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黑羽番鸭AMH基因功能验证及多态性研究

黑羽番鸭AMH基因功能验证及多态性研究

作者：葛丽岩西北农林科技大学

学位级别：硕士

抗苗勒氏管激素（Anti-Mullerian hormone,AMH）是由雄性睾丸支持细胞和雌性卵巢颗粒细胞分泌的一种仅在性腺中表达的糖蛋白,是TGFβ超家族（Transforming growth factor beta superfamily,TGFβ超家族）配体成员。在雌性动物中,AMH由... 详细信息

抗苗勒氏管激素（Anti-Mullerian hormone,AMH）是由雄性睾丸支持细胞和雌性卵巢颗粒细胞分泌的一种仅在性腺中表达的糖蛋白,是TGFβ超家族（Transforming growth factor beta superfamily,TGFβ超家族）配体成员。在雌性动物中,AMH由卵巢颗粒细胞分泌,作用原始卵泡,防止卵巢储备过早耗尽。AMH基因在哺乳动物中研究较多,在家禽方向研究甚少。本研究通过构建黑羽番鸭AMH基因的真核表达载体,并将其转染到番鸭卵巢颗粒细胞中进行功能验证,对AMH基因的单核苷酸多态性与产蛋量和体重数据进行关联分析,结果如下:1.首先为了探究AMH在番鸭卵巢中的表达规律,本研究通过q RT-PCR（Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR）的方法检测高低产番鸭卵巢中和不同等级卵泡中AMH及其受体AMHR2（Anti-Mullerian hormone receptor type 2,AMHR2）的表达情况。研究发现AMH/AMHR2在低产番鸭卵巢中表达显著高于高产番鸭。随着卵泡的发育,AMH表达量逐渐降低,AMH在大白卵泡中表达量最高,在等级卵泡中时AMH表达量降到最低水平。初步得出结论AMH在卵泡发育过程中起抑制作用。2.本试验成功克隆了黑羽番鸭AMH基因的CDS区序列,长度为1833 bp,编码610个氨基酸,是分泌蛋白,有三种二级结构,存在信号肽。构建了真核过表达载体,为深入研究AMH对番鸭颗粒细胞的作用奠定了基础。3.为了验证AMH在番鸭卵巢颗粒细胞中的功能,本试验用AMH过表达载体转染番鸭颗粒细胞。通过荧光定量方法检测AMH及其相关基因的表达情况,结果表明,AMH处理组与对照组相比,AMH的受体AMHR2、ALK2、ALK3、ALK6表达量显著增高,FSHR的表达量无显著差异,由此证明AMH可通过AMHR2、ALK2、ALK3、ALK6受体在颗粒细胞中发挥作用。凋亡相关基因Caspase-3,c-Myc和Bcl-2的表达无显著差异,增殖相关基因CDK2和PCNA的表达量在AMH处理组低于空白对照组,结果表明AMH抑制颗粒细胞增殖。4.为研究黑羽番鸭AMH基因的单核苷酸多态性与产蛋及体重性状之间的关系,本试验随机采取186只笼养黑羽番鸭,采用限制性内切酶（PCR-RLFP）的方法进行AMH基因SNPs筛选,并与产蛋和体重性状进行相关性分析。最终筛选了三个位点g.1731G＞A、g.2044T＞C、g.3531C＞T,其中g.1731G＞A的AG为优势基因型,相关性分析结果表明,g.1731G＞A突变位点中AG基因型产蛋数显著高于AA型（P＜0.05）,g.1731G＞A与体重不显著相关（P＞0.05）;g.2044T＞C的CC为优势基因型,CC基因型的产蛋数显著高于TT型和TC型（P＜0.05）,CC基因型的体重显著高于TT型（P＜0.05）;g.3531C＞T与产蛋数和体重不相关（P＞0.05）。综上可知,本研究AMH基因的单核苷酸多态性对产蛋有影响,g.1731G＞A和g.2044T＞C可以为培育优良番鸭品种提供可参考的遗传标记。综上所述,本试验研究了AMH在高低产番鸭中的表达规律和不同等级卵泡中的表达规律;克隆黑羽番鸭AMH基因,成功构建AMH过表达载体。在细胞水平上对AMH进行功能验证,对AMH基因的多态性与生产性能进行关联分析。本研究揭示了AMH在番鸭颗粒细胞中的作用,为进一步研究提供理论基础,为培育优质番鸭品种,提供可参考的遗传标记。

关键词： AMH基因黑羽番鸭卵巢颗粒细胞 SNP 关联分析

西农萨能奶山羊ATF4基因克隆及其功能初步研究

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畜牧兽医学报 2023年第6期54卷 2353-2364页

作者：邵钺馨张新钰葛丽岩史怀平西北农林科技大学动物科技学院陕西省农业分子生物学重点实验室杨凌712100

转录激活子4(activating transcription factor 4,ATF4)是ATF/cAMP应答元件结合蛋白,在反刍动物的生长发育起着关键作用。本研究旨在分析西农萨能奶山羊ATF4基因序列结构,通过siRNA技术干扰ATF4基因表达,初步探究其对奶山羊乳腺上皮细... 详细信息

转录激活子4(activating transcription factor 4,ATF4)是ATF/cAMP应答元件结合蛋白,在反刍动物的生长发育起着关键作用。本研究旨在分析西农萨能奶山羊ATF4基因序列结构,通过siRNA技术干扰ATF4基因表达,初步探究其对奶山羊乳腺上皮细胞脂质代谢和乳蛋白合成的影响。为明确ATF4在西农萨能奶山羊不同组织的表达差异,采集西农萨能奶山羊不同泌乳时期乳腺组织,克隆得到ATF4基因的CDS区并进行生物信息学分析及组织表达谱分析。结果表明,克隆得到奶山羊ATF4基因CDS区,全长为1059 bp,其编码352个氨基酸,蛋白分子量为38.54524 ku,理论等电点为4.61,有35个丝氨酸磷酸化位点,为无跨膜结构的酸性蛋白质;西农萨能奶山羊ATF4蛋白的二级结构中α-螺旋、延伸链、无规则卷曲、β-转角分别为39.77%、7.10%、51.14%和1.99%;ATF4与CEBPB、CEBPG、ATF3、FOSL2、ATF1、DDIT3、TRIB3、BTRC、CREB1、DISC 10个蛋白存在相互作用,与绵羊和牛的亲缘关系最近,同源性分别为97.45%和91.48%。组织表达谱分析结果表明,ATF4基因的表达量在瘤胃组织中最高,其次为肌肉。ATF4基因在泌乳前期表达水平最高,在泌乳盛期次之。干扰奶山羊乳腺上皮细胞ATF4基因表达,显著下调FASN、FABP3和BLG基因mRNA水平,上调PPARA、PPARG和LALBA基因mRNA水平。上述结果提示,ATF4基因可能参与奶山羊乳腺上皮细胞脂质代谢和乳蛋白合成过程。本研究为ATF4调控羊奶乳脂代谢和乳蛋白合成的分子机理提供了理论基础。

关键词： ATF4 基因克隆乳脂代谢乳蛋白西农萨能奶山羊

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黑羽番鸭肌肉TNNI2基因的克隆及生物信息学分析

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中国家禽 2022年第10期44卷 8-13页

作者：葛丽岩胡志刚张慧林刘小林西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

为研究黑羽番鸭快骨骼肌亚型肌钙蛋白I2(Troponin I2,fast skeletal type,TNNI2)基因的CDS区序列特征,试验以30胚龄黑羽番鸭的胸肌和腿肌为材料,提取RNA反转录得到cDNA,利用PCR技术扩增黑羽番鸭TNNI2基因的编码区序列,运用生物信息学工... 详细信息

为研究黑羽番鸭快骨骼肌亚型肌钙蛋白I2(Troponin I2,fast skeletal type,TNNI2)基因的CDS区序列特征,试验以30胚龄黑羽番鸭的胸肌和腿肌为材料,提取RNA反转录得到cDNA,利用PCR技术扩增黑羽番鸭TNNI2基因的编码区序列,运用生物信息学工具分析TNNI2蛋白质的理化性质及结构。结果显示:TNNI2基因编码区长552 bp,共编码183个氨基酸,该蛋白分子式为C_(908)H_(1520)N_(274)O_(281)_S_(11),不存在信号肽,是定位于核的亲水性不稳定蛋白;TNNI2基因编码的氨基酸序列与绿头鸭、凤头潜鸭、棕硬尾鸭、鸡、人、猪、牛、马、家鼠、斑马鱼等10个物种的氨基酸序列相似性分别为99%、99%、99%、97%、82%、82%、81%、81%、81%、65%;系统进化分析发现,黑羽番鸭与绿头鸭的遗传距离最近,与斑马鱼遗传距离最远。研究获得黑羽番鸭TNNI2基因编码区,片段长度为552 bp,预测TNNI2蛋白分子量为2.11 ku,结果为进一步探索TNNI2基因对黑羽番鸭生长性状的分子机制奠定理论基础。

关键词：黑羽番鸭 TNNI2 克隆生物信息学

黑羽番鸭AMH基因多态性与产蛋及体重性状的关联分析

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中国畜牧杂志 2021年第6期57卷 106-111页

作者：葛丽岩胡志刚张慧林陈强刘小林西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 陕西省潼关安大番鸭育种场陕西潼关714300

为研究黑羽番鸭AMH基因的单核苷酸多态性与产蛋及体重性状之间的关系,本实验随机采取186只笼养黑羽番鸭,采用限制性内切酶(PCR-RLFP)方法进行AMH基因SNP筛选,并与产蛋和体重性状进行相关性分析。结果显示:筛选出g.1731G>A、g.2044T>C、g... 详细信息

为研究黑羽番鸭AMH基因的单核苷酸多态性与产蛋及体重性状之间的关系,本实验随机采取186只笼养黑羽番鸭,采用限制性内切酶(PCR-RLFP)方法进行AMH基因SNP筛选,并与产蛋和体重性状进行相关性分析。结果显示:筛选出g.1731G>A、g.2044T>C、g.3531C>T 3个位点,其中g.1731G>A的AG为优势基因型,相关性分析结果表明,g.1731G>A突变位点中AG基因型的产蛋数显著高于AA型,g.1731G>A与体重无显著相关;g.2044T>C的CC为优势基因型,CC基因型的产蛋数显著高于TT型和TC型,CC基因型的体重显著高于TT型;g.3531C>T与产蛋数和体重不相关(P>0.05)。综上可知,AMH基因存在于产蛋及体重性状相关的单核苷酸多态性位点,本研究为培育优良黑羽番鸭品种提供可参考的遗传标记。

关键词：黑羽番鸭 AMH基因 SNP 产蛋体重

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黑羽番鸭产蛋性能的曲线拟合分析

家畜生态学报 2020年第4期41卷 28-32页

作者：刘菁葛丽岩胡志刚陈强郭顺刘小林西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 陕西安大农业发展有限公司陕西潼关714300 潼关县农业农村局陕西潼关714300

利用Wood、McMillan和Yang-Ning模型以及Logistic、Gompertz和Von Bertalanffy模型分别拟合26~48周龄的1245只黑羽番鸭的产蛋率和累计产蛋数曲线,计算每个模型的拟合优度R^2,并分析比较观测值和各模型预测值。结果表明:3种产蛋率曲线模... 详细信息

利用Wood、McMillan和Yang-Ning模型以及Logistic、Gompertz和Von Bertalanffy模型分别拟合26~48周龄的1245只黑羽番鸭的产蛋率和累计产蛋数曲线,计算每个模型的拟合优度R^2,并分析比较观测值和各模型预测值。结果表明:3种产蛋率曲线模型拟合优度都在0.900以上,Yang-Ning模型拟合效果最优,R^2=0.938,McMillan模型和Wood模型,R^2分别为0.924和0.910;3种累计产蛋数曲线模型拟合优度均高于0.990,Von Bertalanffy模型R^2高达0.999,效果最佳,Gompertz模型(R^2=0.998)和Logistic模型(R^2=0.991)次之。因此,用于拟合黑羽番鸭产蛋率和累计产蛋数曲线的最佳模型是Yang-Ning模型和Von Bertalanffy模型,两者均可预测和评估黑羽番鸭的产蛋率和累计产蛋数等产蛋规律,进而提高其产蛋性能,有益于黑羽番鸭的综合利用和饲养管理。

关键词：黑羽番鸭产蛋率累计产蛋数曲线拟合

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黑羽番鸭生长曲线拟合分析

中国畜牧杂志 2020年第7期56卷 85-90页

作者：刘菁张慧林黄利华张杉杉葛丽岩陈强郭顺刘小林西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 陕西安大农业发展有限公司陕西渭南714300 潼关县农业农村局陕西渭南714300

为揭示黑羽番鸭的生长发育规律,本实验利用Logistic、Gompertz和Von Bertallanffy模型分别拟合0~26周龄不同性别黑羽番鸭(公鸭100只、母鸭300只)的生长曲线,并计算拟合优度R^2,同时分析比较其观测值和预测值。结果表明:3种模型拟合的公... 详细信息

为揭示黑羽番鸭的生长发育规律,本实验利用Logistic、Gompertz和Von Bertallanffy模型分别拟合0~26周龄不同性别黑羽番鸭(公鸭100只、母鸭300只)的生长曲线,并计算拟合优度R^2,同时分析比较其观测值和预测值。结果表明:3种模型拟合的公、母鸭R^2都在0.970以上;Von Bertallanffy模型拟合效果最优,公、母鸭R^2分别为0.992和0.996;3种模型拟合的公鸭拐点周龄均迟于母鸭,拐点体重均高于母鸭。因此,可根据最佳模型Von Bertalanffy建立黑羽番鸭的标准生长曲线,为其高产、稳产和新品种选育提供理论依据。

关键词：黑羽番鸭体重生长规律生长拐点曲线拟合

内蒙古自治区疾病预防控制机构体系建设和能力分析

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中国公共卫生管理 2024年第3期40卷 351-354页

作者：王玉莹葛丽岩白国辉刘世宇内蒙古自治区疾病预防控制中心/内蒙古自治区预防医学科学院内蒙古呼和浩特010010

目的了解内蒙古自治区疾病预防控制体系建设状况,探讨存在的问题,为提升内蒙古自治区疾病预防控制总体工作水平提供依据。方法由自治区、盟市、旗县(区)疾病预防控制机构填写调查表,调查资料收集后进行数据核查,使用SPSS19.0软件进行统... 详细信息

目的了解内蒙古自治区疾病预防控制体系建设状况,探讨存在的问题,为提升内蒙古自治区疾病预防控制总体工作水平提供依据。方法由自治区、盟市、旗县(区)疾病预防控制机构填写调查表,调查资料收集后进行数据核查,使用SPSS19.0软件进行统计分析,率的比较采用χ^(2)检验。结果各级疾病预防控制人员学历以本科为主,占56.48%;职称以初级为主,占43.90%。各级疾病预防控制机构人员的年龄(χ^(2)=273.84)、职称(χ^(2)=41.23)、学历(χ^(2)=802.81)构成差异均有统计学意义(P<0.05)。各级疾病预防控制机构实验室面积比例呈现自治区、盟市、旗县(区)逐级下降的趋势。不同地区疾病预防控制机构实验室平均检验项目开展数目总体呈现东部强于西部、中部较低的分布趋势。结论内蒙古自治区疾病预防控制机构体系正在不断进步,但相较于发达地区还存在差距。

关键词：内蒙古疾病预防控制机构体系建设能力建设

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奶山羊乳房类型变化及其对泌乳性能的影响

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2024年第1期52卷 16-23页

作者：李恒蕊谢洋洋葛丽岩张潇田博文罗军史怀平李杰胡建红张迎锐西北农林科技大学动物科技学院陕西省动物遗传育种与繁殖重点实验室陕西杨凌712100 千阳县种羊场陕西千阳721100 西安畜牧推广中心陕西西安710061 陕西勉县动物疫病预防控制中心陕西勉县724200

【目的】探究奶山羊不同泌乳时期乳房类型的变化规律及其对泌乳性能的影响。【方法】以99只健康、产奶期相近的初产泌乳西农萨能奶山羊为试验对象,对其5个泌乳时间点(14,70,126,182和211 d)的乳房类型(乳房外形分为方圆形、长条形和宽扁... 详细信息

【目的】探究奶山羊不同泌乳时期乳房类型的变化规律及其对泌乳性能的影响。【方法】以99只健康、产奶期相近的初产泌乳西农萨能奶山羊为试验对象,对其5个泌乳时间点(14,70,126,182和211 d)的乳房类型(乳房外形分为方圆形、长条形和宽扁形,乳房基部分为半球形和柚子形)和日产奶量进行记录,同时采集乳样对乳成分(脂肪率、蛋白率、乳糖率、总固体和非脂率)和体细胞数进行检测,并利用SPSS软件对试数据进行分析。【结果】随着泌乳时间的增加,方圆-半球型(Sh)乳房数量占比呈下降趋势,长条-柚子型(Lg)乳房数量占比呈上升趋势;乳房外形由方圆形(S)和宽扁形(W)趋向长条形(L)转变,乳房基部由半球形(h)趋向柚子形(g)转变;5种乳房类型整体趋向长条-柚子型(Lg)乳房变化。泌乳70 d时,方圆-半球型(Sh)乳房和长条-半球型(Lh)乳房的奶山羊产奶量显著高于长条-柚子型(Lg)乳房和宽扁-柚子型(Wg)乳房(P0.05)。【结论】奶山羊的乳房类型随着泌乳时间的推移而发生变化,泌乳70 d时,方圆-半球型(Sh)乳房和长条-半球型(Lh)乳房奶山羊的产奶量高。

关键词：奶山羊乳房类型泌乳性能奶山羊选育

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江苏智慧农业发展现状及对策研究

南方农机 2025年第2期56卷 76-78,107页

作者：葛丽莉江苏省农业信息中心江苏南京210003

智慧农业是农业新质生产力的重要特征。发展智慧农业,不仅顺应农业现代化转型的迫切需求,更是实现农业高质量发展的必由之路。基于此,文章以智慧农业的内涵、基本原理和主要应用场景为出发点,结合江苏面临的思想认识不到位、数据资源整... 详细信息

智慧农业是农业新质生产力的重要特征。发展智慧农业,不仅顺应农业现代化转型的迫切需求,更是实现农业高质量发展的必由之路。基于此,文章以智慧农业的内涵、基本原理和主要应用场景为出发点,结合江苏面临的思想认识不到位、数据资源整合低效、技术瓶颈和人才短缺等问题现状,总结了国内外智慧农业发展经验,提出了加大政策支持力度、深化思想认识、创建数字化队伍、加强创新驱动、推进信息共享等发展思路和对策。研究结果表明,发展智慧农业是助力江苏加快建设农业强省的重要举措,对促进农民增收、加快农业产业升级、驱动农业产业链延伸有着深远的影响。

关键词：智慧农业数字技术农业信息化