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阿卡维基转移酶的异源表达及转糖基作用

食品科学 2025年第2期46卷 81-88页

作者：薛正莲王雨晴李闯李丹丹朱司宝李翔飞安徽工程大学生物与食品工程学院安徽芜湖241000

为深入研究阿卡波糖合成途径中关键酶——阿卡维基转移酶(acarviosyltransferase,ATase)的结构性质和催化功能,从犹他游动放线菌Actinoplanes ***50基因组中扩增其编码基因acbD,并实现在Escherichia coli中的异源表达。生物信息学分析表... 详细信息

为深入研究阿卡波糖合成途径中关键酶——阿卡维基转移酶(acarviosyltransferase,ATase)的结构性质和催化功能,从犹他游动放线菌Actinoplanes ***50基因组中扩增其编码基因acbD,并实现在Escherichia coli中的异源表达。生物信息学分析表明acbD表达产物ATase的保守结构域与糖苷水解酶家族13的环糊精糖基转移酶高度相似,且存在信号肽和跨膜区。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,在去除信号肽的编码序列后,acbD的可溶性表达水平提高了22.4倍。重组ATase的最适催化温度和最适反应pH值分别为30℃和7.0。底物谱分析表明重组ATase催化D-水杨苷的活力最高,为82.85 U/mL,其次是L-山梨糖(63.75 U/mL),也是首次发现L-山梨糖可作为ATase的优良糖基供体。以上结果为进一步明确ATase的催化机制奠定了基础。

关键词：阿卡维基转移酶阿卡波糖异源表达转糖基作用酶学性质

马立克病病毒miR-M4-5p宿主靶基因cDNA文库的构建及鉴定

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畜牧兽医学报 2018年第2期49卷 348-359页

作者：薛正飞滕蔓李会珍马圣明宋利娜张雅罗俊张改平河南农业大学生命科学学院郑州450002 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室郑州450002 河南科技大学动物科技学院动物疫病与公共安全重点实验室洛阳471003

马立克病病毒(MDV)是少数感染自然宿主后可诱发淋巴瘤的疱疹病毒之一,是研究肿瘤发生及发展的理想动物模型。目前已报道MDV可编码数十种miRNA,其中MDV-1编码的miR-M4-5p被鉴定为宿主细胞miR-155的同源物,由于miR-155与人类多种肿瘤性疾... 详细信息

马立克病病毒(MDV)是少数感染自然宿主后可诱发淋巴瘤的疱疹病毒之一,是研究肿瘤发生及发展的理想动物模型。目前已报道MDV可编码数十种miRNA,其中MDV-1编码的miR-M4-5p被鉴定为宿主细胞miR-155的同源物,由于miR-155与人类多种肿瘤性疾病密切相关,这意味着miR-M4-5p可能在MDV的致瘤过程中扮演重要角色。本研究旨在构建miR-M4-5p的宿主靶基因文库并进行初步鉴定。提取鸡胚成纤维细胞(CEF)总RNA,反转录合成cDNA,用hybrid-PCR扩增候选靶基因片段连接到pMD19-T载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞后挑选单克隆进行PCR鉴定及测序,通过BLAST比对分析,共获得88个宿主候选靶基因序列。优先选择miRNA结合靶点位于mRNA 3′-UTR且与miR-M4-5p种子序列(2~7nt)完全互补配对的29个候选靶基因,构建报告基因载体进行双荧光素酶报告试验,通过三轮双荧光素酶报告试验最终初步鉴定5个宿主靶基因:PRICKLE1、COLA、BCAT1、ANTXR1和TECPR1,为进一步揭示miR-M4-5p的分子调控机制奠定了重要基础。

关键词：马立克病病毒 hybrid-PCR miR-M4-5p cDNA文库宿主靶基因肿瘤发生

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马立克病病毒单克隆抗体的制备

中国兽医科学 2018年第9期48卷 1102-1108页

作者：宋利娜滕蔓郑鹿平李会珍朱志坚薛正飞郅玉宝罗俊张改平河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南科技大学动物科技学院动物疫病与公共安全重点实验室河南洛阳471003 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

以纯化的经鸡胚成纤维细胞（CEF）培养的马立克病病毒（MDV）超强毒株GX0101病毒粒子作为免疫原，制备特异性识别MDV的单克隆抗体。GX0101感染CEF后第96小时收集细胞并反复冻融3次，离心取上清，选用100ku的切向流超滤离心管浓缩，浓缩... 详细信息

以纯化的经鸡胚成纤维细胞（CEF）培养的马立克病病毒（MDV）超强毒株GX0101病毒粒子作为免疫原，制备特异性识别MDV的单克隆抗体。GX0101感染CEF后第96小时收集细胞并反复冻融3次，离心取上清，选用100ku的切向流超滤离心管浓缩，浓缩液通过Sepharose 4 Fast Flow（4FF）凝胶作为层析介质分离纯化MDV病毒粒子，聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR分析不同收集峰MDv病毒含量，并经过透射电子显微镜观察到直径约100nm的MDV病毒粒子。进一步用100ku的切向流超滤离心管浓缩,制备峰尖病毒浓缩液，以此免疫雌性BALB／c小鼠制备单克隆抗体。通过免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）和Western—blot筛选,最终获得107个阳性克隆。由其中1株强阳性单克隆抗体杂交瘤细胞株1082制备的单克隆抗体腹水1PMA效价为1：2．56×10^6。本研究结果为后续MDV单克隆抗体的筛选、鉴定及诊断试剂研发奠定了重要基础。

关键词：马立克病马立克病病毒单克隆抗体 IPMA

自适应变分模态分解算法在高温高压水空化特性分析中的应用

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西安交通大学学报 2025年第1期59卷 56-67页

作者：许博胡鸿飞王海军西安交通大学能源与动力工程学院西安710049

针对高温高压流动工况下,空化状态判断困难、传统分析方法难以有效提取压力脉动信号中的有效信息的问题,以孔板为对象,开展了高温高压水的空化实验,并提出了一种基于遗传算法的自适应变分模态分解(AVMD)算法。该算法通过结合中心频率法... 详细信息

针对高温高压流动工况下,空化状态判断困难、传统分析方法难以有效提取压力脉动信号中的有效信息的问题,以孔板为对象,开展了高温高压水的空化实验,并提出了一种基于遗传算法的自适应变分模态分解(AVMD)算法。该算法通过结合中心频率法、遗传算法、功率谱熵和相对能量等技术,自适应地确定变分模态分解算法中的超参数并有效去除信号中的噪声成分,提高了空化特征的提取精度。结果表明:AVMD算法能够精确捕捉到高温高压水流经孔板时空化现象的发生和发展,识别空化起始点、转捩点以及空化强度的变化;当高温高压水流经孔板后,压力脉动的无量纲频率在0.04~0.35、压力脉动的无量纲幅值在0.014~0.067时,空化现象开始出现;随着空化强度增加,管内压力脉动幅值和频率整体呈增大趋势;空化起始转捩点及空化严重转捩点与入口压力和工质入口过冷度密切相关。AVMD算法能够有效提高空化特性分析的精度,尤其是在复杂流动条件下的空化预测,为压水堆核电站冷却剂系统和高压蒸汽系统的稳定运行提供理论依据和参考。

关键词：高温高压水空化特性自适应变分模态分解孔板

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“宏观调控”的规范内涵与制度表达

浙江学刊 2025年第1期 143-151页

作者：朱一飞中国计量大学法学院

作为中国法学自主知识体系中具有标识性、核心性的概念，“宏观调控”具有稳定的立体化的规范内涵：宏观调控是社会主义市场经济体制的有机组成部分和重要特征，是社会主义市场经济体制下国家对市场经济进行宏观调节和管理的经济职能，... 详细信息

作为中国法学自主知识体系中具有标识性、核心性的概念，“宏观调控”具有稳定的立体化的规范内涵：宏观调控是社会主义市场经济体制的有机组成部分和重要特征，是社会主义市场经济体制下国家对市场经济进行宏观调节和管理的经济职能，也是一个动态发展的权力体系和制度体系。以宏观调控条款为纽带，宪法与部门法在规范宏观调控的协动中形成了“框架秩序与实施机制双层结构”的制度表达：宪法社会主义市场经济规范体系及宏观调控条款构成国家实行宏观调控的框架秩序；而通过宏观调控条款的宪法委托，立法机关既负有宪法义务，又获得充分的裁量空间，得以在框架秩序之下对宏观调控予以具体化，从而构建和完善宏观调控的实施机制。

关键词：宏观调控规范内涵制度表达双层结构

独立储能参与的电能量和全过程调频市场联合出清模型

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西安交通大学学报 2025年第1期59卷 17-27页

作者：黄翰锟王秀丽张恒源李洁李亚飞西安交通大学电气工程学院西安710049 国网江苏省电力有限公司苏州供电分公司江苏苏州215000

为应对电力系统内同步资源占比逐渐下降给系统频率安全带来的挑战,从储能参与快速调频、提高系统频率安全性的实际需求出发,基于有储能参与的电能量和备用市场出清模型展开推导。依次分析了无储能参与和有储能参与时系统的频率响应过程... 详细信息

为应对电力系统内同步资源占比逐渐下降给系统频率安全带来的挑战,从储能参与快速调频、提高系统频率安全性的实际需求出发,基于有储能参与的电能量和备用市场出清模型展开推导。依次分析了无储能参与和有储能参与时系统的频率响应过程,确定了储能提供快速调频和二次调频的约束条件,建立了独立储能参与的电能量和备用市场、调频辅助服务市场(包含快速调频)的联合出清模型,并给出了该模型下电能量、运行备用、快速调频和二次调频的定价机制。所提模型涉及了惯量响应、快速调频、一次调频和二次调频4个阶段,反映了电力系统全阶段频率安全特性。仿真结果表明,相比无储能参与的联合出清模型,所提模型在IEEE-30和NREL-118算例下系统运行成本分别降低了约0.72%和0.47%,在提高了系统频率安全性的同时实现了系统运行成本的降低。

关键词：快速调频储能调频辅助服务电力市场频率响应

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山姜素调节cAMP/PKA/CREB信号通路促进骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合

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中国组织工程研究 2025年第12期29卷 2438-2443页

作者：陆飞周静金涛连云港市第一人民医院康复医学科江苏省连云港市222000 南京医科大学康达学院康复医学部江苏省连云港市222000 中国人民解放军东部战区总医院健康医学科江苏省南京市210018

背景:山姜素具有抗炎、抗肿瘤、抗菌等作用,已被证实能够缓解骨质疏松症,但山姜素对骨质疏松性骨折的影响及机制仍不清楚。目的:探讨山姜素调节环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白信号通路对骨质疏松性骨折大鼠的改善作... 详细信息

背景:山姜素具有抗炎、抗肿瘤、抗菌等作用,已被证实能够缓解骨质疏松症,但山姜素对骨质疏松性骨折的影响及机制仍不清楚。目的:探讨山姜素调节环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白信号通路对骨质疏松性骨折大鼠的改善作用。方法:采用双侧卵巢切除手术构建骨质疏松症骨折大鼠模型,将成功造模大鼠依据随机数字表法分为山姜素低、中、高剂量组、抑制剂组和模型组,另选12只大鼠作为假手术组。骨折造模当天,山姜素低、中、高剂量组大鼠灌胃7.5,15,30 mg/kg的山姜素+腹腔注射等量的生理盐水,抑制剂组灌胃30 mg/kg的山姜素+腹腔注射5 mg/kg的H-89(通路抑制剂),模型组与假手术组给予(灌胃+腹腔注射)等量生理盐水,1次/d,连续8周。放射性检查评估大鼠骨折愈合情况并进行愈合评分;骨密度扫描仪测定骨折处骨密度;通过三点弯曲实验和压缩实验评估大鼠股骨生物力学状况;苏木精-伊红染色观察大鼠骨折处病理损伤;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清碱性磷酸酶、骨钙素和Ⅰ型胶原交联C-末端肽、环磷酸腺苷水平的变化;Western blot检测股骨组织中骨形态发生蛋白2和环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白通路蛋白表达。结果与结论:①相较于假手术组,模型组大鼠骨折愈合评分、骨密度、最大负荷、最大应力、碱性磷酸酶、骨钙素、环磷酸腺苷水平、骨形态发生蛋白2、磷酸化蛋白激酶A/蛋白激酶A、磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达下降,Ⅰ型胶原交联羧基末端肽水平增加(P<0.05);与模型组比较,山姜素各剂量组大鼠上述各项指标呈现相反的变化(P<0.05);与山姜素高剂量组比较,抑制剂组大鼠上述指标变化均被逆转(P<0.05)。②结论:山姜素可能通过激活环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白信号通路加速骨质疏松症骨折大鼠的骨折愈合。

关键词：山姜素环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白骨质疏松骨折愈合大鼠

卡拉胶-变性淀粉-蛋清蛋白复合凝胶的制备及特性表征

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食品科学 2025年第2期46卷 72-80页

作者：崔亚雪李文钊杨晓飞颜凤张家萍阮美娟天津科技大学食品科学与工程学院天津300457

以卡拉胶、羟丙基二淀粉磷酸酯和蛋清粉为原料,制备卡拉胶-羟丙基二淀粉磷酸酯-蛋清蛋白三元复合凝胶并对其凝胶特性和微观结构特性进行表征,同时探究不同改性蛋清粉与复合多糖的相互作用及其对复合凝胶特性的影响。结果显示,与单体卡... 详细信息

以卡拉胶、羟丙基二淀粉磷酸酯和蛋清粉为原料,制备卡拉胶-羟丙基二淀粉磷酸酯-蛋清蛋白三元复合凝胶并对其凝胶特性和微观结构特性进行表征,同时探究不同改性蛋清粉与复合多糖的相互作用及其对复合凝胶特性的影响。结果显示,与单体卡拉胶、卡拉胶/变性淀粉二元复合凝胶相比,多糖-蛋白复合凝胶的凝胶强度和持水性增大,弹性模量G’值显著提高,弛豫时间T_(23)显著缩短,其相对峰面积占比A23减小,可冻结水分含量下降。多糖-蛋白复合凝胶红外光谱出现振幅增大以及峰位弱移现象。利用X射线衍射仪分析凝胶的结晶特性,多糖-蛋白复合凝胶的衍射峰强度减弱,结晶度存在一定程度的降低。利用扫描电子显微镜观察凝胶的微观结构发现复合多糖与蛋清蛋白的相互作用可以促成稳定的复合凝胶,形成致密均匀的凝胶网络结构。与此同时,不同改性蛋清粉(P10、PHG14、PHG21)与多糖结合的三元复合凝胶在以上所运用的各种分析工具结果中呈现出不同程度的改善,其中PHG14、PHG21参与形成的多糖-蛋白复合凝胶表现出相对更显著的效果,具有更稳定的凝胶特性和微观结构特性。

关键词：卡拉胶变性淀粉蛋清蛋白复合凝胶凝胶特性

黄土丘陵沟壑区不同雨强下坡面侵蚀空间异质性及其机理

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水土保持研究 2025年第1期32卷 1-12页

作者：李朋飞曹凯胡晋飞高健键郝铭揆党恬敏高晨迪西安科技大学测绘科学与技术学院黄河水利委员会绥德水土保持科学试验站黄河流域水土保持生态环境监测中心

[目的]明晰野外坡面侵蚀沉积精细时空分布特征及水动力学参数间的联系，以深入坡面侵蚀产沙过程的认识。[方法]以黄土丘陵沟壑区辛店沟流域自然坡面的3个径流小区(5 m×1.5 m)为研究对象，分别在90,120,150 mm/h雨强下进行连续10场降雨... 详细信息

[目的]明晰野外坡面侵蚀沉积精细时空分布特征及水动力学参数间的联系，以深入坡面侵蚀产沙过程的认识。[方法]以黄土丘陵沟壑区辛店沟流域自然坡面的3个径流小区(5 m×1.5 m)为研究对象，分别在90,120,150 mm/h雨强下进行连续10场降雨试验，同时结合地基三维激光扫描技术，研究坡面侵蚀沉积时空特征，探讨不同坡段水力学参数变化特征及其与坡面侵蚀率、产沙率的关系。[结果](1)随着雨强的增大，坡面侵蚀加重，以D,E坡段较为严重，沉积减小且分散，以E坡段最为明显；侵蚀面积而言：90,150 mm/h下，B坡段最大，C坡段次之，D坡段最小；120 mm/h雨强下，B坡段最大，D坡段次之，C坡段最小。(2)连续降雨作用下，水力学参数影响坡面粗糙度变化，坡面粗糙度又反作用于水力学参数，致使水动力学参数出现波动变化，当土体逐渐饱和达到稳定的入渗，水动力学参数逐渐趋于稳定；同一雨强下，距离坡顶长度与雷诺数、弗劳德数、单位径流功率成正比，与径流剪切力、Darcy-Weisbach阻力系数成反比。(3) 90,120 mm/h雨强下，径流功率是侵蚀过程中重要的水动力学参数，Darcy-Weisbach阻力系数和单位径流功率认为是坡面产沙过程重要的水动力学参数，皆为线性函数关系；150 mm/h雨强下，水动力学与侵蚀率、产沙率无关。[结论]在不同雨强下，坡面侵蚀与水动力学参数之间的关系存在差异，其中径流功率、Darcy-Weisbach阻力系数和单位径流功率是自然坡面产沙过程的重要参数，且二者呈线性关系。

关键词：侵蚀沉积水动力学模拟降雨三维激光扫描仪黄土丘陵沟壑区