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ADSCs修复邻苯二甲酸二辛酯（DEHP）对小鼠精原细胞损伤的机制研究

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ADSCs修复邻苯二甲酸二辛酯（DEHP）对小鼠精原细胞损伤的机制研究

作者：蔺博涵江苏大学

学位级别：硕士

目的:探究邻苯二甲酸二辛酯（di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP）对精原细胞GC-1 spg损伤的可能机制以及脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）和脂肪间充质干细胞来源的胞外囊泡（adipose stem cells-derived extracellular vesicles,ADSCs-EVs）对损伤后的GC-1 spg的修复作用,为临床治疗男性生精系统药物/毒物氧化损伤提供一定的实验依据。方法:（1）提取ADSCs,传代至3～5代进行实验,实验鉴定ADSCs;（2）超速离心法提取ADSCs-EVs,通过纳米粒径跟踪分析技术（NTA）检测ADSCs-EVs的粒径大小分布;透射电子显微镜（TEM）观察ADSCs-EVs的形态;Western-blot实验检测ADSCs-EVs的表面标志蛋白CD 9、CD 63的表达;（3）使用5个不同浓度的DEHP处理GC-1 spg细胞,通过CCK8实验;Transwell实验;克隆形成实验;流式细胞术;Western-blot实验;化学分光光度法检测GC-1 spg细胞内MDA、Fe以及GSH含量;细胞线粒体膜电位检测实验和细胞活性氧检测实验等探究DEHP对GC-1 spg增殖、迁移、克隆、凋亡能力和铁死亡相关机制的影响;（4）建立ADSCs共培养体系,通过上述实验探究ADSCs对损伤后的GC-1 spg增殖、迁移、克隆、凋亡能力和铁死亡相关机制的修复作用;（5）细胞免疫荧光实验观察ADSCs-EVs被GC-1 spg细胞内化的情况,通过上述实验探究ADSCs-EVs对损伤后的GC-1 spg增殖、迁移、克隆、凋亡能力和铁死亡相关机制的修复作用;（6）通过上述实验检测使用铁死亡抑制剂（Ferrostatin-1）后,其对损伤后的GC-1 spg增殖、迁移、克隆、凋亡能力和铁死亡相关机制的影响。结果:（1）在脂肪组织中成功分离出一种类似纤维细胞的呈现梭形或多边形的细胞,在多次传代后其形态更为典型,使用成骨、成脂诱导剂对其诱导后可定向分化为成骨细胞和脂肪细胞,使用流式细胞术鉴定后该细胞表面标志符合ADSCs特征;（2）TEM镜下可见超速离心所得物质为单个“杯盘状”的纳米膜性囊泡,NTA显示其直径大小在几十到几百纳米之间,Western-blot实验检测到其表达ADSCs-EVs表面标记CD 9和CD 63,符合ADSCs-EVs的鉴定标准;（3）使用5种不同浓度DEHP处理GC-1 spg后,CCK8实验、Transwell实验、克隆形成实验显示DEHP可抑制GC-1 spg的增殖、迁移以及克隆形成能力;流式细胞术显示DEHP会促进GC-1 spg的凋亡;化学分光光度检测显示DEHP使GC-1 spg内的Fe蓄积增加,MDA和GSH含量下降;细胞线粒体膜电位检测实验显示DEHP使GC-1 spg内线粒体膜电位下降;细胞活性氧检测显示DEHP使的GC-1 spg内活性氧含量增加;Western-blot实验显示DEHP使GC-1 spg的铁死亡相关蛋白GPX4和x CT表达下降;（4）细胞免疫荧光实验显示ADSCs-EVs可被GC-1 spg内化摄取;（5）通过上述实验,ADSCs和ADSCs-EVs均促进了损伤的GC-1 spg的增殖、迁移、克隆能力,同时抑制了细胞凋亡,使其细胞内Fe和活性氧含量下降,细胞线粒体膜电位、MDA、GSH、GPX4和x CT表达恢复至损伤前;（6）铁死亡抑制剂处理后,损伤的GC-1 spg的生物学特性以及上述细胞指标均恢复至损伤前。结论:DEHP可通过铁死亡途径抑制GC-1 spg增殖、迁移能力;ADSCs以及ADSCs-EVs可阻断铁死亡通路修复损伤后的GC-1 spg细胞。

关键词： ADSCs ADSCs-EVs 精原细胞GC-1spg 铁死亡 DEHP

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我国绿色税收体系优化研析

税务研究 2024年第6期 38-43页

作者：邓微达蔺涵婧王智烜厦门大学教师发展中心厦门国家会计学院

新时代新征程,“谋划新一轮财税体制改革”必然包含推动新一轮绿色税收体系改革的内容。基于我国绿色税收在降碳、减污、扩绿、增长的职能布局,借鉴他国在绿色低碳转型中的实践经验,我国绿色税收体系的优化应从以下几个方面着手:一是以... 详细信息

新时代新征程,“谋划新一轮财税体制改革”必然包含推动新一轮绿色税收体系改革的内容。基于我国绿色税收在降碳、减污、扩绿、增长的职能布局,借鉴他国在绿色低碳转型中的实践经验,我国绿色税收体系的优化应从以下几个方面着手:一是以谋划新一轮财税体制改革为契机,推动绿色税收改革持续深入;二是坚持系统观念,统筹推进绿色税收改革进程;三是把握好经济周期与绿色税收改革的关系;四是继续加强绿色税收的社会影响力。

关键词：绿色税收绿色低碳转型碳税碳排放权交易系统碳关税

circ_0000515/miR-1296-5p/CDK2轴在乳腺癌中的作用

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江苏大学学报（医学版） 2023年第4期33卷 317-322页

作者：杨琴王超蔺博涵虞绮雯李涛孙晓春江苏大学附属四院妇女保健科江苏镇江212002 江苏大学医学院江苏镇江212013

目的:探究circ_0000515在乳腺癌进展中的可能作用机制。方法:通过GEO数据库下载乳腺癌circRNA芯片数据集(GSE101123)并采用R语言进行表达差异分析,筛选出目标circRNA分子作为研究对象并检测其在乳腺癌细胞株和组织中的表达;生物信息学... 详细信息

目的:探究circ_0000515在乳腺癌进展中的可能作用机制。方法:通过GEO数据库下载乳腺癌circRNA芯片数据集(GSE101123)并采用R语言进行表达差异分析,筛选出目标circRNA分子作为研究对象并检测其在乳腺癌细胞株和组织中的表达;生物信息学分析与选择该circRNA的目的miRNA,及后者对应的靶向mRNA,并采用双荧光素酶实验和蛋白质印迹进行验证;将目标circRNA的siRNA转染人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞,CCK-8实验和划痕实验观察细胞的增殖和迁移,荧光定量PCR(qRT-PCR)检测RNA表达,蛋白质印迹实验检测mRNA编码蛋白的表达。结果:选择和下载GSE101123数据集后用R语言筛选出5个高表达的circRNA分子,选定其中的circ_0000515作为研究对象,生物信息学分析得出circ_0000515、miR-1296-5p和细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)三者之间可能存在靶向关系。qRT-PCR结果显示,circ_0000515中乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中的表达明显高于人乳腺上皮细胞株MCF-10A;在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织中的表达。抑制circ_0000515表达后,乳腺癌细胞增殖和迁移能力较对照组显著下降,miR-1296-5p表达明显增高;双荧光素酶实验证实circ_0000515与miR-1296-5p之间存在靶向关系。蛋白质印迹实验证实抑制circ_0000515表达后CDK2蛋白表达明显减低。结论:circ_0000515在乳腺癌中高表达,可能通过circ_0000515/miR-1296-5p/CDK2作用轴影响乳腺癌进展。

关键词： circ_0000515 乳腺癌细胞周期蛋白依赖性激酶2 miR-1296-5p 机制

2022年1月8日青海门源6.9级强地震动模拟研究

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地震工程学报 2024年第3期46卷 680-691页

作者：师涵博张元生中国地震局兰州地震研究所甘肃兰州730000

为满足数字化时代应急处置的新要求,基于随机有限断层法的发展,利用青海门源地区地下三维速度结构的模型和v S30数据,通过逐步迭代射线追踪法、格林函数位移解析相位谱和有限断层法的联合计算,以青海门源6.9级地震为例,获得具有地表土... 详细信息

为满足数字化时代应急处置的新要求,基于随机有限断层法的发展,利用青海门源地区地下三维速度结构的模型和v S30数据,通过逐步迭代射线追踪法、格林函数位移解析相位谱和有限断层法的联合计算,以青海门源6.9级地震为例,获得具有地表土层放大效应的强地震动模拟数据,进而绘制出研究区内PGA和烈度分布模拟图;并与实际台站记录的PGA和实地调查烈度结果相比,其烈度区划范围基本一致,同时也验证此联合计算方法可用于未来地震灾害的快速评估,并为灾后应急救援提供参考。

关键词：门源地震强地震动模拟有限断层法逐步迭代射线追踪法

基于压裂液自发吸入模型的页岩气压裂液滤失定量预测

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天然气工业 2024年第2期44卷 92-98页

作者：王琳琳蔺小博冷静怡周长静马占国肖元相中国石油大学(北京)安全与海洋工程学院中国石油长庆油田公司油气工艺研究院巴黎高科路桥学院

非常规油气资源开发常使用水力压裂技术提高单井产量,然而压裂现场数据表明,大量压裂液会滞留在地层中导致压裂液的返排率较低,将对储层和地下水环境造成一定影响。为进一步研究压裂液滤失机理并准确预测压裂液滤失量,首先建立了由毛细... 详细信息

非常规油气资源开发常使用水力压裂技术提高单井产量,然而压裂现场数据表明,大量压裂液会滞留在地层中导致压裂液的返排率较低,将对储层和地下水环境造成一定影响。为进一步研究压裂液滤失机理并准确预测压裂液滤失量,首先建立了由毛细管力作用引起的压裂液自发吸入模型,然后对压裂液滤失量进行定量计算,并在现场进行了验证。最后,引入无量纲吸入率参数分析了控制压裂液滤失的关键因素。研究结果表明:(1)页岩气水平井压裂施工中大约50%~95%的压裂液通过基质吸入,压裂液吸入量仅与吸入率参数、裂缝面积和吸收时间有关;(2)当润湿相黏度与非润湿相黏度之比超过阈值时,吸入率参数主要由岩石的孔径分布参数决定,流体黏度的影响非常有限;(3)当孔径分布参数介于0.5~0.7时,吸入率参数达到相对较高的值,即更多的压裂液被吸收到地层中;(4)当润湿相黏度与非润湿相黏度之比大于10,孔径分布参数小于0.8时,优化后的自吸模型具有较大的适用性;(5)由毛细管力机理引起的压裂液滤失量与实际储层观察到的滤失量相近,可认为页岩储层有足够的存储滤失液的能力,不会影响地下水层中的饮用水。结论认为,建立的压裂液自发吸入模型,能够准确预测页岩气水平井压裂液滤失量,为非常规油气的生产及环境保护提供了技术支撑。

关键词：页岩气藏毛细管力滤失自发吸入吸入率参数流体黏度孔径分布参数

中央广播电视总台文化类综艺节目“IP化”对企业品牌的赋能价值

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中国广告 2024年第4期 52-54页

作者：蔺博中央广播电视总台总经理室客户服务一部

中央广播电视总台自2018年成立以来,不断推进全链条、全方位、全领域节目内容的创新,以“思想+艺术+技术”的融合思路,在各频道、各新媒体平台推出了一大批文化类IP节目,它们成功地将优秀传统文化中的知识转化成公众关注的热点,掀起了... 详细信息

中央广播电视总台自2018年成立以来,不断推进全链条、全方位、全领域节目内容的创新,以“思想+艺术+技术”的融合思路,在各频道、各新媒体平台推出了一大批文化类IP节目,它们成功地将优秀传统文化中的知识转化成公众关注的热点,掀起了一波又一波的“中华优秀传统文化热”。然而,目前学界更多关注的是娱乐综艺节目对品牌营销的作用和意义.

关键词：中华优秀传统文化新媒体平台融合思路品牌营销文化类综艺节目广播电视总台知识转化 IP化

基于网络药理学探讨大黄保护脓毒症心肌损伤的机制研究

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中国急救医学 2023年第11期43卷 898-904页

作者：刘艳如刘寒琼施良蔺博涵任国庆蔡华忠张建国孙文文宋旭李涛刘伟张浩深圳市第三人民医院急诊科广东深圳518112 张家港市第一人民医院急诊科江苏苏州215600 江苏大学附属医院急诊科江苏镇江212000 南京医科大学南京第一医院核医学科江苏南京210006 常州市妇幼保健院重症医学科常州医学中心南京医科大学江苏常州213004 江苏大学医学院江苏镇江212013

目的研究大黄对脓毒症心肌损伤和线粒体功能障碍的保护作用。方法网络药理学方法预测大黄与脓毒症心肌损伤的相关靶点,进行网络构建和蛋白质-蛋白质互作(PPI)分析,功能富集分析,构建活性成分-靶点-通路-疾病复方网络图。构建脂多糖(L... 详细信息

目的研究大黄对脓毒症心肌损伤和线粒体功能障碍的保护作用。方法网络药理学方法预测大黄与脓毒症心肌损伤的相关靶点,进行网络构建和蛋白质-蛋白质互作(PPI)分析,功能富集分析,构建活性成分-靶点-通路-疾病复方网络图。构建脂多糖(LPS)诱导的心肌损伤细胞模型,并将其分为正常对照组、LPS处理组和LPS+大黄组(5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L)三组。CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,MitoSOX线粒体超氧化物红色荧光探针测定线粒体活性氧(ROS)含量,线粒体膜电位荧光探针JC-10检测线粒体膜电位水平,荧光探针Calcein AM检测线粒体通透性转换孔开放程度,透射电镜分析线粒体超微结构,蛋白质印迹(Western Blot)法测定相关蛋白表达水平。结果 (1)网络药理学结果表明,共有21个靶点与大黄治疗脓毒症心肌损伤相关。PPI构建网络显示,细胞肿瘤抗原p53(TP53)、胱天蛋白酶3(CASP3)、白细胞介素-1β(IL-1β)、髓细胞增生原癌基因(MYC)、肿瘤坏死因子(TNF)、凋亡蛋白(BAX)和抗凋亡蛋白(Bcl-2)是关键靶点。基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析表明,磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路在大黄调控脓毒症心肌损伤过程中起重要作用。(2)与对照组比较,LPS处理组细胞增殖能力下降且心肌细胞凋亡增加,线粒体ROS含量增加,线粒体膜电位降低,线粒体通透性转换孔开放,线粒体超微结构破坏。大黄可逆转LPS对心肌细胞的上述损伤效应。(3)在LPS诱导的脓毒症心肌损伤细胞模型中,磷酸化磷酯酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、CASP3和BAX的蛋白表达水平增加,而Bcl-2的蛋白表达水平降低。大黄可逆转上述表达,以10μmol/L效果最显著。结论大黄通过PI3K/AKT通路调控心肌细胞线粒体氧化应激,减少细胞凋亡,降低脓毒症引起的心肌损伤。

关键词：大黄网络药理学脓毒症心肌损伤线粒体机制

增塑剂DEHP通过铁死亡途径抑制小鼠GC-1 spg精原细胞生长

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江苏大学学报（医学版） 2023年第2期33卷 146-151页

作者：蔺博涵刘伟王子璇王超李涛杨琴虞绮雯孙晓春江苏大学医学院江苏镇江212013 江苏大学第四附属医院妇女保健科江苏镇江212002

目的:探究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)损伤小鼠GC-1 spg精原细胞功能的可能机制。方法:采用不同浓度DEHP(0、30、60、90、120μmol/L)处理GC-1 spg细胞,通过CCK8实验、克隆形成实验和Transwell实验检... 详细信息

目的:探究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)损伤小鼠GC-1 spg精原细胞功能的可能机制。方法:采用不同浓度DEHP(0、30、60、90、120μmol/L)处理GC-1 spg细胞,通过CCK8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力的变化;化学分光光度比色法检测细胞内铁离子(Fe 3+)和丙二醛的相对含量;蛋白质印迹实验检测细胞内铁死亡相关蛋白胱氨酸/谷氨酸逆转运蛋白(xCT)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的相对表达;细胞免疫荧光染色技术检测细胞内活性氧水平以及线粒体膜电位(JC-1)的改变。使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(1μmol/L)与DEHP(90μmol/L)联合培养GC-1 spg细胞24 h,CCK8实验检测细胞的增殖能力。结果:与对照组(0μmol/L)相比,30、60、90、120μmol/L DEHP组细胞的增殖能力、克隆形成能力和迁移能力明显下降;丙二醛、活性氧、Fe 3+(90、120μmol/L DEHP组)含量明显升高;线粒体膜电位(60、90、120μmol/L DEHP组)明显降低;GPX4(60、90、120μmol/L DEHP组)和xCT蛋白表达水平明显降低。DEHP与Ferrostatin-1联合培养后细胞增殖能力较DEHP单独培养明显提高。结论:DEHP能够抑制GC-1 spg细胞的增殖和迁移能力,降低GPX4和xCT蛋白的表达,可能通过铁死亡途径引起细胞死亡。

关键词：精原细胞GC-1 spg DEHP 铁死亡 GPX4 xCT

基于MIMO神经网络均衡的16QAM模分-波分复用相干传输系统

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光学学报 2024年第3期44卷 38-45页

作者：张尧王晨桑博涵张宇王心怡周雯余建军复旦大学信息科学与工程学院上海200433

提出了一种基于神经网络的多输入多输出(MIMO)均衡器,并在大容量模分-波分复用通信系统中进行了实验验证。该系统基于6模掺铒光纤放大器实现了16通道波分复用双极化48 Gbaud 16阶正交振幅调制(16QAM),在LP01、LP02、LP11a、LP11b、LP21a... 详细信息

提出了一种基于神经网络的多输入多输出(MIMO)均衡器,并在大容量模分-波分复用通信系统中进行了实验验证。该系统基于6模掺铒光纤放大器实现了16通道波分复用双极化48 Gbaud 16阶正交振幅调制(16QAM),在LP01、LP02、LP11a、LP11b、LP21a、LP21b六种模式上传输了100 km少模光纤(FMF)。为降低非线性的影响,在接收端数字信号处理中,采用基于多标签技术的MIMO神经网络均衡器,能够显著提升系统性能。实验结果表明,经100 km的FMF传输,MIMO神经网络均衡器的强大性能使得系统的比特误码率能满足15%软判决前项纠错阈值要求。

关键词：光纤光学光纤通信模分复用波分复用神经网络均衡