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水杨酸诱发的H2O2对丹参抗氧化系统的影响

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水杨酸诱发的H2O2对丹参抗氧化系统的影响

作者：行冰玉西北农林科技大学

学位级别：硕士

以丹参(Salvia miltiorrhiza Bung)愈伤组织为材料，通过添加水杨酸(Salicylic acid，SA)诱导子诱导丹参愈伤组织H2O2迸发，进一步通过使用叶绿体光合电子传递链、NADPH氧化酶和POD等H2O2产生途径的抑制剂阻断H2O2产生，考察SA诱发的H2O... 详细信息

以丹参(Salvia miltiorrhiza Bung)愈伤组织为材料，通过添加水杨酸(Salicylic acid，SA)诱导子诱导丹参愈伤组织H2O2迸发，进一步通过使用叶绿体光合电子传递链、NADPH氧化酶和POD等H2O2产生途径的抑制剂阻断H2O2产生，考察SA诱发的H2O2对丹参超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)的活性、渗透调节物质含量和膜脂过氧化产物含量的影响，旨在明确以SA为外源诱导子诱导丹参培养细胞特异位点产生的H2O2对其抗氧化系统的影响，为揭示SA刺激后引起丹参细胞抗逆反应的机制提供基础研究。取得了以下主要结论： 1.丹参愈伤组织中含有完成的叶绿体。在光照强度(2000000Lx)下生长的丹参愈伤组织疏松翠绿，细胞内叶绿体结构功能完整。在透射电镜下观察到其中叶绿体数量丰富，在细胞边缘排列整齐，基粒片层排列紧密，清晰可见。通过指标测定发现丹参愈伤组织中叶绿素a与叶绿素b含量比值接近3∶1，符合植物生理学特征。 2. SA处理可引起丹参愈伤组织H2O2迸发，且诱导呈最适浓度型特征。15.6252.5mg·L-1的SA对丹参愈伤组织H2O2的生成均有促进作用，其中20.832.5mg·L-1的SA作用效果较佳，高浓度(25mg·L-1)的SA诱导长时间后由于造成细胞伤害而导致H2O2的合成能力降低。22.5mg·L-1诱导效果最强(为照组的2.3倍)。 3. SA处理可激发叶绿体产生H2O2，激活丹参抗氧化系统。SA处理引起抗氧化酶(SOD、CAT和POD)活性升高、膜脂过氧化产物丙二醛含量和渗透调节物质还原型谷胱甘肽含量的增加，用阻断叶绿体光合电子传递链产生H2O2途径的抑制剂敌草隆(DCMU)处理后，三种酶活性降低，丙二醛和还原型谷胱甘肽含量降低。聚丙烯酰胺电泳分析三种酶的同工酶谱带结果与生理检测结果一致。说明SA可诱导叶绿体产生H2O2，激活丹参的抗氧化防护系统以清除多余的ROS，保证细胞的正常代谢。 4. SA处理可诱导丹参愈伤组织NADPH氧化酶和POD产生H2O2，进一步引起SOD、CAT和POD活性的升高，聚丙烯酰胺电泳分析同工酶条带与生理检测结果一致;SA处理提高了丙二醛和还原型谷胱甘肽含量。分别用NADPH氧化酶和POD的抑制剂咪唑和叠氮钠处理，阻断了SA诱发的H2O2产生，导致SOD、POD和CAT活性降低，丙二醛和还原型谷胱甘肽含量降低。说明SA诱导了来源于NADPH氧化酶和POD的H2O2产生，激活了丹参愈伤组织的抗氧化系统来清除多余的ROS，维持植物正常的生理活动。以上结果明确了SA诱发特异位点产生的H2O2对丹参抗氧化系统的影响，为进一步揭示诱导子诱发的丹参抗逆反应提供了理论基础。

关键词：丹参培养细胞水杨酸聚丙烯酰胺电泳抗氧化防护系统

胞内、外Ca^(2+)在水杨酸诱导丹参幼苗迷迭香酸生物合成过程中的作用

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中国中药杂志 2013年第20期38卷 3424-3431页

作者：曹蓉蓉党小琳行冰玉张婧一董娟娥西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100

目的:为探讨胞内、外钙离子是否在水杨酸诱导丹参迷迭香酸生物合成中起作用。方法:以生长50 d的丹参幼苗为材料,通过喷施水杨酸诱导迷迭香酸合成量增加,再利用胞外钙通道抑制剂verapamil(Vp)和LaCl3、胞内钙调素拮抗剂trifluoperazine(T... 详细信息

目的:为探讨胞内、外钙离子是否在水杨酸诱导丹参迷迭香酸生物合成中起作用。方法:以生长50 d的丹参幼苗为材料,通过喷施水杨酸诱导迷迭香酸合成量增加,再利用胞外钙通道抑制剂verapamil(Vp)和LaCl3、胞内钙调素拮抗剂trifluoperazine(TFP)和胞内钙通道上IP3受体抑制剂LiCl处理,分别考察水杨酸、钙离子通道抑制剂/钙调素拮抗剂处理后迷迭香酸的合成量及其合成相关酶(PAL,TAT)的活性变化。结果:2.0 mmol·L-1的水杨酸处理24 h后可诱导迷迭香酸合成量升高到(40.51±2.16)mg·g-1,是对照的1.97倍,迷迭香酸合成相关酶PAL活性升高到对照的1.42倍,TAT活性升高到对照的1.29倍;Vp,LaCl3,TFP,LiCl处理均抑制了水杨酸诱导的PAL,TAT活性的升高,从而导致了迷迭香酸合成量降低。结论:水杨酸诱导丹参迷迭香酸生物合成过程中,胞内、外钙离子发挥着重要的信号转导作用。

关键词：丹参水杨酸 PAL和TAT 迷迭香酸钙通道抑制剂钙调素拮抗剂

茉莉酸甲酯对丹参培养细胞中迷迭香酸生物合成及相关酶活性的影响

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植物生理学报 2013年第12期49卷 1326-1332页

作者：行冰玉党小琳张婧一汪波陈子逸董娟娥西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100

茉莉酸甲酯是植物细胞响应外界刺激产生的重要信号分子,与植物次生代谢物的生物合成有关。本研究考察了茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)对丹参培养细胞中迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)生物合成的影响。结果显示,10μmol·L-1的MeJA诱... 详细信息

茉莉酸甲酯是植物细胞响应外界刺激产生的重要信号分子,与植物次生代谢物的生物合成有关。本研究考察了茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)对丹参培养细胞中迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)生物合成的影响。结果显示,10μmol·L-1的MeJA诱导24 h后可显著提高丹参愈伤细胞中RA的积累量及其相关酶(PAL、TAT)的活性,在48 h时RA积累量和酶活性达到最大。布洛芬(IBU)处理可抑制MeJA对RA积累量和相关酶活性的促进作用,外源施加MeJA可部分解除IBU对RA合成及其相关酶活性的抑制作用。说明MeJA可以显著促进丹参培养细胞中RA的生物合成,IBU抑制了MeJA合成、PAL和TAT活性,从而导致了RA合成受阻。

关键词：丹参茉莉酸甲酯迷迭香酸苯丙氨酸解氨酶酪氨酸氨基转移酶

Ca^(2+)对水杨酸诱发的丹参幼苗丹酚酸B生物合成的影响

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生物工程学报 2013年第12期29卷 1836-1846页

作者：曹蓉蓉行冰玉党小琳姚雅琴刘连成董娟娥西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100

为研究Ca2+在水杨酸诱导丹参幼苗丹酚酸B生物合成过程中的作用,分别用激光共聚焦显微镜和高效液相色谱仪检测胞外Ca2+通道抑制剂Vp和LaCl3,胞内Ca2+通道抑制剂LiCl以及胞内钙调素拮抗剂TFP处理前、后水杨酸诱导丹参叶片保卫细胞内Ca2+... 详细信息

为研究Ca2+在水杨酸诱导丹参幼苗丹酚酸B生物合成过程中的作用,分别用激光共聚焦显微镜和高效液相色谱仪检测胞外Ca2+通道抑制剂Vp和LaCl3,胞内Ca2+通道抑制剂LiCl以及胞内钙调素拮抗剂TFP处理前、后水杨酸诱导丹参叶片保卫细胞内Ca2+荧光强度和丹酚酸B含量的变化。结果表明,水杨酸(SA)处理后6 min即可诱发丹参幼苗叶片保卫细胞内Ca2+迸发,持续时间为2~3 min,丹参幼苗丹酚酸B生物合成量亦显著增加,且丹酚酸B合成量的增加发生在Ca2+迸发之后。胞外Ca2+通道抑制剂、胞内Ca2+通道抑制剂以及胞内钙调素拮抗剂均可抑制水杨酸诱导的Ca2+迸发和丹酚酸B的生物合成。结果表明水杨酸诱发的Ca2+对丹参幼苗丹酚酸B生物合成具有重要的调控作用。

关键词：丹参水杨酸丹酚酸B Ca^2+信号转导

Ca^(2+)对丹参培养细胞中迷迭香酸合成及其相关酶活性的影响

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生物工程学报 2012年第11期28卷 1359-1369页

作者：刘连成董娟娥张婧一党小琳行冰玉杨喜玲西北农林科技大学生命学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学校医院陕西杨凌712100

探究了外界Ca2+(0~50 mmol/L)对丹参培养细胞迷迭香酸合成及其相关酶活性的影响,并利用细胞膜钙离子通道抑制剂异搏定(Verpamil,VP)及钙离子载体A23187初步探讨了外界Ca2+浓度变化影响丹参培养细胞次生代谢的机制。结果显示:培养6 d时... 详细信息

探究了外界Ca2+(0~50 mmol/L)对丹参培养细胞迷迭香酸合成及其相关酶活性的影响,并利用细胞膜钙离子通道抑制剂异搏定(Verpamil,VP)及钙离子载体A23187初步探讨了外界Ca2+浓度变化影响丹参培养细胞次生代谢的机制。结果显示:培养6 d时的丹参细胞中迷迭香酸积累量与外界Ca2+浓度显著相关,其中10 mmol/L Ca2+最有利于迷迭香酸的合成,迷迭香酸最大积累量达20.149 mg/g DW,比1 mmol/L和3 mmol/LCa2+处理分别高37.3%和20.4%。分析迷迭香酸合成的两条支路上的关键酶PAL和TAT活性变化发现,两种酶活性亦受外界Ca2+浓度影响,且活性变化先于迷迭香酸的积累,说明这两种酶均参与迷迭香酸的生物合成,但PAL比TAT促进作用更明显。进一步用VP和A23187处理发现,外界Ca2+影响迷迭香酸的合成是通过影响胞内Ca2+浓度实现的,胞外Ca2+内流可能参与了这一过程。

关键词：丹参迷迭香酸钙离子苯丙氨酸解氨酶酪氨酸氨基转移酶

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一方多法——方剂学的教学思路转变方式

山西青年 2021年第15期 90-91页

作者：行冰玉西安职业技术学院

方剂学是以中医基础为指导,以中药学为基础,分析中药组成方剂的原理和配伍特点,是一门理论性非常强的学科,针对课程特点,对于学生惧理论、怕记忆、怵分析、爱动手、善合作的特点,通过研究教学思路,转变教学模式,发现学生学习兴趣明显提... 详细信息

方剂学是以中医基础为指导,以中药学为基础,分析中药组成方剂的原理和配伍特点,是一门理论性非常强的学科,针对课程特点,对于学生惧理论、怕记忆、怵分析、爱动手、善合作的特点,通过研究教学思路,转变教学模式,发现学生学习兴趣明显提高,对方剂的识记和理解较之前有显著进步。

关键词：方剂学药品生产技术高职院校教学思路

甲基紫精对丹参培养细胞抗氧化防护系统的影响

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植物生态学报 2014年第5期38卷 507-514页

作者：行冰玉朱楠张洪培杨喜玲董娟娥西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学校医院陕西杨凌712100

为了探讨甲基紫精(MV)对丹参(Salvia miltiorrhiza)体内抗氧化防护系统的影响及其生理机制。以MV为诱导剂,以敌草隆(DCMU)为抑制剂,考察了MV与DCMU处理后丹参悬浮培养细胞中H2O2、丙二醛、还原型谷胱甘肽的含量以及抗氧化防护酶(超氧化... 详细信息

为了探讨甲基紫精(MV)对丹参(Salvia miltiorrhiza)体内抗氧化防护系统的影响及其生理机制。以MV为诱导剂,以敌草隆(DCMU)为抑制剂,考察了MV与DCMU处理后丹参悬浮培养细胞中H2O2、丙二醛、还原型谷胱甘肽的含量以及抗氧化防护酶(超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT))活性变化和同工酶的表达差异。结果表明,MV处理显著提高了丹参培养细胞内H2O2、丙二醛以及还原型谷胱甘肽含量;MV处理使CAT、POD活性增强,谱带颜色更亮,条带增加。DCMU处理显著抑制了MV诱导的H2O2、丙二醛、还原型谷胱甘肽含量的增加,抗氧化酶活性的升高和同工酶的表达。以上结果说明,MV可诱导丹参培养细胞叶绿体产生H2O2,H2O2激活了丹参培养细胞抗氧化防护系统以维持细胞正常的生理活动。

关键词：抗氧化防护系统叶绿体敌草隆甲基紫精聚丙烯酰胺凝胶电泳丹参

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转变办学方案实现产教融合

农家参谋 2020年第3期 229-229页

作者：行冰玉张璐璐陈静西安职业技术学院生物工程学院

职业教育是组成我国高等教育的重要部分。近几年面临着"招生难"的问题,直接影响到学校的产教融合和学生的实际就业情况。本文针对这一问题进行分析并找出几种改善现状的方法,从而吸引更多考生,促进职业院校的长远发展,加快产与教的深度... 详细信息

职业教育是组成我国高等教育的重要部分。近几年面临着"招生难"的问题,直接影响到学校的产教融合和学生的实际就业情况。本文针对这一问题进行分析并找出几种改善现状的方法,从而吸引更多考生,促进职业院校的长远发展,加快产与教的深度融合。

关键词：高职院校产教融合校企合作

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杜仲雄花提取物的体外抗氧化活性评价

林业科学 2013年第3期49卷 63-69页

作者：邱高翔董娟娥马希汉行冰玉张靖一雷鸣西北农林科技大学生命科学学院杨凌712100 西北农林科技大学理学院杨凌712100

以杜仲雄花乙醇提取物的石油醚萃取相、乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃取相和水相(萃余相)为研究对象,在测定各相总酚含量的基础上,选用DPPH自由基清除率、羟自由基清除率、还原力和抗脂质过氧化活性4项指标评价杜仲雄花各萃取(余)相的抗氧... 详细信息

以杜仲雄花乙醇提取物的石油醚萃取相、乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃取相和水相(萃余相)为研究对象,在测定各相总酚含量的基础上,选用DPPH自由基清除率、羟自由基清除率、还原力和抗脂质过氧化活性4项指标评价杜仲雄花各萃取(余)相的抗氧化活性,并与抗氧化剂BHT和VC进行比较。结果表明:杜仲雄花中含有大量的酚类化合物,其中乙酸乙酯相(393.47mg·g-1)和正丁醇相(287.33mg·g-1)中的总酚含量显著高于石油醚相(105.42mg·g-1)和水相(114.74mg·g-1),对DPPH自由基的清除率分别为91.55%和80.32%,接近于BHT和VC;正丁醇相对羟自由基清除率较高(80.47%);乙酸乙酯相的还原力高于BHT和VC;乙酸乙酯相、正丁醇相和水相的抗脂质过氧化活性显著高于VC。杜仲雄花提取物的还原力、DPPH自由基清除率和抗脂质过氧化活性与其总酚含量呈显著正相关(R2>0.9),与萃取(余)相的质量浓度呈明显的量效关系,这说明杜仲雄花具有较强的抗氧化活性,可作为进一步生产保健品的原料。

关键词：杜仲杜仲雄花总酚抗氧化活性