检索结果-南通市图书馆

广西地区2004-2010年猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5及ORF7基因的遗传变异分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2011年第11期41卷 1117-1123页

作者：许瑞胜施开创赵日浪胡杰莫胜兰刘棋广西大学动物科学技术学院广西南宁530005 广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001

为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子遗传进化情况,对2004-2010年间广西的PRRSV阳性病料进行了ORF5、ORF7基因扩增和序列分析。结果显示,所获得的毒株均属于美洲型毒株,其ORF5基因间的氨基酸序列同源性为89.6%～... 详细信息

为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子遗传进化情况,对2004-2010年间广西的PRRSV阳性病料进行了ORF5、ORF7基因扩增和序列分析。结果显示,所获得的毒株均属于美洲型毒株,其ORF5基因间的氨基酸序列同源性为89.6%～99.5%,与VR-2332、Ch-1a、JXA1株的氨基酸序列同源性分别为84.6%～91%、89.6%～95.5%和93%～99%,而与LV的同源性为54.7%～56.7%;ORF7基因间的氨基酸序列同源性为87.1%～99.2%,与VR-2332、Ch-1a、JXA1株的氨基酸序列同源性分别为91.1%～96%、91.9%～96%和89.5%～99.2%,而与LV的同源性为55.6%～58.1%。基于ORF5和ORF7基因核苷酸序列绘制的遗传进化树,可将所有PRRSV分离株分为4个亚群,广西地区的毒株分布在以CH-1a为代表的Ⅱ亚群、以HB-1为代表的Ⅲ亚群和以JXA1为代表的Ⅳ亚群,以Ⅳ亚群为主。表明当前广西PRRSV流行毒株以美洲型Ⅳ亚群为优势基因亚群,并且各毒株间的ORF5和ORF7基因序列存在一定差异,但没有明显的地域特征。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异 ORF5基因 ORF7基因

猪凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFR1和TNF-α SYBR GreenⅠ real-time PCR检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2009年第10期39卷 910-916页

作者：施开创莫胜兰许瑞胜陆文俊刘棋广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

分别针对猪凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFR1、TNF-α基因以及看家基因β-actin的序列设计了1对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测Fas、FasL、TNFR1、TNF-α及β-actin的SYBR GreenⅠreal-ti me PC... 详细信息

分别针对猪凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFR1、TNF-α基因以及看家基因β-actin的序列设计了1对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测Fas、FasL、TNFR1、TNF-α及β-actin的SYBR GreenⅠreal-ti me PCR方法。该方法线性关系好(r2≥0.995),敏感性高,初始模板的检出下限除TNFR1为1×102copies/μL外,其他均为1×101copies/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3%。应用所建立的方法对猪生殖与呼吸综合征病毒感染仔猪外周血单个核细胞中Fas、FasL、TNFR1和TNF-αmRNA的表达水平进行了检测。结果表明,建立的real-ti me PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好。

关键词：猪凋亡细胞因子荧光定量PCR SYBR GreenⅠ

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

深入推进广西生猪屠宰企业标准化创建的思考

今日畜牧兽医 2023年第6期39卷 70-72页

作者：杨丽雪周媛覃婉婷韦慧琦梁凤许瑞胜熊毅郭建刚广西壮族自治区屠宰技术中心 530001

生猪屠宰企业标准化创建有利于推进生猪屠宰行业提质增效、转型升级,提高肉品质量安全保障能力。随着全国推进生猪屠宰标准化示范厂创建的步伐,广西加快生猪屠宰企业标准化创建力在必行。在标准化创建的评审验收过程中,广西生猪屠宰企... 详细信息

生猪屠宰企业标准化创建有利于推进生猪屠宰行业提质增效、转型升级,提高肉品质量安全保障能力。随着全国推进生猪屠宰标准化示范厂创建的步伐,广西加快生猪屠宰企业标准化创建力在必行。在标准化创建的评审验收过程中,广西生猪屠宰企业标准化创建的积极性低、评审通过率低,主要存在着生猪屠宰企业申报材料不完善、质量管理制度不健全、设施设备陈旧落后不达标、生产经营不规范等问题,为了切实加快生猪屠宰企业标准化创建,提升标准化水平,广西组织专家组深入全区生猪屠宰企业开展了调研、指导、宣传动员,并采取化整为零方法,优先从生猪屠宰企业材料整理、安全生产管理、照明设施设备、消毒开展情况等几点内容入手开展存在问题及整改对策思考。

关键词：生猪屠宰企业标准化创建

O型口蹄疫病毒VP1基因及其多表位基因的原核表达与纯化鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南方农业学报 2016年第3期47卷 472-477页

作者：何奇松陈磊颜健华许瑞胜易春华韦达有冯淑萍黄胜斌梁晟熊毅广西动物疫病预防控制中心南宁530001 崇左市动物疫病预防控制中心广西崇左532200 桂林市动物疫病预防控制中心广西桂林541002

【目的】通过原核表达并纯化获得O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因及其多表位基因的重组蛋白,为建立O型FMDV抗体ELISA检测试剂盒及制备动物高免血清提供技术支持。【方法】以O型FMDV VP1全基因重组质粒p MD18-T-T-VP1及串联的VP1多表位基因... 详细信息

【目的】通过原核表达并纯化获得O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因及其多表位基因的重组蛋白,为建立O型FMDV抗体ELISA检测试剂盒及制备动物高免血清提供技术支持。【方法】以O型FMDV VP1全基因重组质粒p MD18-T-T-VP1及串联的VP1多表位基因重组质粒p MD18-T-O-VP1为模板,通过特异性引物扩增并回收目的基因,构建重组质粒p ET-32a-VP1和p GEX-6p-1-VP1,然后转入大肠杆菌BL211(DE3)中诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行分析鉴定。【结果】O型FMDV的VP1基因及其多表位基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到正确表达,表达的两种融合蛋白主要以包涵体形式存在,纯度较高,且均能与猪抗O型FMDV阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性。【结论】表达获得的融合蛋白具有良好的反应原性,可作为包被抗原应用于O型FMDV抗体检测试剂盒研发。

关键词： O型FMDV VP1基因多表位基因原核表达纯化鉴定

A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的原核表达、纯化及鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南方农业学报 2016年第2期47卷 301-305页

作者：颜健华何奇松蒋家霞冯淑萍黄胜斌韦达有易春华许瑞胜梁晟熊毅广西动物疫病预防控制中心南宁530001 桂林市动物疫病预防控制中心广西桂林541002 崇左市动物疫病预防控制中心广西崇左532200

【目的】通过原核表达及纯化获得A型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1,为建立A型FMDV的ELISA诊断方法及开发安全、高效、广谱的新型基因工程疫苗提供技术支持。【方法】以含A型FMDV VP1基因的重组质粒p MD18-T-A-VP1为模板,通过特异性引物扩... 详细信息

【目的】通过原核表达及纯化获得A型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1,为建立A型FMDV的ELISA诊断方法及开发安全、高效、广谱的新型基因工程疫苗提供技术支持。【方法】以含A型FMDV VP1基因的重组质粒p MD18-T-A-VP1为模板,通过特异性引物扩增A型FMDV的VP1基因,构建表达质粒p ET-32a-VP1和p GEX-6p-1-VP1,然后转入感受态细胞E.coli BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白。【结果】诱导表达获得的VP1融合蛋白主要以包涵体形式存在,分别经His·Bind和GST·Bind柱层析纯化,SDS-PAGE分析结果表明融合蛋白纯度较高;Western blotting检测分析发现,VP1融合蛋白能与豚鼠抗A型FMDV阳性血清发生特异性结合,但不与豚鼠抗O型和Asia1型FMDV阳性血清反应。【结论】经原核表达及纯化获得的A型FMDV VP1融合蛋白具有良好的特异性和抗原性,可用于易感动物的免疫及血清抗体筛查。

关键词： A型FMDV VP1蛋白原核表达纯化鉴定

A型口蹄疫病毒VP1蛋白竞争ELISA检测方法的初步建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

西南农业学报 2015年第5期28卷 2268-2272页

作者：颜健华何奇松蒋家霞冯淑萍黄胜斌胡巧云易春华许瑞胜梁晟熊毅广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001 桂林市动物疫病预防控制中心广西桂林541002 广西水产畜牧兽医局广西南宁530021

用纯化的融合蛋白p GEX-6p-1-VP1作为包被抗原,4E12单抗为检测抗体与待检血清竞争固相抗原,建立了单抗竞争ELISA方法来检测口蹄疫A型抗体,并进行了反应条件的优化,确定阴阳临界值。结果表明,抗原最适包被浓度为0.625μg/m L,待检血清稀... 详细信息

用纯化的融合蛋白p GEX-6p-1-VP1作为包被抗原,4E12单抗为检测抗体与待检血清竞争固相抗原,建立了单抗竞争ELISA方法来检测口蹄疫A型抗体,并进行了反应条件的优化,确定阴阳临界值。结果表明,抗原最适包被浓度为0.625μg/m L,待检血清稀释度为1∶2,单抗最大稀释度为1∶400,酶标抗体工作浓度为1∶5000,封闭液、待检血清和单抗作用时间分别为60、60、45 min;阴阳性判断抑制率(PI)≥30%为阳性。与液相阻断ELISA检测试剂盒比对,符合率为84.8%。试验表明,建立的单抗竞争ELISA检测方法具有特异性强、稳定性好等优点,可用于口蹄疫A型血清抗体的检测,这为口蹄疫A型免疫抗体水平检测、疫情监控及流行病学调查提供了技术平台。

关键词： A型口蹄疫病毒 VP1蛋白竞争ELISA

猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR诊断方法的建立与应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

现代农业科技 2018年第4期 229-230页

作者：许瑞胜冯淑萍李剑静熊毅马琳广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001 岑溪市动物疫病预防控制中心

为建立一种快速简便的检测猪传染性胃肠炎的RT-PCR方法,根据GenBank中已发表的猪传染性胃肠炎病毒N蛋白基因的核苷酸序列设计1对引物,并以合成的cDNA为模板,初步建立了猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR检测方法,进而对对照病毒及采集的病料... 详细信息

为建立一种快速简便的检测猪传染性胃肠炎的RT-PCR方法,根据GenBank中已发表的猪传染性胃肠炎病毒N蛋白基因的核苷酸序列设计1对引物,并以合成的cDNA为模板,初步建立了猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR检测方法,进而对对照病毒及采集的病料组织进行了敏感性、特异性和重复性检测。结果表明,该研究建立的RT-PCR方法敏感性高,最低核酸检测值为0.5ng/μL,扩增产物特异性好,重复性稳定,可应用于猪传染性胃肠炎病毒的实验室诊断和流行病学调查。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 RT-PCR 诊断流行病学调查

猪IL-2、IL-12p40和IFN-γ SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2010年第7期37卷 74-79页

作者：施开创莫胜兰许瑞胜李向涛陈宏备郑敏刘棋广西动物疫病预防控制中心南宁530001 广西大学动物科学技术学院南宁530005

针对猪Th1型细胞因子IL-2、IL-12p40、IFN-γ以及管家基因β-actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IL-2、IL-12p40、IFN-γ及β-actin的SYBR Green Ⅰ real-ti mePCR方... 详细信息

针对猪Th1型细胞因子IL-2、IL-12p40、IFN-γ以及管家基因β-actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IL-2、IL-12p40、IFN-γ及β-actin的SYBR Green Ⅰ real-ti mePCR方法。该方法线性关系好,标准曲线的相关系数均达到0.997以上;敏感性高,初始模板的检出下限均达到100拷贝/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3.5%。应用所建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪外周血单个核细胞中IL-2、IL-12p40和IFN-γ mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,所建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好。

关键词：猪 Th1型细胞因子荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ

猪脑心肌炎病毒GXLC株VP1基因的克隆与序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

动物医学进展 2010年第8期31卷 45-50页

作者：陈进喜施开创屈素洁郑敏李向涛陈宏备许瑞胜钦州市动物疫病预防控制中心广西钦州535000 广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

应用RT-PCR方法扩增猪脑心肌炎病毒GXLC株的VP1基因,扩增产物克隆入pMD18-T载体后进行测序,对获得的VP1基因序列进行分析。序列分析表明,GXLC株VP1基因长度为831 bp,编码277 aa,含有2个潜在的N-糖基化基序和9个抗原表位。同源性分析表明... 详细信息

应用RT-PCR方法扩增猪脑心肌炎病毒GXLC株的VP1基因,扩增产物克隆入pMD18-T载体后进行测序,对获得的VP1基因序列进行分析。序列分析表明,GXLC株VP1基因长度为831 bp,编码277 aa,含有2个潜在的N-糖基化基序和9个抗原表位。同源性分析表明,GXLC株与国内外其他26个EMCV分离株VP1基因核苷酸序列的同源性在78.6%～99.6%之间、氨基酸序列的同源性在95.1%～99.3%之间。遗传进化分析表明,基于VP1基因序列绘制的系统进化树可以将所有EMCV分离株分成两个群,即Ⅰ群和Ⅱ群,Ⅰ群可再细分为Ⅰa亚群和Ⅰb亚群,其中猪源、鼠源EMCV在Ⅰ群和Ⅱ群中均有分布,人源EMCV则分布在Ⅱ群;GXLC株与其他中国分离株均属于Ⅰa亚群。

关键词：猪脑心肌炎病毒 VP1基因分子特征