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大肠杆菌O157∶H7噬菌体EC-p9的内溶酶和穿孔素的特性预测及克隆表达

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食品与发酵工业 2021年第9期47卷 107-113页

作者：解天慧石慧西南大学食品科学学院重庆400715

大肠杆菌O157∶H7是一种常见的能严重威胁公共卫生安全的食源性致病菌,噬菌体及其内溶酶、穿孔素是新型的抑菌剂。该文利用十聚体寡核苷酸随机引物初步鉴定了噬菌体EC-p9;应用PCR技术获得该噬菌体的内溶酶Lys 9和穿孔素Hol 9的基因;利... 详细信息

大肠杆菌O157∶H7是一种常见的能严重威胁公共卫生安全的食源性致病菌,噬菌体及其内溶酶、穿孔素是新型的抑菌剂。该文利用十聚体寡核苷酸随机引物初步鉴定了噬菌体EC-p9;应用PCR技术获得该噬菌体的内溶酶Lys 9和穿孔素Hol 9的基因;利用生物学信息预测了这2种蛋白的特性;通过大肠杆菌表达体系表达了这2种蛋白。结果表明,噬菌体EC-p9是dsDNA肌尾科噬菌体,具有“穿孔素-内溶酶”裂解体系。内溶酶Lys 9是一种不含跨膜结构的肽聚糖水解酶。穿孔素Hol 9是Ⅲ型穿孔素,仅有1个跨膜结构。内溶酶Lys 9和穿孔素Hol 9都能通过大肠杆菌表达体系成功表达,但穿孔素Hol 9的表达会对大肠杆菌BL21(DE3)产生毒害作用,导致表达量较少。最终获得了质量浓度为2.49 g/L的内溶酶Lys 9和0.95 g/L的穿孔素Hol 9。该研究为开展内溶酶Lys 9和穿孔素Hol 9的抑菌能力以及噬菌体EC-p9的裂解体系的研究奠定了基础。

关键词：大肠杆菌O157∶H7 噬菌体EC-p9 内溶酶Lys 9 穿孔素Hol 9

噬菌体EC-p9和SM-p2内溶酶及穿孔素的特性及联合抑菌作用

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食品与发酵工业 2021年第24期47卷 7-12页

作者：史东灵解天慧石慧西南大学食品科学学院重庆400715

噬菌体的内溶酶(endolysin)和穿孔素(holin)是新型的抑菌剂,具有很大的潜力和发展空间。该文以大肠杆菌O157∶H7噬菌体EC-p9和沙门氏菌噬菌体SM-p2的内溶酶和穿孔素(Lys 9、Lys 2、Hol 9、Hol 2)为对象,通过平板菌落计数法研究了Lys 9、... 详细信息

噬菌体的内溶酶(endolysin)和穿孔素(holin)是新型的抑菌剂,具有很大的潜力和发展空间。该文以大肠杆菌O157∶H7噬菌体EC-p9和沙门氏菌噬菌体SM-p2的内溶酶和穿孔素(Lys 9、Lys 2、Hol 9、Hol 2)为对象,通过平板菌落计数法研究了Lys 9、Lys 2、Hol 9、Hol 2的裂解活性;评估Lys 9、Lys 2、Hol 9、Hol 2对温度和pH的稳定性;研究了细菌是否会对这4种重组蛋白产生抗性;还研究了内溶酶、穿孔素及其混合物对细菌的联合抑菌作用。结果表明,Lys 9、Lys 2、Hol 9和Hol 2的最高裂解活性分别为61.348%、81.120%、74.251%和83.356%,具有很强的杀菌能力;Lys 9、Lys 2、Hol 9和Hol 2对温度和pH有较高的稳定性;12代内细菌不会对Lys 9、Lys 2、Hol 9和Hol 2产生抗性。此外,内溶酶和穿孔素在抑制病原菌上表现出协同作用。该实验结果为噬菌体内溶酶和穿孔素联合抑菌作用提供了理论依据。

关键词：噬菌体内溶酶穿孔素特性联合抑菌

大肠杆菌O157：H7和沙门氏菌噬菌体及其内溶酶和穿孔素的研究

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大肠杆菌O157：H7和沙门氏菌噬菌体及其内溶酶和穿孔素的研究

作者：解天慧西南大学

学位级别：硕士

大肠杆菌O157:H7（Escherichia coli O157:H7）和沙门氏菌（Salmonella spp.）是严重危害公共卫生安全的食源性致病菌。这两种细菌能在食品加工和贮藏的相关胁迫下诱导产生交叉适应现象,因此细菌在后续杀菌或抑菌处理中得以存活。且抗... 详细信息

大肠杆菌O157:H7（Escherichia coli O157:H7）和沙门氏菌（Salmonella spp.）是严重危害公共卫生安全的食源性致病菌。这两种细菌能在食品加工和贮藏的相关胁迫下诱导产生交叉适应现象,因此细菌在后续杀菌或抑菌处理中得以存活。且抗生素大量和长期的使用使越来越多的细菌出现耐药性。随着全球对不使用化学防腐剂生产食品需求的增加,噬菌体作为一种天然的生物防治手段,为食品工业的消毒杀菌提供了一种新选择。但是,在噬菌体制剂的研发过程中发现了一些不足或缺陷。噬菌体的增殖依赖于其宿主的生长速度,在不生长的宿主细胞中不发生增殖。因此,确定噬菌体使用的最佳时间和剂量是噬菌体制剂在实际应用中的关键点。且致病菌容易对噬菌体产生抗性,出现体噬菌体不敏感突变株（phage insensitive mutants,PIMs）。PIMs的出现和噬菌体的高特异性也限制了其作为抑菌剂的应用,可通过制备噬菌体鸡尾酒（即噬菌体混合物）来解决这个问题。此外,噬菌体的内溶酶和穿孔素作为噬菌体裂解系统的功能蛋白,具有作用迅速、裂解谱宽于亲本噬菌体、无细胞毒性、低耐药性发生概率以及能与现有抗生素协同作用等优点,能解决活体噬菌体在实际应用中的不足。因此,内溶酶和穿孔素有潜力成为新型抗菌剂。本论文以大肠杆菌O157:H7和沙门氏菌为宿主菌,筛选噬菌体并评估这些噬菌体的抑菌潜力;选择抑菌潜力最好的大肠杆菌O157:H7噬菌体EC-p9和沙门氏菌噬菌体SM-p2,对其内溶酶和穿孔素的抑菌潜力进行评估。论文的主要研究结果如下:（1）从重庆市嘉陵江中分离得到以大肠杆菌O157:H7和沙门氏菌为宿主菌的噬菌体共13株。其中9株能裂解大肠杆菌O157:H7,分别命名为EC-p1、EC-p2、EC-p3、EC-p4、EC-p5、EC-p6、EC-p7、EC-p8和EC-p9;4株能裂解沙门氏菌,分别命名为SM-p1、SM-p2、SM-p3和SM-p4。这些噬菌体都有不同的宿主范围、潜伏期和爆发量。噬菌体EC-p9（10 min,333.33 PFU/cell）和SM-p2（10 min,119.56 PFU/cell）具有最短的潜伏期、最大爆发量和最高的特异性。此外,EC-p4、EC-p6、EC-p9、SM-p2和SM-p4对温度和p H的稳定性高,且这五个噬菌体能连续抑制其宿主浮游菌至少10 h。因此,选择这五个噬菌体处理其宿主菌的生物被膜。结果表明,这些噬菌体都能有效的抑制宿主菌生物被膜的形成并分解宿主菌形成的生物被膜,其中EC-p9和SM-p2控制其宿主菌生物被膜的能力最强。（2）通过透射电镜和随机引物扩增鉴定了噬菌体EC-p9和SM-p2,通过PCR扩增获得这两种噬菌体的内溶酶和穿孔素的编码基因,利用分子生物学技术预测了这四种蛋白理化性质,利用大肠杆菌表达系统表达了四种重组蛋白。结果显示,两种噬菌体属于ds DNA肌尾噬菌体科（Myoviridae）。噬菌体EC-p9和SM-p2的内溶酶和穿孔素被命名为Lys 9、Hol 9、Lys 2和Hol 2。Lys 9和Lys 2是球形结构的内溶酶,属于N-乙酰胞壁酸酶。具有一个N端酶活结构域,属于Muraidase家族;还具有一个结合结构域,属于PG＿binding＿1家族。Hol 9和Hol 2是具有1个跨膜结构的典型Ⅲ型穿孔素,属于Bacteriophage T holin家族。Lys 9、Lys 2、Hol 9和Hol 2都是水溶性蛋白。在最佳表达条件下表达重组蛋白并利用镍柱纯化,得到浓度分别为5.331 mg/m L、5.419 mg/m L、3.145 mg/m L和2.191 mg/m L的Lys9、Lys 2、Hol 9和Hol 2。此外,Hol 9和Hol 2的表达对表达感受态细胞BL21（DE3）具有毒害作用。（3）研究了内溶酶和穿孔素的功能。Lys 9,Hol 9,Lys 2和Hol 2具有广谱的杀菌活性,对多种革兰氏阳性和革兰氏阴性菌都具有较好的抑菌效果,裂解谱远远宽于亲本噬菌体的裂解谱。Lys 9,Hol 9,Lys 2和Hol 2的裂解活性分别在30、20、40和30 min后保持稳定,最高的裂解活性分别为61.348%、81.120%、74.251%和83.356%。这四种蛋白在4,25和37℃处理15 min后保持较高的裂解活性,且在50℃处理15 min后仍具有一定的裂解活性;在p H 4-10时保持较高的稳定性,且在中性条件下表现出最高的裂解活性;EDTA能显著增加Lys 9和Lys 2的裂解活性（P＜0.05）。这四种蛋白连续处理细菌多代,不会诱导细菌对其产生抗性。且内溶酶和穿孔素能协同抑制病原菌。以上结果表明Lys 9,Hol 9,Lys 2和Hol 2具有广阔的应用前景。

关键词：大肠杆菌O157:H7 沙门氏菌噬菌体内溶酶穿孔素

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ESG表现、分析师关注与异常审计费用

ESG表现、分析师关注与异常审计费用

作者：路天慧山东财经大学

学位级别：硕士

ESG表现是公司在环境保护、社会责任和公司治理三方面的综合表现。作为一种投资理念和非财务评价标准,ESG表现受到社会各界的广泛关注。同时,随着经济社会持续发展,公司业务复杂程度日益提升,信息透明度降低,给各信息使用者带来风险。... 详细信息

ESG表现是公司在环境保护、社会责任和公司治理三方面的综合表现。作为一种投资理念和非财务评价标准,ESG表现受到社会各界的广泛关注。同时,随着经济社会持续发展,公司业务复杂程度日益提升,信息透明度降低,给各信息使用者带来风险。环境、社会、治理等非财务信息会影响审计师对公司的风险评估。ESG表现的披露一方面可以降低公司经营风险、信息风险,提高信息透明度,但另一方面可能存在“漂绿行为”,公司通过象征性ESG行为获取更多融资机会或降低负面影响,此时,公司公布的ESG表现缺乏可信性,会引发较大的潜在风险。在ESG表现愈受关注的今日,研究其反映出的潜在风险愈发重要。为了降低审计风险,审计师除关注公司财务指标与风险外,还应考虑公司ESG表现对公司的影响,并对其风险应对策略作出相应的调整。审计费用可以反映审计师对公司风险的感知与评估,向外界传递公司的风险状况。与总体审计费用相比,异常审计费用可以更好地体现审计师对潜在风险的认识,有助于更清晰准确地考察ESG表现对审计定价决策的影响。分析师作为公司和外界信息使用者之间的信息桥梁,能够很大程度上缓解资本市场上固有的信息不对称,对公司日常经营活动实施外部监督,同时加强公司披露ESG表现的关注,影响审计师合理确定审计收费,影响异常审计费用。基于上述背景,本文以信息不对称理论、现代风险导向审计理论、声誉理论和深口袋理论为研究基础,以我国2009-2022年沪深股市全部A股上市公司作为研究对象,探索ESG表现对异常审计费用的影响,以及分析师关注对ESG表现与异常审计费用之间关系的影响。通过研究发现,公司ESG表现越好,越会抑制异常审计费用;分析师关注越高,越会削弱ESG表现对异常审计费用的负向影响。进一步分析发现,ESG表现通过提高信息透明度、降低公司经营风险来抑制异常审计费用。异质性分析发现,在外部治理机制更差、产权性质为非国有公司时,ESG表现对异常审计费用的影响更加显著。根据研究结论,从上市公司、会计师事务所、监管机构及投资者角度提出建议对策。上市公司应积极践行ESG理念,提升ESG表现,降低自身风险水平;事务所及审计师应提高对公司ESG表现的重视,提高专业胜任能力,同时将分析师对公司的报告情况纳入考虑范围;监管机构应加强对信息披露的管理,加强对异常审计费用水平的监督;投资者应加强对公司ESG表现的运用,同时可以充分考虑分析师关注情况。本文的创新点在于:第一,我国对ESG表现的研究目前处于起步阶段,大多数研究关注的是公司价值、融资成本等公司自身因素导致的ESG表现经济后果,针对ESG表现对审计方面影响的研究较少,并且鲜有学者从整体视角来关注ESG表现对异常审计费用的影响,而异常审计费用可以更好地体现审计师对潜在风险的认识,故本文探究ESG表现对异常审计费用的影响,拓展ESG表现的经济后果以及异常审计费用影响因素的研究视角,丰富相关理论研究。第二,以分析师关注为调节变量,分析ESG表现与异常审计费用关系的影响因素,进一步揭示ESG表现与异常审计费用之间的内在关联,为后续ESG相关研究提供新的研究思路。第三,分别探究在产权性质不同、外部治理机制不同的公司中ESG表现对异常审计费用的影响差异,丰富ESG表现对异常审计费用影响研究。

关键词： ESG表现分析师关注异常审计费用

基于S-JI的高精度快速干涉粒子成像条纹图频率提取方法

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光电子·激光 2024年

作者：李帅男吕且妮宋天慧刘浩天津大学精密仪器与光电子工程学院光电信息技术教育部重点实验室

高精度的提取条纹频率信息是干涉粒子成像技术的关键，本文提出一种基于简化的联合插值的快速条纹图频率细化算法。该算法利用傅立叶谱的实部和虚部得到亚像素精度的条纹频率，由于不需要计算频移量和再次频率细化（频移），降低了算法... 详细信息

高精度的提取条纹频率信息是干涉粒子成像技术的关键，本文提出一种基于简化的联合插值的快速条纹图频率细化算法。该算法利用傅立叶谱的实部和虚部得到亚像素精度的条纹频率，由于不需要计算频移量和再次频率细化（频移），降低了算法复杂度，缩短了计算时间。数值模拟表明，相比于联合插值算法，时间节省了2/3，且具有更优的频率估计精度和稳定性。对25 μm和70 μm的标准粒子进行了测量，粒径测量相对误差低于0.3%。研究结果表明该算法可用于高速喷射粒子场的高精度测量。

关键词：干涉粒子成像颗粒测量傅里叶变换 S-JI算法频率提取

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飞机尾喷流对舰面温度场影响仿真分析

空气动力学学报 2024年

作者：程健慧王霄沈天荣许保成孟轩沈阳飞机设计研究所

本文针对舰载飞机舰面起飞过程中尾喷流冲击偏流板形成的回流温度场和偏流板板后的温升情况开展了仿真计算和参数影响规律研究。首先，设计了一个双发大推力的舰载机模型，并通过跟台架试验结果对比，验证了采用k-ε湍流模型的计算流体... 详细信息

本文针对舰载飞机舰面起飞过程中尾喷流冲击偏流板形成的回流温度场和偏流板板后的温升情况开展了仿真计算和参数影响规律研究。首先，设计了一个双发大推力的舰载机模型，并通过跟台架试验结果对比，验证了采用k-ε湍流模型的计算流体力学（Computational Fluid Dynamics, CFD）方法对喷流速度场和回流速度场模拟的准确性。然后，通过控制变量的方法研究了喷管轴线角度、喷管间距、喷管扩张比对进气道出口温度畸变强度和偏流板后温度场的影响规律，发现：适当增加喷管轴线上翘角度或者是增加喷管间距可以有效抑制进气道吸入高温回流、降低板后舰面温度场极值，当双发喷管间距增加到3倍喷管喉道直径时进气道出口温升几乎为0。最后，从偏流板的改进设计出发，在不增加舰面额外设备的前提下，研究了偏流板表面横向开槽对偏流板引射能力的影响，结果表明偏流板表面横向开槽可以增强尾喷流的周向引射能力，有效降低回流温度场的强度。

关键词：舰载飞机偏流板尾喷流温度畸变强度流动控制

基于宏基因组技术分析自然发酵羊肉香肠中微生物多样性及挥发性风味功能基因

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食品科学 2024年第2期45卷 139-148页

作者：牛茵吴双慧何济坤蔡自建尤天棋陈娟西南民族大学食品科学与技术学院四川成都610041

利用宏基因组技术测定自然发酵过程中羊肉香肠的微生物群落演替,并运用直系同源蛋白分组比对、京都基因与基因组百科全书和碳水化合物活性酶数据库对挥发性风味物质代谢途径、参与代谢的微生物和酶进行注释与分析。结果发现,羊肉香肠样... 详细信息

利用宏基因组技术测定自然发酵过程中羊肉香肠的微生物群落演替,并运用直系同源蛋白分组比对、京都基因与基因组百科全书和碳水化合物活性酶数据库对挥发性风味物质代谢途径、参与代谢的微生物和酶进行注释与分析。结果发现,羊肉香肠样品中流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、酒类酒球菌等是发酵过程的优势菌种,样品发酵至14d腐生葡萄球菌与马胃葡萄球菌相对丰度达到最大值(16.52%与10.53%)。在发酵0、5、14d和26d样品中,发酵5d样品注释到的基因数最多,发酵过程中碳水化合物代谢和氨基酸代谢是注释最多的代谢途径,糖苷水解酶与糖基转移酶是数量最多的碳水化合物酶。有167个基因参与氨基酸代谢所需酶的编码,碳水化合物代谢途径所需酶由217个基因编码,脂肪酸代谢途径中共有92个基因参与了相关酶的编码,参与3条代谢途径的酶注释到的微生物主要是葡萄球菌属、明串珠菌属、假单胞菌属、嗜冷杆菌属、弧菌属等,发酵14d样品中3条代谢途径的大部分酶丰度达到最大值。研究结果对于解析羊肉香肠中微生物的动态变化以及挥发性风味物质的形成机理具有重要的参考价值。

关键词：羊肉香肠宏基因组学微生物多样性挥发性风味物质代谢途径功能基因

IL-17通过P38/ MK2- Cav1.2信号通路参与大鼠高血压心力衰竭机制研究

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中国免疫学杂志 2024年

作者：丁永刚李依慧靳天楠王英子吴婷婷兰州大学第二医院兰州市第一人民医院兰州市第二人民医院

目的：探讨IL-17在大鼠高血压心力衰竭中的作用及其机制。方法：SHR大鼠采用腹主动脉套扎方式建立高血压心力衰竭模型，采用外源性注射将IL-17+IgG和IL-17蛋白注射至高血压心力衰竭大鼠腹腔内，4周后，监测心脏结构与功能，并收集外周... 详细信息

目的：探讨IL-17在大鼠高血压心力衰竭中的作用及其机制。方法：SHR大鼠采用腹主动脉套扎方式建立高血压心力衰竭模型，采用外源性注射将IL-17+IgG和IL-17蛋白注射至高血压心力衰竭大鼠腹腔内，4周后，监测心脏结构与功能，并收集外周血及心肌组织，采用HE染色、免疫组化、Western Blot、QRT-PCR、ELISA方法研究IL-17在高血压心力衰竭中的作用及机制。结果：外源性腹腔注射IL-17后，提高了IL-17、NT-proBNP水平、P38和MK2蛋白表达，降低了VEGF水平和Cav1.2蛋白表达。外源性腹腔注射IL-17+IgG，阻断了IL-17，提高了VEGF水平和Cav1.2蛋白表达，降低NT-proBNP水平、P38和MK2蛋白表达。结论：IL-17可激活P38/ MK2-CAV1.2信号通路参与大鼠高血压心力衰竭及心功能损伤；抑制IL-17可有效改善高血压心力衰竭造成的心功能损伤。

关键词：高血压心力衰竭 IL-17 P38/MK2

2种光周期下喹诺酮类抗生素对美国薄荷萌发生长的影响

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草业科学 2024年

作者：张解和杨怡姜佳慧吴彤彤苏湘湘陶海升安徽师范大学生态与环境学院皖江流域退化生态系统的恢复与重建省部共建协同创新中心皖南医学院医学影像学院

为探究不同光照条件和喹诺酮类(QNs)抗生素胁迫下美国薄荷(Monarda didyma L.)种子萌发生长的响应及植物的耐受性情况，采用恒温保湿培养法，研究典型QNs抗生素环丙沙星(CIP)和诺氟沙星(NOR)在光照12 h/d和黑暗24 h/d条件下对美国薄荷... 详细信息

为探究不同光照条件和喹诺酮类(QNs)抗生素胁迫下美国薄荷(Monarda didyma L.)种子萌发生长的响应及植物的耐受性情况，采用恒温保湿培养法，研究典型QNs抗生素环丙沙星(CIP)和诺氟沙星(NOR)在光照12 h/d和黑暗24 h/d条件下对美国薄荷种子的萌发及幼苗形态指标的影响，并利用隶属函数法对美国薄荷的耐受性进行评价。结果表明，低浓度CIP对发芽率有一定促进作用，高浓度NOR有抑制作用。活力指数、胚根长、胚芽长和鲜重与抗生素浓度显著负相关(P < 0.05)，胚根长对抗生素的毒性最敏感。CIP和NOR分别对萌发和幼苗形态指标的抑制作用更强，光照12 h/d NOR胁迫下美国薄荷的耐受性最强。美国薄荷种子的发芽势、活力指数、胚根长、胚芽长和鲜重与耐受性显著负相关(P<0.05)，可作为QNs抗生素耐受性的关键指标。本研究可为抗生素的植物生态毒性及植物对抗生素的抗逆性评价提供重要参考。

关键词：喹诺酮类抗生素美国薄荷萌发生长隶属函数耐受性