检索结果-南通市图书馆

维普期刊数据库博看期刊

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于云原生应用的移动目标防御技术研究

基于云原生应用的移动目标防御技术研究

作者：许含意战略支援部队信息工程大学

学位级别：硕士

在云原生环境中,传统的单体式应用按照功能逻辑拆分为多个微服务,这些微服务又通过容器技术构建轻量级的运行环境,使得云原生应用在弹性和灵活性方面凸显优势。因此,微服务化与容器化的特性成为云上应用发展的主导趋势,能够显著提升云... 详细信息

在云原生环境中,传统的单体式应用按照功能逻辑拆分为多个微服务,这些微服务又通过容器技术构建轻量级的运行环境,使得云原生应用在弹性和灵活性方面凸显优势。因此,微服务化与容器化的特性成为云上应用发展的主导趋势,能够显著提升云原生应用开发、部署和迭代效率。然而,微服务化和容器化给云原生应用带来便利的同时,也存在很多安全威胁与挑战:一方面,云原生应用的微服务化使得攻击面爆炸式增长,缺乏有效管控策略;另一方面,传统的安全边界变得模糊甚至消失,使得基于边界和外挂的传统安全防御机制难以应对新的挑战。针对上述问题,目前移动目标防御(Moving Target Defense,MTD)技术打破了传统安全防御的静态模式,为云原生应用的安全管控提供了新的思路。MTD的核心思想是通过不断增强目标系统的动态性和多样性,持续不断地变换攻击面,致使攻击者难以预测目标系统的真实状态,从而大大提高了目标系统的安全性。因此,将MTD的理念和技术融入到云原生应用的安全管控中,有望为云原生应用的安全防护带来革命性的变革。然而,如何将MTD技术和云原生技术相结合,为微服务提供更全面、高效的安全保障仍是一项亟待深入探索和研究的课题。因此,本文聚焦于基于云原生应用的移动目标防御技术研究。针对微服务调用链和微服务运行环境的安全性,分别提出了相应的优化措施;然后,在上述优化措施的基础上,设计并实现了基于MTD的云原生应用动态变换系统。具体研究内容如下:(1)针对微服务复杂调用链导致云原生安全缺乏高效的“要地”防御策略的问题,提出了基于自适应模拟退火遗传算法的移动目标防御部署策略。首先,利用微服务攻击图来量化攻击场景,使其能够直观地观察云中微服务的脆弱点及微服务之间的依赖关系。其次,利用度中心性衡量节点的被依赖程度,筛选并量化关键节点的安全增益与资源开销。最后,利用自适应模拟退火遗传算法,求解MTD的最优安全配置信息,即多副本部署的副本数量和微服务动态轮换的轮换周期。实验表明,所提出来的策略相比于主流的方法,防御回报率平均提升74.84%。(2)针对微服务同质化运行环境下漏洞后门扩散被利用风险高的问题,提出了基于Flip It博弈的微服务动态异构调度防御方法。首先,利用多样化的容器镜像构建异构资源池,将容器从多维度的角度出发量化其异构程度,并将不同的容器部署看作不同的防御策略;其次,将攻防双方交互的过程建模为基于Flip It博弈的单阶段博弈模型,并引入折扣因子和转移概率将单阶段的博弈模型转化为基于Flip It博弈的多阶段博弈模型;最后,通过仿真实验验证所提出的方法的有效性,实验表明与全服务轮换相比防御收益值大约提升了3.19倍。(3)设计并实现了一套基于移动目标防御的微服务动态变换系统。该系统集成监控模块、策略决策模块、策略优化模块和动态变换策略实施模块为一体,为微服务的安全运行提供保障。首先,根据微服务调用链和微服务运行环境中存在的安全性问题,设计了基于MTD的微服务动态变换系统,并对系统的主要模块进行详细的介绍;然后,列出来了本系统关键技术栈,并针对部分技术做简单介绍;最后在相应的环境配置和集群配置下对系统的功能进行了测试,验证了系统的可用性。

关键词：云原生应用微服务安全容器安全动态变换移动目标防御

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

不同绿肥对南疆香梨园土壤及果品影响研究

不同绿肥对南疆香梨园土壤及果品影响研究

作者：许孟达塔里木大学

学位级别：硕士

新疆因其独特的气候条件与地理位置,被誉为中国的瓜果之乡。长期以来,南疆果园管理以清耕为主,施用大量的化肥,加剧了南疆果园土壤盐碱化、荒漠化程度,降低了果实品质及产量,滞后了南疆果园的可持续发展。为此,南疆果园逐步采用绿肥种... 详细信息

新疆因其独特的气候条件与地理位置,被誉为中国的瓜果之乡。长期以来,南疆果园管理以清耕为主,施用大量的化肥,加剧了南疆果园土壤盐碱化、荒漠化程度,降低了果实品质及产量,滞后了南疆果园的可持续发展。为此,南疆果园逐步采用绿肥种植还园技术改善上述状况。目前南疆果园绿肥种类多样,不同绿肥还园后自身腐解特性、养分释放规律、改土培肥效果以及对果实品质的影响存在差异性。因此,本试验选取南疆香梨园典型绿肥油菜、燕麦、苜蓿和果园自生草,利用尼龙网袋法模拟4类果园绿肥还园探究果园绿肥腐解特性及养分释放规律,采用果园绿肥机械翻压还园的方式研究不同绿肥还园后香梨园土壤养分的变化规律,分析不同绿肥还园后对库尔勒香梨在采收期、货架期以及贮藏期的作用效果,为南疆果园绿肥的合理利用及库尔勒香梨绿色生产提供理论参考。主要研究结果如下:(1)采用尼龙网袋法模拟不同绿肥翻压还园试验表明:4类绿肥的腐解量与腐解率随翻压还园时间增加而增大,腐解速率随还园时间增加而减小。各类绿肥腐解过程可分为快速腐解期(0-35 d)、中速腐解期(35-80 d)和缓慢腐解期(80-120 d)三个阶段,至120 d试验截止时,4类绿肥作为有机肥翻压后腐解率达到67.79%-86.47%,各绿肥腐解率大小为:绿肥油菜>绿肥苜蓿>绿肥燕麦>绿肥自生草。不同绿肥在腐解过程中其养分释放规律均呈现前期释放较快,后期释放缓慢并逐步趋于平缓的特点。4类绿肥腐解至120 d时,有机碳、全氮、全磷、全钾累积释放率分别为:67.01%-82.28%、62.54%-75.35%、78.99%-85.13%、82.31%～94.14%,不同绿肥各养分释放率大小均表现为全钾>全磷>有机碳>全氮,其中绿肥油菜的有机碳、全磷累积释放率最高为82.28%、85.13%,绿肥苜蓿的全氮、全钾累积释放率最高分别为:75.35%、94.14%。(2)在尼龙网袋法模拟不同绿肥翻压还园试验的基础上利用果园绿肥机械开展不同绿肥翻压还园试验,试验结果表明:绿肥还园110 d内,4类绿肥均能降低土壤p H,提高土壤有机质、碱解氮、有效磷、速效钾含量,绿肥苜蓿降低了土壤p H值,降低率在1.82%-3.39%之间,提高了土壤碱解氮、速效钾含量,提升率在4.95%-13.54%、39.19%-81.58%之间;绿肥油菜显著提高了土壤有机质、土壤有效磷含量,提升率在0.56%-3.59%、2.89%-12.98%之间。根据相关性分析结果可知:绿肥油菜翻压还园后,土壤有机质与碱解氮、有效磷之间呈极显著正相关关系(P绿肥种类>贮藏温度,对去皮硬度影响程度大小顺序为:贮藏温度>贮藏时间>绿肥种类。

关键词：南疆香梨园绿肥腐解特性土壤养分果实品质

数字化转型对城市商业银行经营绩效的影响研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

数字化转型对城市商业银行经营绩效的影响研究

作者：许周元齐鲁工业大学

学位级别：硕士

随着科学技术的进步,现代新兴科学技术和金融行业的有机结合发展已经成为一种普遍的现象,中国也积极参与其中,国内许多金融机构的发展开始向数字化转型阶段过渡,通过科学技术创新的产品和服务受到了大众的一致好评。银行业首先从大型商... 详细信息

随着科学技术的进步,现代新兴科学技术和金融行业的有机结合发展已经成为一种普遍的现象,中国也积极参与其中,国内许多金融机构的发展开始向数字化转型阶段过渡,通过科学技术创新的产品和服务受到了大众的一致好评。银行业首先从大型商业银行开始陆续进行了数字化转型探索,城市商业银行也紧随其后,但数字化转型带来了便利的同时也带来了一些风险隐患,为了探寻数字化转型对商业银行的经营绩效的影响以及面临潜在的风险,以便更好地应用数字技术,因此本文基于商业银行数字化转型的大背景展开研究,探讨城市商业银行在数字化转型发展的过程中出现的困难、问题以及其对经营绩效产生的影响,并从相应的研究结果中提出可行的意见和建议。在本研究的开篇深入探讨了数字化转型的重要性和背景,并建立了一个详细的研究架构。此外,本文还梳理了关于数字化转型在国际及国内的发展、商业银行经营绩效以及城市商业银行的成长等方面的文献,总结了各方面的研究成果。紧接着,文章详细讲解了若干理论的基础,涉及银行业的革新、金融领域的创新、客户关系的管理以及战略管理等领域。在理论阐述之后,本研究通过具体的实证分析,探究了城市商业银行在数字化转型进程中对其业绩表现的影响。具体方法包括利用面板模型回归分析以及中介效应分析等手段。首先,研究构建了一个固定效应的面板模型,选定了2012至2021年期间,包括青岛银行、齐鲁银行在内的17家国内上市城市商业银行作为研究样本。通过分析这些银行年度报告中提及数字化转型关键字的频次作为数字化转型力度的衡量指标。同时,采用净资产收益率(ROE)和破产风险(Z值)作为业绩和风险的度量指标,对银行的盈利能力和风险管理进行分析。分析结果表明,数字化转型的深入与银行的盈利能力及风险管理能力成正比关系。进一步通过中介变量分析,发现数字化转型有效降低了不良贷款率,从而增强了银行的风险控制和盈利水平。为了验证这些发现的稳健性,本研究还对模型进行了调整并重新验证,结果与初次分析一致,证明了研究结果的可靠性。基于实证分析结果,本文以北京银行为例进行了案例研究,通过分析其财务指标,具体展示了数字化转型如何影响银行的经营活动,并提出了针对性的建议。本文通过进行实证分析和案例分析得出了城市商业银行通过数字化转型可以提高其盈利能力经营绩效和风险管控能力的结论。基于此,本文提出以下建议,对于城市商业银行来说,在数字化转型的过程中应当加强三会一层数字化战略水平的认知,吸纳金融、科技复合型人才,持续加强与金融科技企业、高等院校等机构的合作,走和大型商业银行不同的差异化、特色化的发展道路,将本地优势发挥出来,用心服务好当地经济发展。对于监管部门来说,其应当跟上时代和科技进步的步伐,及时填补相关领域监管空白,利用数字技术赋能监管,提升监管能力和效率,优化监管流程,构建多维度的监管大数据平台,同时也要加强对消费者的教育引导,充分利用好消费者权益保护日,最后要强化五大监管:机构监管、行为监管、功能监管、穿透式监管和行为监管,做好数字金融这篇大文章。

关键词：城市商业银行数字化转型经营绩效风险管理金融监管

基于中医传承辅助平台总结儿童过敏性鼻炎用药规律

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基于中医传承辅助平台总结儿童过敏性鼻炎用药规律

作者：许根长春中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过使用数据挖掘技术,总结并分析数据库中文献与导师冯晓纯教授门诊病历中对于治疗儿童过敏性鼻炎的用药规律。方法:本研究通过检索2002年1月至2022年12月中国知网CNKI、万方数据知识服务平台、维普资讯网等中文数据库,收集中医... 详细信息

目的:通过使用数据挖掘技术,总结并分析数据库中文献与导师冯晓纯教授门诊病历中对于治疗儿童过敏性鼻炎的用药规律。方法:本研究通过检索2002年1月至2022年12月中国知网CNKI、万方数据知识服务平台、维普资讯网等中文数据库,收集中医药治疗儿童过敏性鼻炎的相关文献与冯晓纯教授在此期间治疗儿童过敏性鼻炎的门诊中药处方,建立起包含数据完整、疗效确切的处方的数据库。在筛选出符合标准的中药处方后,将运用中医传承计算平台(V3.5)软件进行统计分析,以揭示中医药治疗儿童过敏性鼻炎的医家辨证方向与拟方思路。通过频次分析、四气统计、五味统计、归经统计、功效统计等方法,对处方药物性味归经、用药频率、药对组成等用药规律进行系统总结和分析。结果:通过数据库检索,本研究共筛选纳入96篇文献,总计得到124首中药处方,涉及221种药味。其中使用频次排名前十的药物分别为辛夷、苍耳子、白芷、防风、黄芪、白术、川芎、桂枝、黄芩、细辛。从药性角度看,主要以温、寒、平为主;从药味角度看,以辛、甘、苦为主;从归经角度看,以肺经为主,其次为肝、脾、胃、心、膀胱等经;从功效方面看,主要以解表、清热、补虚、化痰止咳平喘、收涩为主。收集的门诊病历共得到117首处方,涉及187种药味。其中使用频次前十的药物为辛夷、苍耳子、白芷、防风、川芎、薄荷、蝉蜕、黄芪、荆芥、白术。从药性、药味、归经、功效等方面的统计结果与纳入文献处方有一定的相似性。结论:通过中药属性分析和关联规则分析等数据挖掘技术,得出以下结论:冯晓纯教授及现代中医药治疗儿童过敏性鼻炎的定位均主要归属于肺经,同时兼顾脾胃心膀胱等经络。在用药方面,常采用温、寒、平等药性并用,同时辛、甘、苦等味道相互调和。治疗手段主要包括解表、清热、补虚、化痰止咳平喘等方法。

关键词：儿童过敏性鼻炎数据挖掘用药规律小儿过敏性鼻炎

生态女性主义理论视野下非物质文化遗产保护 ——以满族剪纸为例

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

生态女性主义理论视野下非物质文化遗产保护 ——以满族剪纸为例

作者：许加吉林大学

学位级别：硕士

创业板IPO审计风险的识别与防范 ——以诺康达为例

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

创业板IPO审计风险的识别与防范 ——以诺康达为例

作者：许刘玲广州大学

学位级别：硕士

注册制的实施提升了资源配置效率,推动了我国资本市场的发展,并优化了资本市场的体系结构。相对于核准制的严苛审查,在注册制下,监管机构的审核方式转变为形式审查而非价值判断,如此一来监管机构更加注重信息披露的真实性,同时也将审计... 详细信息

注册制的实施提升了资源配置效率,推动了我国资本市场的发展,并优化了资本市场的体系结构。相对于核准制的严苛审查,在注册制下,监管机构的审核方式转变为形式审查而非价值判断,如此一来监管机构更加注重信息披露的真实性,同时也将审计风险很大程度上转移给注册会计师。从2020年8月创业板实行注册制以来,截至2023年底已经有超过600多家企业通过IPO成功上市,可见注册制下创业板IPO审核效率大幅提升,创业板IPO上市也十分火爆。但是随着门槛放低,各类企业冲刺创业板IPO,随之IPO财务造假、信息披露违规等新闻越来越多,监管也随之越来越严。会计师事务所和注册会计师作为创业板IPO审计的审查主体,因为审计失败、未能勤勉尽责等原因被连带处罚的案例也频频发生。而且分析IPO被否企业发现,创业板IPO企业被否率高于科创板和北交所,审计风险更大,因此注册会计师对创业板IPO审计风险的识别和防范成为亟待解决的难题。基于此,本文首先对注册制改革的意义和存在的问题、IPO审计风险、创业板IPO审计风险进行了相关文献梳理。主要归纳了IPO审计风险的特征、影响IPO审计风险的因素和IPO审计风险的防范,以及创业板IPO审计风险的成因和防范措施。其次,基于现代风险导向审计理论,结合案例研究法和对比分析法,本文选取在创业板IPO被否的诺康达作为研究对象,探讨其审计风险。借助招股说明书及上市委员会问询和答复等相关资料,识别出诺康达IPO过程中的审计风险。主要包括重大错报风险和检查风险,财务报表层次重大错报风险主要是经营业绩、可持续经营、关联交易等风险,认定层次主要是收入确认风险、存货和应收账款确认的风险,以及注册会计师由于自身原因可能存在的检查风险。之后再针对这些风险给出合理有效的防范措施,例如,通过经营业绩合理性审定、设计关联交易专项审计程序等措施来降低重大错报风险;通过加快银行函证区块链平台建设、聘请外部专家等措施来降低检查风险。最后总结案例得出研究结论,并从拟创业板IPO企业、注册会计师和监管机构三方面得出启示。本论文的创新点主要体现在:第一,总结创业板的问询情况和被否原因,根据创业板的特征识别其审计风险点所在,分财务报表层次、认定层次重大错报风险和检查风险三个方面进行了深入的探讨;第二,本文引入了M-Score模型对案例企业进行了财务操纵可能性评估,为注册会计师识别审计风险提供参考;第三,本文针对各个方面提出防范措施后,也从拟创业板IPO企业、注册会计师和监管机构三个方面得到启示,给出一些实质性建议,以期能提高创业板IPO审计质量,助力创业板IPO积极向好发展。

关键词：创业板 IPO审计风险风险识别与防范

环保企业绿色并购绩效评价研究 ——以H环保公司为例

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

环保企业绿色并购绩效评价研究 ——以H环保公司为例

作者：许柠重庆理工大学

学位级别：硕士

新时代我国经济迈入新的发展阶段,产业结构升级稳步推进。单纯依赖企业内部的内涵式增长,已难以匹配日益旺盛的市场需求增速,众多企业开始积极探索外延式发展的道路,寻求外部资源的协助与支持,以期加快企业的发展步伐,提升整体竞争力;... 详细信息

新时代我国经济迈入新的发展阶段,产业结构升级稳步推进。单纯依赖企业内部的内涵式增长,已难以匹配日益旺盛的市场需求增速,众多企业开始积极探索外延式发展的道路,寻求外部资源的协助与支持,以期加快企业的发展步伐,提升整体竞争力;同时政府出台了很多环境保护政策和环保产业扶持政策,环境治理效果明显。因此,环保行业紧抓机遇,行业竞争也越来越激烈,一些龙头企业通过绿色并购提升企业规模与实力,淘汰不具竞争力的小型企业,行业加速整合。由于H环保公司绿色并购历程丰富且多元化,具有一定的代表性和典型性,本文深入剖析了H环保公司绿色并购过程及绩效表现,旨在为其他企业提供有益的借鉴意义,助力更多企业更高效地达成预期绿色并购目标。本文以H环保公司绿色并购为研究对象,深入挖掘公司绿色并购动因,并基于事件研究法和因子分析法从市场、财务、创新能力三个维度对公司绿色并购绩效表现进行评价研究。研究表明,H环保公司绿色并购的市场反应表现较好,投资者对公司绿色并购持较积极态度,长期市场绩效表现相对稳定;财务绩效上,公司通过绿色并购带来的协同效应,对盈利能力产生较积极的影响,经营效率总体保持稳定;创新能力上,无论是绿色专利水平、研发人员投入、环保研发投资还是固废处理能力等都有不同程度的提升。但绿色并购后公司绩效有些表现欠佳,主要包括:速动比率过低,且远低于行业平均水平,导致资金流动性弱,短期偿债压力较大,增加了公司的财务风险;尽管绿色并购后公司应收账款周转率下降趋势放缓,但仍存在风险,应收账款周转率较低,公司应收账款回收速度较慢,资金回笼时间较长,拉低公司经营效率,影响日常运营和扩大再生产的能力;绿色并购后公司的环保业务收入增长率先上升后大幅下降,波动范围较大,绿色发展潜力较不稳定。本文在此基础上,深入剖析H环保公司绿色并购绩效表现欠佳的成因并提出相应的绩效提升建议。

关键词：绿色并购并购绩效环保企业

土壤盐分异质性分布对黄瓜根系抗氧化酶和代谢组影响

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

土壤盐分异质性分布对黄瓜根系抗氧化酶和代谢组影响

作者：许望望浙江农林大学

学位级别：硕士

黄瓜是我国生产面积和产量最大的蔬菜之一,其根系分布较浅,易受到土壤盐渍化的影响,导致生长发育不良。以往研究主要集中在对黄瓜在均匀盐胁迫下的响应,而在自然条件下,土壤盐分分布通常是不均一的,同一植株根系通常处于盐分浓度不同的... 详细信息

黄瓜是我国生产面积和产量最大的蔬菜之一,其根系分布较浅,易受到土壤盐渍化的影响,导致生长发育不良。以往研究主要集中在对黄瓜在均匀盐胁迫下的响应,而在自然条件下,土壤盐分分布通常是不均一的,同一植株根系通常处于盐分浓度不同的环境中。探究黄瓜在异质盐胁迫下的生理代谢响应,有助于了解黄瓜应对异质盐胁迫的生理机制,对提高黄瓜在盐渍化土壤中的存活率以及黄瓜耐盐品种的选育均具有重要意义。本研究以黄瓜品种‘津优1号’为试材,通过分根装置将黄瓜幼苗的根系分为两部分,使其处于均匀盐胁迫或异质盐胁迫下,通过分析黄瓜幼苗根系抗氧化酶活性,Na+含量,K+含量以及代谢组分差异,探讨（1）异质盐胁迫与均匀盐胁迫对黄瓜幼苗根系抗氧化系统的影响;（2）异质盐胁迫与均匀盐胁迫对黄瓜幼苗根系离子含量的影响;（3）黄瓜幼苗在异质盐胁迫与均匀盐胁迫下的代谢组分的变化。主要结果如下:（1）与对照组相比,200/200 mM组和100/300-300 mM组的超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶、抗坏血酸过氧化物酶活性显著提高。100/300-100 mM组、100/300-300 mM组超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶、抗坏血酸过氧化物酶活性显著低于盐分均匀处理,推测这可能与黄瓜根系在异质盐胁迫中受到的伤害较均匀盐胁迫小有关。（2）异质盐胁迫下,黄瓜根系通过调控K+浓度减轻盐胁迫伤害。100/300-100mM组的Na+浓度和Na+/K+显著低于200/200 mM组,K+浓度显著高于200/200 mM组。100/300-300 mM组Na+和/K+浓度与200/200 mM组无显著差异,Na+/K+显著高于200/200 mM组。（3）100/300-100 mM与200/200 mM对比筛选出52种差异代谢物,其中包括35种上调差异代谢物,17种下调差异代谢物,主要差异代谢物为苯丙酮酸、酮戊二酸、柠檬酸、L-蛋氨酸、L-亮氨酸,主要集中在植物次生代谢产物的生物合成,中心碳代谢,组氨酸和嘌呤来源生物碱的生物合成等通路。100/300-300 mM与200/200mM对比筛选出80种差异代谢物,其中包括42种上调差异代谢物,38种下调差异代谢物,主要差异代谢物为L-蛋氨酸、谷氨酰胺、L-酪氨酸、顺式玉米素、α-亚麻酸,主要集中在植物次生代谢产物的生物合成,中心碳代谢,植物激素的生物合成等通路。（4）异质盐胁迫下,L-亮氨酸、L-酪氨酸、L-蛋氨酸、延胡索酸、α-生育酚、吲哚乙酸、肌苷、赤霉素A3、半乳糖醇这些代谢物的提升增强了黄瓜根系的耐盐性,表明异质盐胁迫下,黄瓜根系能够调整一些代谢物的变化减轻盐胁迫对自身的伤害。

关键词：黄瓜异质盐胁迫抗氧化酶离子含量代谢组

LncRNA-DANCR通过调控HSD17B7在早发性卵巢功能不全中的作用及机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

LncRNA-DANCR通过调控HSD17B7在早发性卵巢功能不全中的作用及机...

作者：许大兵中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

早发性卵巢功能不全（premature ovarian insufficiency,POI）指女性在40岁以前出现的卵巢功能减退,主要表现为月经紊乱、FSH水平升高、雌激素波动性下降,是目前导致女性不孕不育的主要原因之一,严重困扰女性生殖健康。发病率为1%～5%,... 详细信息

早发性卵巢功能不全（premature ovarian insufficiency,POI）指女性在40岁以前出现的卵巢功能减退,主要表现为月经紊乱、FSH水平升高、雌激素波动性下降,是目前导致女性不孕不育的主要原因之一,严重困扰女性生殖健康。发病率为1%～5%,且有增加趋势,报道的发病率可能低于实际发病率。目前已知POI最主要的发病机制是卵泡过早破坏和耗竭、卵泡闭锁加剧。其中卵泡周围颗粒细胞对卵泡闭锁的发生至关重要,但是具体调控机制尚不明确。近年研究发现,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）在表观遗传调节中起重要作用。主要通过DNA甲基化、组蛋白修饰、细胞周期调控和细胞分化调控等多种作用从而在众多生命活动中发挥重要作用,已成为目前的研究热点。因其包含丰富的调节和功能单元,其表达的异常与人类多种肿瘤疾病的发生紧密相关。DANCR作为长链非编码RNA的一种,目前研究主要集中在肿瘤相关领域,主要参与调控细胞去分化,促进肿瘤起始细胞扩增以及肿瘤的发生发展等过程,而我们在前期的系列研究中发现Dancr全身敲除的小鼠出现动情周期紊乱、血清性激素水平明显改变、闭锁卵泡增多等表型,表现为POI相似的临床症状,通过合笼实验发现小鼠的生育力明显减退。卵巢组织原位杂交显示Dancr在小鼠卵巢组织颗粒细胞中高表达,临床样本发现DANCR在POI病人的颗粒细胞中表达显著降低,体外实验发现DANCR敲低可能加速了卵巢颗粒细胞衰老,但DANCR是否在POI发生发展中起到特异性关键作用,其具体机制如何,目前尚不明确。本研究中我们首先利用AMH-Cre小鼠和Dancrlox P/lox P小鼠构建Dancr卵巢条件性敲除(Dancr-/-)小鼠。为评估卵巢条件性敲除Dancr后对于小鼠卵巢功能的影响,我们首先检测了Dancr-/-条件性敲除小鼠血清中AMH、FSH、E2的激素水平,发现Dancr-/-小鼠血清AMH及E2水平明显降低,FSH水平升高。进一步通过对Dancr-/-小鼠的卵巢组织进行HE染色,各级卵泡分类计数发现,Dancr-/-小鼠卵巢中窦卵泡数量明显减少,闭锁卵泡增多,表现为POI相关表型。对于Dancr-/-小鼠出现POI类似临床表现,结合Dancr在颗粒细胞中高表达,我们推测Dancr通过影响颗粒细胞功能进而导致POI的发生发展。为进一步探究其介导POI发生的相关机制,我们提取10周龄Dancr-/-小鼠和野生型(Dancr+/+)小鼠的原代颗粒细胞,进行标记定量蛋白质组学实验,通过蛋白质组学分析,我们发现两组小鼠颗粒细胞蛋白表达存在显著差异,最终共筛选出126个表达有显著差异的蛋白。GO功能富集分析表明差异表达蛋白主要参与卵巢类固醇激素的合成、吞噬细胞、抗原提呈等过程,KEGG分析主要富集于类固醇激素的合成与代谢、胆固醇的代谢、雌激素信号通路、ECM细胞相互作用以及RNA降解等通路中。这些蛋白质的功能和作用通路大多与类固醇激素的代谢、颗粒细胞的功能紧密相关。接下来我们进一步验证了蛋白组学的相关结果,我们使用人卵巢颗粒细胞系（KGN、COV434）分别过表达和敲低DANCR后,通过RT-q PCR、Western Blot分别在m RNA和蛋白表达水平进行验证。结果发现HSD17B7（羟基类固醇17-β脱氢酶7）可能是lnc RNA-DANCR的重要作用靶点。通过原位杂交实验观察到HSD17B7在小鼠卵巢的颗粒细胞中表达较高。为进一步探究HSD17B7表达的变化是如何影响颗粒细胞的相关功能,在KGN、COV434细胞系中分别过表达和敲低HSD17B7后观察颗粒细胞的增殖和凋亡相关表型。结果表明过表达HSD17B7后颗粒细胞增殖明显受到抑制,敲低HSD17B7后则会明显促进颗粒细胞增殖。但过表达和低表达HSD17B7后,颗粒细胞的凋亡没有显著改变。综上所述,lnc RNA-DANCR与颗粒细胞的增殖和卵巢功能密切相关,在小鼠卵巢中敲除Dancr后,会导致小鼠出现POI相关表型。在颗粒细胞中,DANCR表达的下调会导致HSD17B7表达的升高,HSD17B表达升高可以通过抑制卵巢颗粒细胞的增殖进而诱导卵泡的发育障碍,最终导致POI的发生发展。

关键词：早发性卵巢功能不全 DANCR HSD17B7 颗粒细胞细胞增殖