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第十三届全国体育科学大会

作者：徐磊贾杰苗舒丹张缨北京体育大学

研究目的:骨骼肌作为机体最大的组织器官,其可摄取餐后约80%的血糖,故其在维持机体血糖稳态中起着至关重要的作用。然而,长期高脂饮食会引起骨骼肌葡萄糖转运效率的低下,进而诱发胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)及相关并发症,其机制... 详细信息

研究目的:骨骼肌作为机体最大的组织器官,其可摄取餐后约80%的血糖,故其在维持机体血糖稳态中起着至关重要的作用。然而,长期高脂饮食会引起骨骼肌葡萄糖转运效率的低下,进而诱发胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)及相关并发症,其机制主要涉及兰德尔循环、肌内脂质代谢物的积累、氧化应激及线粒体功能受损等。有氧运动则可通过提高骨骼肌的葡萄糖转运效率,进而预防或缓解IR的发生发展。CHRONO/BMAL1作为生物钟的核心组件,是调控骨骼肌生物节律的关键通路,其中CHRONO能与BMAL1结合并抑制其转录活性。而BMAL1能与葡萄糖转运蛋白4(Glucose transporter 4,GLUT4)基因启动子上的E-box区域结合,从而激活其转录,故CHRONO/BMAL1通路可能也调控着骨骼肌的葡萄糖转运。然而,高脂饮食及有氧运动对骨骼肌CHRONO/BMAL1通路及葡萄糖转运的影响还不清楚。因此,本研究的目的是探讨12周有氧运动对高脂饲养小鼠骨骼肌CHRONO/BMAL1通路和葡萄糖转运的影响,以期为运动促进健康的相关研究提供一定的理论依据。研究方法:40只5周龄雄性C57BL/6J野生鼠,随机分为正常饮食安静组、正常饮食运动组、高脂饮食安静组和高脂饮食运动组,每组各10只。首先将小鼠适应性饲养1周,且在此期间进行为期3天的适应性跑台训练(坡度:5度,跑速:10 m/min)。随后,正常饮食组选用的是10%脂肪供能的正常饲料,高脂饮食组选用的是60%脂肪供能的高脂饲料,饮食干预周期为12周,且记录每周各组小鼠体重及摄食量。安静组置于饲养笼中,而运动组置于坡度为5度的跑台上进行约70%最大摄氧量(VO2max)强度的运动,每天1小时,每周5次,并在第4周进行一次最大摄氧量测试来调整跑速,运动干预周期也为12周(与饮食干预同时进行)。干预结束后分别进行糖耐量(glucose tolerance test,GTT)和胰岛素耐量(insulin tolerance test,ITT)测试,休息48小时且在禁食12小时后麻醉取血清,并迅速取小鼠脂肪及腿部骨骼肌称重并编号,而后投入液氮,随后转入-80℃冰箱保存。试剂盒检测血清四项及禁食血清胰岛素含量;免疫共沉淀检测骨骼肌CHRONO与BMAL1的结合量;Western Blot检测骨骼肌CHRONO、BMAL1、p-AKTSer473、AKT、p-TBC1D1Ser237、TBC1D1、GLUT4的蛋白表达。所有实验数据采用SPSS 20.0软件进行数据的统计处理,结果用平均数±标准误表示。使用双因素方差分析处理数据。P <0.05和P <0.01表示在统计学上有意义,其中P <0.05表示有显著性差异,P <0.01表示有非常显著性差异。研究结果:(1)4组的初始体重处于同一水平,其中高脂饮食安静组从第1周结束到第12周结束的每周体重都显著高于正常饮食安静组,而高脂饮食运动组从第1周结束到第12周结束的每周体重都显著低于高脂饮食安静组,且能量摄入也表现出相同的趋势。12周干预结束后,高脂饮食安静组腹股沟白色脂肪、睾周白色脂肪和棕色脂肪重量显著高于正常饮食安静组;而经12周有氧运动后,高脂饮食运动组腹股沟白色脂肪、睾周白色脂肪和棕色脂肪重量显著低于高脂饮食安静组。此外,高脂饮食安静组的TG、TC和LDL水平显著高于正常饮食安静组,HDL则显著低于正常饮食安静组;而经12周有氧运动后,高脂饮食运动组TG、TC和LDL水平显著低于高脂饮食安静组,HDL则显著高于高脂饮食安静组。(2)高脂饮食安静组的禁食血清葡萄糖水平、血清胰岛素水平和胰岛素抵抗指数显著高于正常饮食安静组;而经12周有氧运动后,高脂饮食运动组的禁食血清葡萄糖水平、血清胰岛素水平和胰岛素抵抗指数显著低于高脂饮食安静组。且在糖耐量和胰岛素耐量的测试中,高脂饮食安静组小鼠糖耐量和胰岛素耐量的曲线下面积均显著高于正常饮食安静组;而经过12周有氧运动后,高脂饮食运动组小鼠糖耐量和胰岛素耐量的曲线下面积均显著低于高脂饮食安静组。(3)虽然骨骼肌内CHRONO的蛋白表达在4组之间不存在差异性变化,但高脂饮食安静组的BMAL1蛋白表达显著低于正常饮食安静组;而经过12周有氧运动后,高脂饮食运动组的BMAL1蛋白表达显著高于高脂饮食安静组。且CO-IP结果显示,高脂饮食安静组的CHRONO与BMAL1蛋白结合量显著高于正常饮食安静组;而经过12周有氧运动干预后,高脂饮食运动组的CHRONO与BMAL1蛋白结合量显著低于高脂饮食安静组。(4)高脂饮食安静组p-AKTSer473/AKT和p-TBC1D1Ser237/TBC1D1的比值以及GLUT4的蛋白表达水平显著低于正常饮食安静组;而经过12周有氧运动后,高脂饮食运动组p-AKTSe

关键词：高脂饮食 CHRONO/BMAL1通路有氧运动骨骼肌葡萄糖转运

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4周择时有氧运动对小鼠骨骼肌BMAL1蛋白表达和抗氧化能力的影响

4周择时有氧运动对小鼠骨骼肌BMAL1蛋白表达和抗氧化能力的影响

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第十三届全国体育科学大会

作者：苗舒丹徐磊张缨北京体育大学运动人体科学学院

研究目的:骨骼肌作为机体重要的运动器官,维持其正常的生理功能至关重要。骨骼肌中过量活性氧(ROS)的产生会促进氧化还原失衡,发生氧化应激,导致肌肉收缩功能障碍,造成肌肉损伤。已有研究表明,人体的氧化应激水平与生物钟密切相关,抗氧... 详细信息

研究目的:骨骼肌作为机体重要的运动器官,维持其正常的生理功能至关重要。骨骼肌中过量活性氧(ROS)的产生会促进氧化还原失衡,发生氧化应激,导致肌肉收缩功能障碍,造成肌肉损伤。已有研究表明,人体的氧化应激水平与生物钟密切相关,抗氧化酶活性可呈现明显的昼夜节律性,在夜晚具有较高的抗氧化能力。骨骼肌众多生理生化功能均表现出周期约为二十四小时的昼夜节律性变化,如骨骼肌的力量、骨骼肌的温度、糖脂代谢、线粒体的融合分裂和线粒体的生物合成等,而这些昼夜节律性变化受到其内源性生物钟所调控。脑和肌肉芳烃受体核易位样蛋白1(Brain and muscle Arnt-like protein 1,BMAL1)作为生物钟的核心分子,可与时钟节律调节因子(Circadian locomotor output cycles kaput,CLOCK)结合形成异源二聚体,进而与其下游生物钟靶基因启动子上的E-box区域结合并促进靶基因转录。新近研究表明,BMAL1不仅参与骨骼肌时钟相关基因的转录调节,还可参与调控核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2-related factor2,NRF2)靶基因的转录。而NRF2分子是调节机体一系列重要抗氧化酶如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)等基因的转录因子,这些抗氧化剂酶可抑制自由基的氧化反应,从而减少氧化损伤。因此,NRF2在维持骨骼肌氧化还原稳态中起着关键作用。已有研究表明,NRF2的基因和蛋白水平可呈现出昼夜节律性的变化,且BMAL1可以直接结合到NRF2启动子的E-box区域,进而促进其转录,所以BMAL1-NRF2是调控骨骼肌抗氧化能力的重要通路。众所周知,科学合理的有氧运动训练,能使骨骼肌抗氧化系统产生良好的适应性变化,提高抗氧化酶活性,使氧化和抗氧化系统之间保持平衡,进而提高抗氧化能力,但由于运动时长、运动强度、运动方式的不同会导致骨骼肌运动适应的差异性变化。近期研究表明,不同时间点的有氧运动对控制体重、降低血糖、改善胰岛素抵抗、改善炎症反应等的影响也不相同。那么不同时间点的择时有氧运动对骨骼肌生物钟核心分子BMAL1及抗氧化蛋白表达和抗氧化能力的影响如何,目前尚不清楚。研究方法:因此,本研究拟采用野生型小鼠作为研究对象,为期四周在每天授时时间(Zeitgeber Time,ZT),即ZT0(7:00AM)和ZT12(19:00 PM)分别进行有氧跑台运动,以探究择时有氧运动对小鼠骨骼肌BMAL1蛋白及抗氧化蛋白表达和抗氧化能力的影响,以期为运动员的训练提供科学指导,及时调整运动员的生理机能,为进一步研究运动影响抗氧化能力提供实验数据和理论依据。研究方法:7周龄健康雄性C57BL/6J小鼠33只购于北京维通利华实验动物技术有限公司。置于12h明暗周期循环(ZT0代表7:00 AM开灯;ZT12代表19:00 PM关灯)的条件下适应性喂养二周,饲养温度20-25℃,相对湿度50%-70%,自由进水和饮食。适应性喂养结束后,随机分为三组,安静对照组(Con),ZT12运动组(ZT12),ZT0运动组(ZT0),每组各11只。安静对照组不进行任何干预,ZT12运动组和ZT0运动组适应性训练(进行三天30分钟的跑台适应训练,跑速为10m/min,坡度5°)后,在各自训练时间点(ZT12和ZT0)开始在避光或透光下进行四周的跑台训练(运动强度为小鼠70%～75%最大摄氧量,起始跑速为15m/min,训练两周后跑速为20m/min,每天60分钟,每周6天,坡度为5°)。干预结束后休息48小时,对小鼠腹腔注射40毫克每千克体重的戊巴比妥钠进行麻醉,脱颈椎处死,迅速取腿部骨骼肌,投入液氮,随后转存-80℃冰箱备用。指标检测采用高质荧光测定试剂盒测定骨骼肌活性氧(ROS)荧光强度;采用T-AOC检测试剂盒测定骨骼肌总抗氧化能力(T-AOC);采用Western blot检测骨骼肌BMAL1蛋白、NRF2蛋白、CAT蛋白、SOD蛋白、血红素加氧酶1(HMOX1)蛋白、醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白、谷氨酸-半胱氨酸连接酶修饰亚基(GCLm)蛋白、谷氨酸-半胱氨酸连接酶重链亚基(GCLc)蛋白、谷胱甘肽还原酶(GR)蛋白的表达。实验数据用SPSS22.0进行统计学分析,结果以平均值±标准误表示。若数据服从正态分布,用单因素方差分析;不服从正态分布,则用非参数检验对数据进行分析。P<0.05和P<0.01代表具有显著性差异和非常显著性差异。研究结果:(1)与安静对照组和ZT0运动组分别相比,ZT12运动组的骨骼肌ROS水平显著降低。(2)与安静对照组相比,ZT12运动组的骨骼肌T-AOC水平显著升高。(3)与安静对照组相比,ZT12运动组的骨骼肌BMAL1蛋白表达增加,且NRF2蛋白、NQO1

关键词：择时有氧运动 BMAL1 NRF2 骨骼肌抗氧化能力

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CHRONO-BMAL1通路对小鼠运动能力及骨骼肌糖和脂代谢相关指标的影响

CHRONO-BMAL1通路对小鼠运动能力及骨骼肌糖和脂代谢相关指标的影...

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第十三届全国体育科学大会

作者：贾杰徐磊苗舒丹张缨北京体育大学

研究目的:有氧运动能力被认为是人类健康的重要生命体征。有氧运动能力低下可明显增加心血管疾病、全因死亡和其他各种慢病风险。同时,有氧运动能力也是运动员运动能力的重要基础,因此,深入探索其分子机制是运动科学领域备受关注的课题... 详细信息

研究目的:有氧运动能力被认为是人类健康的重要生命体征。有氧运动能力低下可明显增加心血管疾病、全因死亡和其他各种慢病风险。同时,有氧运动能力也是运动员运动能力的重要基础,因此,深入探索其分子机制是运动科学领域备受关注的课题。有氧运动能力不仅与心肺、循环系统功能有关,而且与骨骼肌利用氧的能力关系密切。骨骼肌作为机体重要的动力源,其糖、脂氧化供能是运动的主要能量来源,故骨骼肌糖、脂代谢水平也是影响有氧运动能力的重要因素,但其机制仍亟待阐明。骨骼肌糖代谢水平除了受遗传、营养、运动等因素的影响外,也受骨骼肌生物钟的调节。脑和肌肉芳香烃受体转位蛋白样蛋白1(Brain and muscle ARNT-like protein 1,BMAL1)是核心生物钟分子,也是一个重要的转录因子,它可与靶基因启动子上的E-box区域结合,促进后者的转录。BMAL1的靶基因主要与生物节律和能量代谢相关,故其在调控骨骼肌能量代谢方面具有重要的作用。昼夜节律相关的转录抑制因子Chrono(Computationally Highlighted Repressor of Network Oscillator,也称Gm129,Ciart,C1orf51等)是近年新发现的生物钟基因,已有研究表明CHRONO蛋白能够直接与转录因子BMAL1结合,并反馈性地抑制BMAL1的活性。因此,CHRONO蛋白被认为是BMAL1的转录抑制因子,CHRONO-BMAL1通路是调控生物节律的重要通路。那么,CHRONO-BMAL1通路是否也参与骨骼肌中糖、脂代谢的调控,进而影响机体的运动能力?目前的研究并没有得出明确的结论。为了避免Chrono基因过表达在生长发育过程中造成代偿作用,本研究使用他莫昔芬(Tamoxifen)诱导的骨骼肌特异性Chrono过表达小鼠。在其成年后诱导形成骨骼肌特异性Chrono过表达小鼠,探讨CHRONO-BMAL1通路对骨骼肌糖、脂代谢相关mRNA表达以及运动能力的影响,以寻找调控运动能力的分子靶点。研究方法:通过CRISPR-Cas9技术用C57BL/6J小鼠的ES细胞产生了Chronoflox/flox过表达鼠:其在小鼠H11位点敲入了CAG启动的Chrono基因,并在CAG启动子与Chrono基因之间插入了flox标记的终止密码子。通过将Chronoflox/flox小鼠与携带由骨骼肌特异性α-actin(ACTA1)启动子和雌激素受体的配体结合区突变体(ERT2)驱动的Cre重组酶基因(ACAT1-Cre ERT2)小鼠进行繁殖,产生了可诱导的骨骼肌特异性Chrono过表达(iMS-Chrono TG,ims TG)小鼠。随后,采用可诱导的骨骼肌特异性Chrono过表达鼠和Cre工具(ACAT1-Cre ERT2)鼠,在其满8周后分别腹腔注射他莫昔芬,制备为骨骼肌特异性Chrono过表达(ims TG)鼠和对照(Ctrl)鼠。对两种鼠的最大运动能力和运动耐力进行测定。其中,最大运动能力测试方案是参照Brunch等的研究并稍加进行了改良。该方案主要使用逐级递增运动负荷,以反映小鼠糖酵解供能为主的极限状态下的运动能力。具体方案如下:小鼠跑台坡度设定为5度,初始的速度设置为米/分钟,时间持续5分钟;之后每三分钟增加3米/分钟的跑速,小鼠置于跑台上运动直至力竭。运动耐力的测试方案是参照Michel等人的研究。该方案主要在禁食五小时状态下,使用长时间中等强度、低递增负荷的运动方式,以反映糖和脂肪有氧氧化供能为主的状态下的运动能力。具体方案如下:在进行运动耐力测试的当天早上八点移除食物,在下午一点准时开始测试。小鼠跑台设定为坡度设定为10度,初始速度设置为10.2米/分钟,持续30分钟。随后以12.6米/分钟的速度运动15分钟;以15米/分钟的速度运动15分钟;以17.4米/分钟的速度运动15分钟;以19.8米/分钟速度运动15分钟;以22.2米/分钟速度运动直至小鼠力竭。两种测试方案的力竭判断标准均为:小鼠不能维持现有跑速继续运动并且机械刺激和电刺激小鼠十秒以上仍不能继续运动。随后记录运动至力竭的时间,并计算运动距离。小鼠处死后通过Western Blot检测细胞核中CHRONO蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测骨骼肌中Chrono以及糖代谢相关基因:己糖激酶(Hk2)、磷酸果糖激酶(Pfkm)、丙酮酸脱氢酶α亚基1(Phka1)、丙酮酸脱氢酶磷酸酶催化亚基1(Pdp1)和丙酮酸脱氢酶激酶4(Pdk4)的mRNA表达情况和脂代谢相关基因:过氧化物酶体增殖物活化受体α(Pparα)、过氧化物酶体增殖物活化受体δ(Pparδ)、中链酰基辅酶A脱氢酶(Mcad)、短链酰基辅酶A脱氢酶(Scad)、羟酰辅酶A脱氢酶三功能多酶复合物α亚基(Hadhα)、羟酰辅酶A

关键词： CHRONO BMAL1 骨骼肌糖脂代谢运动能力

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鞣酸蛋白酵母散对幼年大鼠腹泻的治疗作用及其机制研究

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药物评价研究 2020年第7期43卷 1245-1249页

作者：陆濛刘月舒丹朱映马源源苗烁杨如萍明章银华中科技大学同济医学院基础医学院药理学系湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院药物靶点研究与药效学评价湖北省重点实验室湖北武汉430030

目的研究鞣酸蛋白酵母散的治疗作用及其与保护肠黏膜、促进其修复的关系。方法将48只21 d SD大鼠随机分为6组:对照组、模型组、蒙脱石散(阳性药,0.8 g/kg)组和鞣酸蛋白酵母散低、中、高剂量(0.1、0.3、0.9 g/kg)组。除对照组外,所有动物... 详细信息

目的研究鞣酸蛋白酵母散的治疗作用及其与保护肠黏膜、促进其修复的关系。方法将48只21 d SD大鼠随机分为6组:对照组、模型组、蒙脱石散(阳性药,0.8 g/kg)组和鞣酸蛋白酵母散低、中、高剂量(0.1、0.3、0.9 g/kg)组。除对照组外,所有动物用4 g/kg番泻叶水煎剂连续ig 2周后,ig给药,对照组和模型组给予等体积的蒸馏水,每天2次,给药5 d。记录各组大鼠稀便率和腹泻指数。经治疗后,取各组大鼠空肠做苏木精-伊红染色和免疫组化,分别观察肠黏膜组织结构的改变和肠黏膜增殖细胞核抗原(PCNA)表达的变化。同时,刮取大鼠空肠黏膜分别测定DNA、总蛋白和IL-6的表达水平。结果与模型组比较,经高剂量的鞣酸蛋白酵母散治疗后,大鼠稀便率和腹泻指数显著降低(P<0.001),空肠绒毛结构基本恢复正常,空肠黏膜DNA含量显著增加(P<0.05),PCNA表达显著增加(P<0.001),IL-6表达减少。中剂量的鞣酸蛋白酵母散可改善大鼠腹泻,但对其他指标没有显著影响。而低剂量的鞣酸蛋白酵母散则无作用。结论鞣酸蛋白酵母散对幼年大鼠腹泻有治疗作用,并可促进肠黏膜修复。

关键词：鞣酸蛋白酵母散幼年大鼠腹泻肠黏膜修复蒙脱石散

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CX3CL1/CX3CR1介导的血小板浸润抑制肝癌生长

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中国药理学与毒理学杂志 2019年第10期 900-900页

作者：明章银苗烁陆濛刘月杨如萍舒丹朱映曾祥彬华中科技大学同济医学院基础医学院药理学系药物靶点研究与药效学评价湖北省重点实验室

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)细胞衍生的CX3CL1介导的肝癌组织血小板浸润的作用和机制。方法我们利用体外Transwell细胞迁移实验和原位瘤及皮下荷瘤裸鼠模型,采用RNA干扰、流式检测、免疫荧光、免疫组化及Western印迹等方法。结果人和小鼠... 详细信息

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)细胞衍生的CX3CL1介导的肝癌组织血小板浸润的作用和机制。方法我们利用体外Transwell细胞迁移实验和原位瘤及皮下荷瘤裸鼠模型,采用RNA干扰、流式检测、免疫荧光、免疫组化及Western印迹等方法。结果人和小鼠肝细胞癌(HCC)组织中有血小板浸润,HCC细胞衍生的CX3CL1直接诱导血小板迁移,缺氧通过上调CX3CL1表达而增强其迁移。体外Transwell实验发现敲除CX3CL1的HCC细胞减少了血小板迁移,在小鼠HCC原位移植模型中亦观察到此现象,且促进了肿瘤生长,在皮下荷瘤模型中,注射迁移的血小板导致HCC生长抑制。实验发现CX3CR1/Syk/PI3K参与了CX3CL1诱导的血小板迁移,迁移的血小板通过降低肝癌细胞线粒体膜电位和增加凋亡细胞的百分比来诱导HCC细胞凋亡。结论 HCC细胞衍生的CX3CL1诱导的血小板浸润抑制HCC生长。

关键词：血小板趋化因子 CX3CL1/CX3CR1 肝癌浸润

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融媒体背景下广播电视新闻编辑与民族地区特色文化创新探析--以黔东南为例

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卫星电视与宽带多媒体 2023年第7期 128-130页

作者：郑舒丹贵州省黔东南州融媒体中心

黔东南州地处贵州东南部,是苗、侗、汉等20多个民族聚居地,素有“歌舞海洋”“东方斗牛之乡”的美誉,拥有丰富的自然风光和人文景观,具有浓郁的民族风情,是一个集自然风光、历史文化、民族风情为一体的旅游胜地。近年来,黔东南州委宣传... 详细信息

黔东南州地处贵州东南部,是苗、侗、汉等20多个民族聚居地,素有“歌舞海洋”“东方斗牛之乡”的美誉,拥有丰富的自然风光和人文景观,具有浓郁的民族风情,是一个集自然风光、历史文化、民族风情为一体的旅游胜地。近年来,黔东南州委宣传部积极探索融媒体广播电视新闻采编与地方特色文化创新融合发展的新模式,以全媒体宣传为抓手,推动传统广电事业高质量发展。本文从融媒体广播电视新闻编辑角度出发,结合地方实际,对促进黔东南地区特色文化创新进行了深入剖析,并提出了相关建议。

关键词：融媒体广播电视新闻编辑民族地区特色文化创新

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