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超声辅助-逆王水提取法结合ICP-MS测定PM2.5中24种金属元素

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现代预防医学 2022年第3期49卷 513-517页

作者：葛少林明佳佳李倩郑州市疾病预防控制中心

目的建立PM中24种金属元素的超声辅助-逆王水提取法-ICP-MS测定方法。方法样品经逆王水、氢氟酸超声加热回流提取后,使用ICP-MS测定24种金属元素。结果 24种金属元素的线性相关系数(r)均大于0.99,加标回收率在80%～120%之间;最低检出限... 详细信息

目的建立PM中24种金属元素的超声辅助-逆王水提取法-ICP-MS测定方法。方法样品经逆王水、氢氟酸超声加热回流提取后,使用ICP-MS测定24种金属元素。结果 24种金属元素的线性相关系数(r)均大于0.99,加标回收率在80%～120%之间;最低检出限为0.004 ng/m~3～1.450μg/m~3,方法相对标准差小于5%,对滤膜国家标准参考物质的测定结果均符合推荐值。对郑州市冬夏两季的65份样品进行测定,结果表明中原区冬夏两季和经开区夏季PM主要来源于本地地面扬尘,而经开区冬季PM存在外源输入。结论建立的方法提取效率高,灵敏、准确,可用于PM样品中24种金属元素的快速、准确的测定。

关键词： PM2.5 金属元素前处理方法超声辅助-逆王水提取法

光电离质谱技术在线监测不同部位烟草裂解产物

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质谱学报 2023年第1期44卷 78-86页

作者：王健葛少林谢映松张朝黄兰汪华袁龙贾良元仰科雷振安徽中烟工业有限责任公司烟草行业燃烧热解重点实验室安徽合肥230088 合肥工业大学化学与化工学院安徽合肥230009

为了实时、在线研究烟草原料烟丝的热裂解产物,本工作搭建了一套热裂解光电离质谱装置。利用真空紫外光电离飞行时间质谱装置研究烤烟烟丝不同部位(上-B2F、中-C3F和下-X2F)分别在300、400、500、600和700℃热裂解时的产物,在线获得3个... 详细信息

为了实时、在线研究烟草原料烟丝的热裂解产物,本工作搭建了一套热裂解光电离质谱装置。利用真空紫外光电离飞行时间质谱装置研究烤烟烟丝不同部位(上-B2F、中-C3F和下-X2F)分别在300、400、500、600和700℃热裂解时的产物,在线获得3个部位烟丝一系列热解产物的光电离质谱图,比较不同裂解温度下热解产物的变化规律。实验进一步分析了500℃下热解产物,如乙烯胺(m/z 43)、异戊二烯(m/z 68)和二甲基呋喃(m/z 96)等信号强度随时间的动态变化曲线,掌握裂解反应的动态变化过程。通过主成分分析(PCA)法对裂解产物质谱图进行统计分析,得到不同部位烟丝化学成分的差异。其中,m/z 58、96、110组分为下部烟(X2F)热解的标志性产物,m/z 43、126组分为中部烟(C3F)的代表性产物,上部烟(B2F)的主要代表性产物为m/z 84组分。结果表明,光电离质谱技术是一种研究烟草热解产物动态变化的重要手段,可通过评估裂解产物中主要成分及相对含量快速区分不同部位烟草样品。

关键词：光电离质谱烟草热裂解实时研究动态变化主成分分析(PCA)

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饮用水中微量物质分析研究

饮用水中微量物质分析研究

作者：葛少林郑州大学

学位级别：硕士

水对于一切生命的重要意义是不言而喻的，我国又是一个水资源相对贫乏的地区，则水源水的保护工作就显得格外重要。水是一切生命的源泉，人类每时每刻都离不了水，生活饮用水的卫生就愈显重要，在物质精神需求不断提高的今天，越来越多... 详细信息

水对于一切生命的重要意义是不言而喻的，我国又是一个水资源相对贫乏的地区，则水源水的保护工作就显得格外重要。水是一切生命的源泉，人类每时每刻都离不了水，生活饮用水的卫生就愈显重要，在物质精神需求不断提高的今天，越来越多的人们开始关注饮水卫生。我国有关部门也在致力于这一关乎国计民生的事业。应该说我们的监督制约机制还是比较有效的，就目前的城市生活饮用水的现状而言，还是令人满意的。但随着时代的进步和我国加入WTO，我们面临着发展和与国际接轨的问题，所以我们现行生活饮用水分析检验方法亟待理一步改进和完善，以适应时代的要求。由此，作者做了一些工作，目的就是使得检验分析更加灵敏、准确、快速方便、减少污染。本论文主要内容包括以下几个方面。 1、利用三氯甲烷、四氯化碳在水中的弱溶解性，采用静止顶空气相色谱，法，用OV—101色谱柱进行其微量及痕量分析。在确定了适宜的色谱分析条件及静止顶空的温度、时间、液相及气相体积之后，通过实验得到三氯甲烷在0.00μg／L—20.O／μg／L浓度范围、四氯化碳在0.00μg／L—1.00μg／L浓度范围内呈良好线性关系，其r值分别为0.9998和0.9996，而三氯甲烷的最小检出浓度为0.19μg／L、四氯化碳的最小检出浓度为0.01μg／L，完全达到实验研究的目的。该方法具有快速、简便、灵敏度高、于扰少、无二次污染等优点。用此法进行矿泉水、井水、纯净水、水源水中三氯甲烷、四氯化碳的测定，结果满意，回收率在95％—110％之间。 2、利用离子色谱法同时测定水样小的阴离子氟、氯、溴、硝酸根和硫酸根，以及阳离子锂、钠、钾、铵、镁和钙。阴离子以NaCO-NaHCO作淋洗液，自动再生;阳离子以盐酸作淋洗液，再生液为四甲基氢氧化铵。测定方法的相关性好(r＞0.9990)、线性范围广，精密度高，相对标准偏差小于3.5％，准确度较好，相对误差小于3.4％，检出限高，可低至0.000023mg／L。对各种水样进行了测定，离子含量悬殊亦可同时测定，结果较理想。同时对各种可能的干扰因素进行了研究，确保测定结果的准确性。 3、本章对生活饮用水中低含量(＜1.5mg／L)铁的火焰原子吸收法测定，作了研究探讨，提出了水样先经盐酸——盐酸羟胺煮沸处理定容后，再进行直接测定的方法。本法与国标GP5750—85中邻菲绕琳分光光度法比较，大量水样的测定结果与之吻合，并大大高于加钙释放剂的火焰原子吸收法。通过对井水、自来水进行加标回收试验证实，铁含量在0.22—1.54mg／L时，回收率在90％—109％之间。本操作方法标准曲线线性范围0—1.5mg／L;同一样品多次测定相对标准差＜5％;测定限为0.05mg／L。本法快速、准确、灵敏度高，重现性好，适合生活饮用水中批量样品的测定。

关键词：弱溶解性痕量分析离子色谱法火焰原子吸收法

不同来源的谷胱甘肽合成酶对重组毕赤酵母合成谷胱甘肽的影响研究

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不同来源的谷胱甘肽合成酶对重组毕赤酵母合成谷胱甘肽的影响研究

作者：葛少林中国科学技术大学

学位级别：硕士

谷胱甘肽,γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸（γ-L -glutamyl-L-cysteinyl-gly- cine,GSH）,广泛存在于真核生物、革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌中,具有重要的生理功能和应用前景。微生物发酵法是目前谷胱甘肽生产的主要方法之一,它具... 详细信息

谷胱甘肽,γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸（γ-L -glutamyl-L-cysteinyl-gly- cine,GSH）,广泛存在于真核生物、革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌中,具有重要的生理功能和应用前景。微生物发酵法是目前谷胱甘肽生产的主要方法之一,它具有生产成本低,步骤简单、无需外源添加ATP等优点。发酵法所用菌株主要是经诱变育种得到各种酵母菌,包括酿酒酵母、产朊假丝酵母等。近几年,重组毕赤酵母开始应用于谷胱甘肽合成,由于该酵母遗传操作简便、极易在廉价培养基上实现高密度培养,因此已初步显示出其在谷胱甘肽生产上的应用价值与前景。用于谷胱甘肽生产的重组毕赤酵母菌株,是通过在毕赤酵母宿主中过表达催化谷胱甘肽合成酶的基因构建而成,而选择理想的（如催化效率高、无产物抑制等）谷胱甘肽合成酶进行过表达,也是提高毕赤酵母生产谷胱甘肽产率的先决条件。为得到相对理想的谷胱甘肽合成酶,最为简单实用的方法之一是在毕赤酵母中尝试表达各种微生物来源的谷胱甘肽合成酶基因,考察这些合成酶对于毕赤酵母生产谷胱甘肽的影响。之前的研究只报道过在毕赤酵母中表达来源于酿酒酵母模式菌株S288c的L-谷氨酰-L-半胱氨酸合成酶（γ-GCS）和谷胱甘肽合成酶（GS）基因。本论文考察了六种菌株来源的谷胱甘肽合成酶基因,研究了它们对毕赤酵母生产谷胱甘肽的影响。特别的,首次评估了革兰氏阳性菌来源的双功能谷胱甘肽合成酶基因（gshF）在毕赤酵母转化法生产谷胱甘肽中的应用潜力。具体研究内容包括: 首先,考察了酿酒酵母模式菌S288c,安琪酵母工业菌株和产朊假丝酵母来源的γ-GCS基因gsh1的过表达对于谷胱甘肽产量的影响。通过将上述酵母的gsh1基因和酿酒酵母来源的GS的基因gsh2分别克隆并插入到毕赤酵母GS115基因组内进行表达。不加三种前体氨基酸摇瓶发酵结果发现它们的重组子合成的GSH分别是出发菌的2.2倍、4.3倍和4.4倍,加入三种前体氨基酸后,对照组及重组子合成GSH的稳定产量分别是116 mg/L、256 mg/L、426 mg/L和438 mg/L。结果表明来源于模式菌S288c和产朊假丝酵母的γ-GCS基因对谷胱甘肽合成的催化效率更高。其次,考察了来源于革兰氏阳性菌Listeria monocytogene、Lactobacillus plantarum和Streptococcus agalactia的双功能谷胱甘肽合成酶基因（gshF）对于毕赤酵母产谷胱甘肽的影响。将L. monocytogenes、L. plantarum和S. agalactiae来源的gshF分别克隆并插入到毕赤酵母GS115基因组内,得到三株重组菌株GS115/Lm-gshF GS115/Sa-gshF和GS115/ Lp-gshF。摇瓶发酵结果发现只有含L. monocytogene gshF基因的重组子GS115/Lmg-shF合成的GSH是出发菌的2.8倍,GS115/SagshF、GS115/ LpgshF两重组子合成的GSH与出发菌相比没有区别,在添加三种前体氨基酸的情况下,GS115/Lm-gshF合成GSH的最高产量达到336 mg/L,表明L. monocytogenes来源的gshF在毕赤酵母转化法生产谷胱甘肽上具有较好的应用潜力。

关键词：谷胱甘肽谷氨酰-半胱氨酸合成酶谷胱甘肽合成酶双功能谷胱甘肽合成酶重组毕赤酵母

改革创新提升思想政治理论课教学实效的四重逻辑——以电影《我要当老师》为例

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中国高等教育 2024年第8期 39-41页

作者：王少林宁夏回族自治区教育工委

电影《我要当老师》以微见著,以优秀思政影片这种喜闻乐见的载体,增强了思政课的吸引力和针对性。以此反观,提升思政课教学实效性,需要走近学生日常生活世界,坚持主导性和主体性相统一,提升教师的思政理论素养,重视思政课教学的整体性... 详细信息

电影《我要当老师》以微见著,以优秀思政影片这种喜闻乐见的载体,增强了思政课的吸引力和针对性。以此反观,提升思政课教学实效性,需要走近学生日常生活世界,坚持主导性和主体性相统一,提升教师的思政理论素养,重视思政课教学的整体性及要素的关联性、耦合性和协同性。

关键词：思政课教学改革创新《我要当老师》

增生性瘢痕差异表达基因及小分子药物预测的生物信息学分析与验证

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中国组织工程研究 2024年第14期28卷 2166-2172页

作者：左俊马少林新疆医科大学第一附属医院整形科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830000

背景:增生性瘢痕是以成纤维细胞过度增殖、表皮增厚和角质层功能不良为特征的皮肤纤维化疾病,目前其具体发病机制仍不清楚。目的:基于生物信息学筛选增生性瘢痕相关数据集的核心(Hub)基因及重要信号通路,再用细胞实验加以验证,预测对其... 详细信息

背景:增生性瘢痕是以成纤维细胞过度增殖、表皮增厚和角质层功能不良为特征的皮肤纤维化疾病,目前其具体发病机制仍不清楚。目的:基于生物信息学筛选增生性瘢痕相关数据集的核心(Hub)基因及重要信号通路,再用细胞实验加以验证,预测对其可能有治疗作用的小分子药物。方法:从基因表达综合数据库搜索增生性瘢痕相关的数据集,通过R软件筛选差异表达基因,对差异表达基因进行基因本体论和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Gnomes,KEGG)富集分析,使用String在线平台构建差异表达基因的蛋白质相互作用网络,然后分别利用Cytoscape软件中的Cytohubba和MCODE插件筛选出蛋白质相互作用网络中的关键基因和核心模块,进一步将上述关键基因和构成核心模块的基因求交集得到Hub基因,通过荧光定量PCR验证Hub基因mRNA在人增生性瘢痕与正常皮肤表皮干细胞中的表达差异,并利用人类蛋白图谱中组织学数据验证Hub基因编码蛋白在2种组织中表达量和分布的差异,最后用connectivity map数据库预测针对增生性瘢痕的潜在作用药物。结果与结论:①筛选出的差异表达基因中上调基因102个、下调基因702个,基因本体论和KEGG分析结果显示,富集的信号通路及生物学过程主要涉及紧密连接、花生四烯酸代谢、细胞外基质受体交互、表皮发育和角质化等;②取交集得到8个Hub基因与调控胆固醇代谢的甲羟戊酸途径密切相关,分别是HMGCS1、DHCR7、MSMO1、FDPS、MVK、HMGCR、MVD和ACAT2;③荧光定量PCR结果显示,相比正常皮肤组,增生性瘢痕组HMGCS1、DHCR7、MSMO1、FDPS、HMGCR、MVD和ACAT2 mRNA的表达均显著下降(P0.05);④除MVK外,其余Hub基因编码蛋白在正常皮肤组织中表达水平均高于增生性瘢痕组织(P<0.05);⑤评分排列前10的候选药物包括蛋白激酶A抑制剂(H-89)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(Dabigatran-Etexilate)、FLT3抑制剂(舒尼替尼)等,其中白藜芦醇和β-谷甾醇均为植物来源;⑥提示与甲羟戊酸代谢途径密切相关的Hub基因可能通过调控脂质代谢影响表皮结构与功能,这可能是增生性瘢痕的重要发病机制之一,此次研究筛选的小分子化合物可作为治疗增生性瘢痕的候选药物。

关键词：增生性瘢痕生物信息学成纤维细胞表皮干细胞角质化脂质代谢甲羟戊酸代谢途径药物预测

对比超声-辅助逆王水提取法和王水-微波消解法对PM2.5中24种金属元素的提取效果

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中国卫生检验杂志 2022年第7期32卷 769-774页

作者：葛少林雷丽丹明佳佳郑州市疾病预防控制中心河南郑州450000 西南大学地理科学学院重庆400715

目的将超声-辅助逆王水提取法对PM2.5消解效果与国家标准HJ 657—2013对比,以验证超声-辅助逆王水提取法可以作为快速、准确提取PM2.5中24种金属元素的一种前处理方法,同时探究稀土元素(REEs)的提取率。方法采用随机的100个实际样品,等... 详细信息

目的将超声-辅助逆王水提取法对PM2.5消解效果与国家标准HJ 657—2013对比,以验证超声-辅助逆王水提取法可以作为快速、准确提取PM2.5中24种金属元素的一种前处理方法,同时探究稀土元素(REEs)的提取率。方法采用随机的100个实际样品,等量的PM2.5膜分别采用超声-辅助逆王水提取法和国家标准HJ 657—2013前处理法制备消解液,利用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)对消解液中24种金属元素进行测定,测定结果使用Spearman模型做相关性分析。结果该方法测定值与国家标准HJ 657—2013测定结果相关性显著(P<0.05),除稀土元素外其他元素的相关性系数(r_(p))均在0.8以上。通过引入与PM2.5基体相似的5种参考物质校准系数后,稀土元素相关性系数(r_(p))均在0.9以上。结论与国家标准对比,超声辅助-逆王水提取法对PM2.5中24种金属元素提取效果明显,提高了实验时效性、准确性,为PM2.5样品中24种金属元素测定提供了快速、简便的前处理方法。

关键词： PM2.5 金属元素样品前处理超声-辅助逆王水提取法

重症监护病房抗凝新视角——凝血因子Ⅻ和Ⅺ抑制剂的基础与临床新进展

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中华危重病急救医学 2024年第1期36卷 16-22页

作者：王睿华杨智蕴马少林朱峰同济大学附属东方医院重症医学科上海200120

抗凝药物是血栓性疾病的治疗方法之一,但现有抗凝方案的出血风险是危及患者预后的重要因素之一。在重症监护病房(ICU)中,患者通常需要器官支持,因此不可避免地会在血管中置入人工材料,进而需要抗凝治疗,以免发生血栓,使器官支持无法进行... 详细信息

抗凝药物是血栓性疾病的治疗方法之一,但现有抗凝方案的出血风险是危及患者预后的重要因素之一。在重症监护病房(ICU)中,患者通常需要器官支持,因此不可避免地会在血管中置入人工材料,进而需要抗凝治疗,以免发生血栓,使器官支持无法进行,但这类患者往往出血风险更大。1953年发现的丙型血友病是一种先天性凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺乏症,将人们的视角聚焦于内源性凝血途径,即接触途径。当人工材料表面与FⅫ接触后,FⅫ被激活,继而激活FⅪ,开启接触途径的"凝血瀑布反应"。目前已知的接触途径抑制剂主要包括FⅫ抑制剂与FⅪ抑制剂两类药物,可以阻断这一过程。本文针对FⅫ与FⅪ在接触途径激活中的作用进行综述,旨在阐明其在血栓形成中所扮演的角色;并通过列举研发相对成熟的药物及其适应证,使临床医生熟悉这一新型抗凝药物。

关键词：抗凝治疗内源性凝血系统接触途径抑制剂凝血因子Ⅺ

β-谷甾醇对增生性瘢痕成纤维细胞作用机制的网络药理学分析

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中国组织工程研究 2024年第2期28卷 216-223页

作者：左俊马少林新疆医科大学第一附属医院整形科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830000

背景:目前针对增生性瘢痕有效的预防和治疗措施仍然有限。而大多数植物中草药不良反应小且来源丰富,为预防和治疗增生性瘢痕提供了新的思路和方法。目的:通过网络药理学和分子对接技术探讨植物来源β-谷甾醇作用于增生性瘢痕成纤维细胞... 详细信息

背景:目前针对增生性瘢痕有效的预防和治疗措施仍然有限。而大多数植物中草药不良反应小且来源丰富,为预防和治疗增生性瘢痕提供了新的思路和方法。目的:通过网络药理学和分子对接技术探讨植物来源β-谷甾醇作用于增生性瘢痕成纤维细胞的潜在分子机制,并通过细胞学实验进行初步验证。方法:通过网络药理学方法,利用相关数据库及软件筛选β-谷甾醇的药物靶点,获取增生性瘢痕相关疾病靶点,取交集得到β-谷甾醇作用于增生性瘢痕的潜在作用(交集)靶点,使用Cytoscape软件和STRING数据库构建“药物-靶点-疾病”网络和蛋白质互作网络(PPI),同时筛选出PPI中核心作用靶点。通过DAVID数据库对交集靶点进行GO生物学功能和KEGG通路富集分析,结合文献分析进一步确立与交集靶点关系密切的信号通路及核心靶点基因,应用AutoDock软件对β-谷甾醇和核心靶点蛋白进行分子对接。采用体外细胞实验验证β-谷甾醇对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡、细胞周期分布和核心靶点基因mRNA表达的影响。结果与结论:①β-谷甾醇和增生性瘢痕的交集靶点共56个,PPI网络中筛选出10个核心靶点:酪氨酸激酶(SRC)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)、载脂蛋白E(APOE)、雌激素受体1(ESR1)、固醇调节元件结合转录因子1(SREBF1)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、C-反应蛋白(CRP)、细胞间黏附分子1(ICAM1)和过氧化氢酶(CAT)。②结合文献报道和KEGG通路、GO功能分析结果,进一步认定MAPK信号通路与交集靶点关系密切,确定MAPK3(即为ERK1-MAPK)、CASP3、P53和肿瘤坏死因子为其核心靶点。③分子对接结果提示β-谷甾醇与核心靶点蛋白结合良好。④细胞实验结果表明,100μmol/L的β-谷甾醇能抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,降低线粒体膜电位、诱导细胞凋亡(P<0.01),使G1期细胞占比增加,S期细胞占比减少(P<0.05),同时上调CASP3、P53和肿瘤坏死因子mRNA表达(P<0.05),并下调MAPK3 mRNA表达(P<0.001)。⑤上述数据证实,β-谷甾醇可能通过激活肿瘤坏死因子通路,上调CASP3和P53的表达,诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡,同时抑制ERK-MAPK通路使细胞周期阻滞从而降低增生性瘢痕成纤维细胞增殖活性。

关键词：增生性瘢痕成纤维细胞 β-谷甾醇细胞凋亡 MAPK3(ERK1-MAPK) 肿瘤坏死因子 CASP3 P53 网络药理学细胞周期