantCARE等软件对其蛋白特性及启动子顺式作用元件进行分析预测;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析CitPG34在不同组织以及柑橘幼果脱落过程中的表达水平。采用同源重组的方法构建pCAMBIA1302-CitPG34-GFP融合蛋白表达载体和CitPG34启动子表达载体(CitPG34-P::gus),分别用于亚细胞定位和启动子活性分析。【结果】从‘塔罗科’血橙幼果离层中克隆获得CitPG34,其ORF为1 194 bp,编码397个氨基酸,预测蛋白分子量为41.47 kD,理论等电点为5.19,其不稳定系数为30.23,表明CitPG34属于稳定蛋白;通过在线软件TMHMM分析发现:CitPG34为跨膜蛋白,具有一个跨膜结构,位于第7—29位氨基酸之间。在CitPG34二级结构中,α-螺旋结构约占15.37%,扩展链约占29.72%,无规则卷曲约占54.91%,与其三级结构预测基本一致。NJ树分析显示CitPG34与西洋梨PcPG3(BAF42034)亲缘关系最近,表明CitPG34可能与果实脱落和软化相关。qRT-PCR分析表明,CitPG34在花中表达量最高,在根、叶、离层A、离层C中表达量较低,在幼果中几乎不表达。1-氨基环丙烷羧酸(ACC)处理果梗后能显著提高离层A中CitPG34的表达水平,相反IAA抑制其转录。此外,在柑橘幼果正常脱落过程中,CitPG34表达明显升高。亚细胞定位发现,CitPG34主要位于细胞壁。克隆获取CitPG34起始密码子(ATG)前2 075 bp启动子序列(CitPG34-P),PlantCare预测发现,在CitPG34-P序列上存在多种顺式调控元件,如核心启动元件TATA-box、增强子元件CAAT-box以及脱落酸响应元件ABRE等。将CitPG34-P::gus转入烟草,通过GUS组织化学染色发现,该启动子受乙烯诱导,主要在叶脉和毛状体中表达。【结论】CitPG34的ORF长度为1 194 bp,可编码397个氨基酸,其蛋白主要位于细胞壁;该基因具有明显的组织特异性,在花中表达最高;CitPG34表达量与柑橘幼果脱落显著相关。上述结果表明,CitPG34在柑橘幼果脱落和花发育过程中可能发挥着重要的生物功能。

关键词：柑橘多聚半乳糖醛酸酶基因表达亚细胞定位启动子幼果脱落

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多聚半乳糖醛酸基因在果树中的研究进展

植物生理学报 2019年第8期55卷 1075-1088页

作者：葛廷黄雪谢让金西南大学柑桔研究所中国农业科学院柑桔研究所

多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)由多基因家族成员编码,对细胞壁果胶的降解起着重要作用,主要参与植物生长发育与逆境响应过程。基于全基因组序列,在果树如苹果(Malus pumila)、桃(Prunus persica)中,鉴定出了大量PG基因新成员... 详细信息

多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)由多基因家族成员编码,对细胞壁果胶的降解起着重要作用,主要参与植物生长发育与逆境响应过程。基于全基因组序列,在果树如苹果(Malus pumila)、桃(Prunus persica)中,鉴定出了大量PG基因新成员,并发现其中某些成员分别参与了果实成熟软化、器官脱落、果树抗病等相关生物过程。尽管近年对果树PG的研究取得了巨大进展,但鲜见相关综述。据此,本文从PG基因结构、转录调控及其在果树中的生物功能等方面进行了综述,旨在为进一步阐明PG在果树中的生物学功能提供有用信息。

关键词：果树多聚半乳糖醛酸酶细胞壁基因功能

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柑桔产品的国际贸易与WTO配额

中国南方果树 2002年第6期31卷 28-29页

作者：邓烈何绍兰谢让金中国农业科学院柑桔研究所重庆400712

柑桔产品是世界第三大贸易农产品,柑桔及其加工产品的世界年贸易额约68亿美元,仅次于玉米和小麦.

关键词：柑桔产品国际贸易 WT0 配额柑桔加工产品中国柑桔出口关税

1-甲基环丙烯对采后果实生理生化的影响(综述)

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中国南方果树 2006年第4期35卷 72-74页

作者：谢让金邓烈何绍兰易时来中国农业科学院柑桔研究所重庆400712

20世纪90年代中期，人们发现1-甲基环丙烯（1-Methylcyclopropene，1-MCP）为一种能够抑制植物内源和外源乙烯作用的新型乙烯受体抑制剂，它能不可逆地作用于乙烯受体蛋白，阻断其与乙烯的正常结合，抑制其所诱导的与果实后熟相关的一... 详细信息

20世纪90年代中期，人们发现1-甲基环丙烯（1-Methylcyclopropene，1-MCP）为一种能够抑制植物内源和外源乙烯作用的新型乙烯受体抑制剂，它能不可逆地作用于乙烯受体蛋白，阻断其与乙烯的正常结合，抑制其所诱导的与果实后熟相关的一系列生理生化反应，从而延缓果实衰老。由于其具有无毒、低量、高效等优点，1-MCP广泛用于鲜切花和果蔬的商业化保鲜生产过程中。为此，人们开始以1-MCP为工具研究与水果衰老有关的一系列生理生化过程。

关键词： 1-甲基环丙烯生理生化反应果实衰老乙烯受体抑制剂受体蛋白生产过程

R2R3MYB转录因子在果树花青素合成中的调控作用

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中国南方果树 2014年第6期43卷 18-23页

作者：李永杰谢让金邓烈西南大学柑桔研究所/中国农业科学院柑桔研究所重庆400712

花青素是一类重要的水溶性色素,其影响果实色泽表现,对人体具有非常重要的营养保健价值。花青素生物合成由一系列结构基因编码的酶催化完成,而其关键结构基因的表达主要受R2R3MYB转录因子调控。近年大量研究表明,R2R3MYB的调控作用受外... 详细信息

花青素是一类重要的水溶性色素,其影响果实色泽表现,对人体具有非常重要的营养保健价值。花青素生物合成由一系列结构基因编码的酶催化完成,而其关键结构基因的表达主要受R2R3MYB转录因子调控。近年大量研究表明,R2R3MYB的调控作用受外界因子如温度、激素和光等的影响。为了向果树花青素形成分子机理的研究者提供相关信息,在介绍果实花青素的种类、功能和合成的基础上,就R2R3MYB的结构特征及其在花青素合成调控中的作用进行了概述。

关键词：花青素果树 R2R3MYB 转录调控

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基于冠层光谱的锦橙叶片磷素营养监测研究

核农学报 2013年第2期27卷 225-230页

作者：易时来邓烈何绍兰郑永强吕强谢让金西南大学中国农业科学院柑桔研究所重庆400712

以盆栽蓬安100号锦橙施肥调控试验为基础,利用田间冠层光谱信息探索建立植株磷素营养监测技术与方法。通过采集蓬安100号锦橙95个单株样本的冠层光谱信息和室内检测分析叶片磷含量,随机选取76个作为建模样本,19个为检验样本,运用多种光... 详细信息

以盆栽蓬安100号锦橙施肥调控试验为基础,利用田间冠层光谱信息探索建立植株磷素营养监测技术与方法。通过采集蓬安100号锦橙95个单株样本的冠层光谱信息和室内检测分析叶片磷含量,随机选取76个作为建模样本,19个为检验样本,运用多种光谱预处理方法和偏最小二乘法(Partial leastsquare method,PLS)及内部交叉验证方法建立校正模型与模型检验。结果表明,经多种光谱预处理方法的建模结果比较,冠层原始反射光谱经二阶求导和SNV处理后建立的蓬安100号锦橙叶片磷含量冠层光谱监测模型预测能力和稳健性最佳,其主成分数4个,能表达全波段63%的信息;校正模型相关系数为0.90,偏差Bias=2.45E-10,且RMSEC和RMSEP均最小。模型检验预测的决定系数R2=0.85。因此,利用二阶导数及标准归一化(Standard normal variate transformation,SNV)预处理的田间冠层光谱信息快速无损监测蓬安100号锦橙叶片磷含量具有一定的可行性。

关键词：锦橙叶片磷素营养冠层光谱监测

几个柑桔品种果实的生长发育动态观察(简报)

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中国南方果树 2004年第6期33卷 15-15,17页

作者：谢让金何绍兰谢金峰文泽富中国农业科学院柑桔研究所重庆400712 重庆市农委重庆市果树研究所

促进果实充分生长发育，是柑桔栽培者提高产量及其商品价值的基本追求，也是柑桔栽培学的重要研究内容。为了解我国新近推广的几个柑桔品种的果实生长发育规律，我们对其果实的生长发育动态进行了观察研究。

关键词：柑桔品种果实生长发育动态观察