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作者：苏洁之南华大学

学位级别：硕士

目的: 通过microRNA干扰技术抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞MTDH的表达,观察其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、转移、侵袭能力的影响,探讨MTDH基因在乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学行为中的作用,为MTDH-miRNA的个性化、靶向性治疗乳腺癌提供实验... 详细信息

目的: 通过microRNA干扰技术抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞MTDH的表达,观察其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、转移、侵袭能力的影响,探讨MTDH基因在乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学行为中的作用,为MTDH-miRNA的个性化、靶向性治疗乳腺癌提供实验及理论依据。方法: 1.质粒构建、测序、提纯及转染:根据GenBank提供的MTDH基因序列设计4条RNA干扰序列,并设计1条非特异性序列作为阴性对照。将4条RNA干扰序列分别与miRNA表达载体pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR连接,构建重组质粒载体pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR-MTDH,命名为MTDH-miRNA1、MTDH-miRNA2、MTDH-miRNA3、MTDH-miRNA4,该重组质粒载体由上海Invitrogen公司构建并鉴定测序。测序成功后将含有靶向MTDH的miRNA质粒pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR-MTDH提纯,瞬时转染乳腺癌细胞MDA-MB-231,并检测转染率。 2.验证及选择最佳干扰组:通过Western blot检测MTDH蛋白、RT-PCR检测MTDHmRNA,验证4条miRNA-MTDH对MTDH表达的抑制作用,并选择出一条对MTDH基因表达抑制效果最佳的一组,以作进一步实验。 3.检测抑制MTDH基因后乳腺癌细胞增殖、转移、侵袭能力:将乳腺癌MDA-MB-231细胞分为三组,分别为未转染组、空载体转染组、转染组。应用MTT检测法、划痕实验、Transwell实验,分别检测各组细胞增殖、转移、侵袭能力。 4.统计学分析:对未转染组、空载体转染组、转染组的MTT检测法、划痕实验、Transwell实验的结果进行统计学分析,确定各组细胞增殖、转移、侵袭能力及差异有无显著性。结果: 1.重组质粒载体pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR-MTDH-miRNA经DNA测序分析证明构建成功。pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR-MTDH-miRNA重组质粒提取后琼脂糖凝胶电泳跑胶结果表示质粒提取纯度较高。瞬时转染后,在荧光显微镜下观察可见转染细胞内的绿色荧光,转染率达80%。 *** blot结果显示,与未转染组相比,转染MTDH-miRNA1的人乳腺癌MDA-MB-231细胞内MTDH蛋白表达水平分别下降了27.45%、34.31%、59.80%、79.41%,其中对MTDH蛋白表达的抑制最明显是MTDH-miRNA4转染组(P0.05)。 ***-PCR结果显示,与未转染组相比,转染MTDH-miRNA1的人乳腺癌MDA-MB-231细胞内MTDHmRNA水平分别下降了15.74%、20.37%、38.89%、80.56%,其中MTDH-miRNA4转染组对MTDHmRNA表达抑制干扰最明显(P0.05)。 ***结果显示,肿瘤细胞生长24h后,未转染组、空载体转染组、MTDH-miRNA4转染组的OD值分别为0.3800±0.033、0.3699±0.041、0.2891±0.020;肿瘤细胞生长48h后,未转染组、空载体转染组、MTDH-miRNA4转染组的OD值分别为0.4450±0.021、0.4140±0.022、0.3311±0.032;肿瘤细胞生长72h后,未转染组、空载体转染组、MTDH-miRNA4转染组的OD值分别为0.5600±0.012、0.5200±0.023、0.3912±0.000;肿瘤细胞生长96h后,未转染组、空载体转染组、MTDH-miRNA4转染组的OD值分别为0.7100±0.011、0.6810±0.010、0.4622±0.010,结果表明转染组较未转染组、空载体转染组明显减慢(P0.05),提示MTDH是人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的重要因素。 5.划痕实验结果显示,在划痕后24h,未转染组、空载体转染组、MTDH-miRNA4转染组的细胞迁移距离分别为4.8±0.2、5.0±0.5、0.3±0.2;在划痕后48h,未转染组、空载体转染组、MTDH-miRNA4转染组的细胞迁移距离分别为6.2±0.1、5.7±0.4、0.5±0.7,结果表明转染组较未转染组和空载体转染组迁移运动能力明显减弱,差异具有统计学意义(P<0.05),提示MTDH-miRNA转染的人乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移能力被抑制。 ***实验结果显示,5个高倍视野穿

关键词： MDA-MB-231 MTDH基因转染 RNAi

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乳腺血氧功能成像技术对乳腺癌新辅助化疗疗效评价研究

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实用肿瘤杂志 2015年第4期30卷 346-348页

作者：苏洁之范平明郑立平吕鹏飞海南医学院附属医院乳腺胸部肿瘤外科海南海口570102

目的探讨乳腺癌患者在新辅助化疗中应用乳腺血氧功能成像技术的疗效评价和临床应用价值。方法35例乳腺癌患者分别在确诊前和4个疗程新辅助化疗结束后这2个阶段,对研究样本采用乳腺血氧功能检测来评价临床疗效,同时采用触诊法测量肿瘤大... 详细信息

目的探讨乳腺癌患者在新辅助化疗中应用乳腺血氧功能成像技术的疗效评价和临床应用价值。方法35例乳腺癌患者分别在确诊前和4个疗程新辅助化疗结束后这2个阶段,对研究样本采用乳腺血氧功能检测来评价临床疗效,同时采用触诊法测量肿瘤大小,并根据实体肿瘤评价标准进行临床疗效评价,根据两组结果比较分析两种评价方法。结果接受新辅助化疗的35例乳腺癌患者中,32例血氧功能评价为显著,其中29例触诊法评价为显效(90.6%);3例血氧功能评价不显著,其中2例临床触诊法疗效评价为不显效(66.7%)。治疗前、后的血值和氧值变化差异有统计学意义(均P<0.05)。临床触诊疗效评价法和血氧功能疗效评价法间具有一致性与关联性(均P<0.05)。结论乳腺血氧功能成像技术与临床触诊法具有一致性和关联性,对乳腺癌新辅助化疗疗效评价有显著优势,应作为对现行临床触诊疗效评价方法的补充和提升。

关键词：乳腺肿瘤氧/血液血氧测定法化学疗法辅助乳腺肿瘤/药物疗法治疗结果

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胸苷酸合成酶基因多态性与培美曲塞治疗海南黎族肺腺癌患者效果的相关性

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中国老年学杂志 2016年第17期36卷 4244-4245页

作者：吴毓优高炳玉刘玉夏立平苏洁之陈峙霖海南医学院附属医院海南海口570102

目的探讨胸苷酸合成酶(TS)rs34743033(5'端非编码区28 bp重复序列)及rs34489327(3'非编码区的1 494 bp处6 bp核苷酸片段的缺失或插入)与培美曲塞治疗海南黎族肺腺癌患者疗效与预后的相关性。方法手术后经病理诊断确认海南晚期肺腺癌患者... 详细信息

目的探讨胸苷酸合成酶(TS)rs34743033(5'端非编码区28 bp重复序列)及rs34489327(3'非编码区的1 494 bp处6 bp核苷酸片段的缺失或插入)与培美曲塞治疗海南黎族肺腺癌患者疗效与预后的相关性。方法手术后经病理诊断确认海南晚期肺腺癌患者104例,采用PCR的方法检测5'端28 bp重复序列多态性;采用焦磷酸测序的方法检测3'端6 bp核苷酸片段的缺失或插入,随访记录患者的无进展生存时间和总生存期。结果 TS基因5'端非编码区rs34743033多态性位点3R/3R、2R/3R、2R/2R基因型在肺腺癌患者所占的比例分别为67.3%(70/104)、17.3%(18/104)、15.4%(16/104)。3'端非编码区rs34489327多态性位点+6 bp/+6 bp、+6 bp/-6 bp、-6 bp/-6 bp基因型在肺腺癌患者中所占比例分别为53.8%(56/104)、34.6%(36/104)、11.5%(12/104)。2R/2R和2R/3R基因型患者分别为12.00和18.50个月,3R/3R基因型患者中位无复发生存时间和总生存时间分别为11.63和18.17个月,二者之间无显著相关;-6 bp/-6 bp和-6 bp/+6 bp基因型患者分别为12.00和18.70个月,+6 bp/+6 bp基因型患者中位无复发生存时间和总生存时间分别为11.50和19.17个月,二者之间无显著相关。结论 TS基因rs34743033及rs34489327多态性可能与培美曲赛治疗海南黎族肺腺癌的疗效和预后无关。

关键词：肺腺癌胸苷酸合成酶培美曲塞基因多态性

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海南黎族肺腺癌患者胸苷酸合酶mRNA表达水平对培美曲塞化疗预后的影响

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中国全科医学 2014年第27期17卷 3217-3220页

作者：高炳玉刘玉夏立平郑武平苏洁之陈峙霖海南医学院肿瘤研究所海南省海口市570102

目的探讨海南黎族肺腺癌患者癌组织中胸苷酸合酶(TS)mRNA表达水平对培美曲塞辅助化疗预后的影响。方法选取2008年6月—2009年4月在我院手术治疗的晚期肺腺癌患者52例,采用培美曲塞为主的方案进行辅助化疗。采用反转录聚合酶链反应(RT-P... 详细信息

目的探讨海南黎族肺腺癌患者癌组织中胸苷酸合酶(TS)mRNA表达水平对培美曲塞辅助化疗预后的影响。方法选取2008年6月—2009年4月在我院手术治疗的晚期肺腺癌患者52例,采用培美曲塞为主的方案进行辅助化疗。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和相对定量的方法分别检测患者癌组织及癌旁组织中TS mRNA的表达水平,分析TS mRNA表达水平对患者化疗预后的影响。结果 52例肺腺癌患者中,35例(67.3%)癌组织TS mRNA表达水平低于其癌旁组织。52例肺腺癌患者癌组织中TS基因mRNA表达水平相差67倍,以临界值(cut-off均值)为界,TS mRNA高表达患者29例(55.8%),低表达患者23例(44.2%)。癌组织中TS mRNA低表达组患者的无复发生存率(61.0%)和总生存率(56.5%)均高于高表达组(39.0%和43.5%)(P<0.05)。结果癌组织中TS mRNA低表达的患者更能从培美曲塞为主的辅助化疗方案中受益;检测癌组织中TS mRNA表达水平有助于预测患者对化疗药物的敏感性。

关键词：肺肿瘤胸苷酸合酶基因表达培美曲塞化学疗法,辅助

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microRNA干扰抑制MTDH的表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和侵袭能力的影响

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医学研究杂志 2017年第5期46卷 84-90页

作者：苏洁之梁庆模海南医学院附属医院乳腺胸部肿瘤外科海口570102 南华大学附属南华医院胸外科衡阳421001

目的探讨microRNA干扰技术沉默异黏蛋白(MTDH,metadherin蛋白)基因表达及对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖、转移、侵袭能力的影响。方法将人工合成的针对MTDH基因的miRNA片段瞬时转染人乳腺癌细胞MDAMB-231,通过Western blot法、RT-PC... 详细信息

目的探讨microRNA干扰技术沉默异黏蛋白(MTDH,metadherin蛋白)基因表达及对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖、转移、侵袭能力的影响。方法将人工合成的针对MTDH基因的miRNA片段瞬时转染人乳腺癌细胞MDAMB-231,通过Western blot法、RT-PCR法检测MTDH蛋白表达和MTDHmRNA;应用MTT检测法、划痕实验、Transwell实验检测抑制MTDH基因后对乳腺癌细胞增殖、转移、侵袭能力的影响。结果 MTDHmiRNA能有效抑制MTDH蛋白和MTDHmRNA表达,最佳抑制率分别为79.41%、80.56%(P<0.05);经miRNA干扰的细胞,生长速度明显受到抑制(P<0.05),侵袭迁移能力显著下降(P<0.05)。结论 MTDH miRNA瞬时转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞可明显抑制癌细胞中MTDH表达,沉默MTDH基因表达后可明显抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长增殖、侵袭迁移能力。

关键词： MDA-MB-231 MTDH基因转染 RNAi

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改良Miccoli术治疗甲状腺良性疾病疗效观察

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海南医学 2016年第17期27卷 2855-2856,2857页

作者：高炳玉刘玉苏洁之郑立平海南医学院附属医院肿瘤研究所海南海口570102

目的观察改良Miccoli腔镜辅助下甲状腺手术治疗甲状腺良性疾病的疗效。方法将2014年12月至2015年12月在我院住院行手术治疗的150例甲状腺良性疾病患者按照随机数表法均分为观察组(n=75)和对照组(n=75),观察组行改良Miccoli腔镜辅助下甲... 详细信息

目的观察改良Miccoli腔镜辅助下甲状腺手术治疗甲状腺良性疾病的疗效。方法将2014年12月至2015年12月在我院住院行手术治疗的150例甲状腺良性疾病患者按照随机数表法均分为观察组(n=75)和对照组(n=75),观察组行改良Miccoli腔镜辅助下甲状腺手术,对照组行颈前小切口入路甲状腺手术,比较两组患者的手术情况、术后疼痛情况、住院时间、住院费用以及不良反应发生情况,并统计患者切口美容满意度,疼痛情况以及声音障碍程度。结果观察组患者的手术时间和术中出血量分别为(45.6±24.1)min、(42.3±24.5)m L,对照组分别为(58.9±32.8)min、(68.7±43.6)m L,两组比较差异均有统计学意义(P0.05);术后观察组的声音障碍程度评分为(0.72±0.92)分,与对照组的(0.69±0.87)分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在甲状腺良性疾病的手术治疗中,行颈前小切口入路甲状腺手术的疗效与改良Miccoli腔镜辅助下甲状腺手术相当,改良Miccoli手术具有手术时间短、出血量少、美容效果好的优点,但手术费用高于前者,临床医生可综合患者病情和要求等选择手术方法。

关键词：颈前小切口入路改良Miccoli手术甲状腺手术甲状腺良性疾病

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乳腺良性肿瘤麦默通微创旋切术的临床应用

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中国肿瘤临床与康复 2014年第4期21卷 471-472页

作者：郑武平高炳玉刘玉苏洁之海南医学院附属医院海口570102

近年来,女性患乳腺疾病概率逐年升高,且呈年轻化趋势[1]。女性乳腺良性肿瘤以乳腺纤维瘤最为常见,存在癌变可能,临床上通常采取手术方式进行治疗。常规手术一般来说创口较大,易留下疤痕,甚至导致乳房变形,严重影响美观并给女性患者造成... 详细信息

近年来,女性患乳腺疾病概率逐年升高,且呈年轻化趋势[1]。女性乳腺良性肿瘤以乳腺纤维瘤最为常见,存在癌变可能,临床上通常采取手术方式进行治疗。常规手术一般来说创口较大,易留下疤痕,甚至导致乳房变形,严重影响美观并给女性患者造成严重的心理创伤。目前,临床上一般采用麦默通微创旋切术对乳腺肿物进行切除并进行活检,其优势在于创口仅有2~5mm,

关键词：乳腺肿瘤麦默通微创旋切术临床疗效与价值

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乳腺癌微转移检测的研究进展

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现代生物医学进展 2010年第19期10卷 3778-3781页

作者：苏洁之梁庆模南华大学湖南衡阳421001 南华大学附属南华医院普外科湖南衡阳421001

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,近年在我国的发病率逐年上升。研究证实乳腺癌是全身性疾病,早期可能就存在血液、淋巴及骨髓的微转移。随着分子生物学技术的发展,乳腺癌微转移的检测已被越来越多的应用到临床,这对乳腺癌患者的预后判断和... 详细信息

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,近年在我国的发病率逐年上升。研究证实乳腺癌是全身性疾病,早期可能就存在血液、淋巴及骨髓的微转移。随着分子生物学技术的发展,乳腺癌微转移的检测已被越来越多的应用到临床,这对乳腺癌患者的预后判断和生存率的提高具有重要的意义。

关键词：乳腺癌微转移检测预后

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miRNA-186调控CDK6和IL-10表达抑制乳腺癌MCF-7细胞生长与转移机制的研究

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免疫学杂志 2019年第3期35卷 236-240页

作者：苏洁之郑武平陈国平范平明吕鹏飞王煜海南医学院第一附属医院乳腺胸部肿瘤外科海口570102

目的探讨miR-186介导的CDK6和IL-10表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法用已构建的miR-186 mimic质粒转染乳腺癌MCF-7细胞,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot技术检测重组质粒对CDK6和IL-10表达的影响,光学显微镜... 详细信息

目的探讨miR-186介导的CDK6和IL-10表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法用已构建的miR-186 mimic质粒转染乳腺癌MCF-7细胞,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot技术检测重组质粒对CDK6和IL-10表达的影响,光学显微镜下观察细胞生长群落,分别用MTT法、流式细胞术和Transwell小室法测定重组质粒转染对细胞增殖、凋亡周期及侵袭能力的影响。结果 miR-186转染效率良好,与non-targeting组比较,在转染miR-186后,可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖(P<0.01),细胞生长群落分析结果显示,miR-186组细胞群落数目明显低于non-targeting组细胞(P<0.01),细胞周期结果显示,miR-186组的G0/G1和S期百分比明显的低于non-targeting组(P<0.05),G2/M期百分比明显的高于non-targeting组(P<0.05),Transwell检测结果显示,miR-186组乳腺癌MCF-7细胞侵袭细胞数量(81.00±2.00)个明显少于non-targeting组(125.00±3.00)个,miR-186转染后,CDK6和IL-10在miR-186组乳腺癌MCF-7细胞中的表达率明显低于non-targeting组。结论 miR-186可下调乳腺癌MCF-7细胞中CDK6和IL-10的表达,可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭,miR-186可能成为一个潜在的乳腺癌基因治疗靶标。

关键词： miR-186 乳腺癌MCF-7细胞 CDK6 IL-10 凋亡侵袭

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克唑替尼治疗间变淋巴瘤激酶基因阳性晚期肺腺癌的临床观察

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中国药房 2019年第2期30卷 240-243页

作者：苏洁之许铁峰郑立平范平明陈峙霖海南医学院第一附属医院乳腺胸部肿瘤外科海口570102

目的 :观察克唑替尼治疗间变淋巴瘤激酶(ALK)基因阳性晚期肺腺癌的疗效与安全性。方法:选取2015年8月-2017年5月我院收治的72例ALK基因阳性晚期肺腺癌患者,按简单随机抽样法分为对照组和观察组,每组36例。对照组患者给予注射用培美曲塞... 详细信息

目的 :观察克唑替尼治疗间变淋巴瘤激酶(ALK)基因阳性晚期肺腺癌的疗效与安全性。方法:选取2015年8月-2017年5月我院收治的72例ALK基因阳性晚期肺腺癌患者,按简单随机抽样法分为对照组和观察组,每组36例。对照组患者给予注射用培美曲塞二钠500 mg/m^2,d_1,静脉滴注+注射用顺铂75 mg/m^2,d_(1～3),静脉滴注;用药前1 d口服醋酸地塞米松片0.75 mg,早晚各1次;用药前7 d口服叶酸片0.4 mg,至最后1次顺铂给药后21 d+肌内注射维生素B_(12)注射液1 mg,顺铂用药后每3周肌内注射1次;用药前1 d静脉滴注等渗葡萄糖注射液100 g,化疗当日静脉滴注等渗氯化钠注射液或葡萄糖注射液3 000～3 500 mL,同时给予氯化钾注射液0.5 g+甘露醇注射液50 g+呋塞米注射液20 mg,以保证每日尿量2 000～3 000 mL;每21 d为1个疗程,共治疗2个疗程。观察组患者在对照组治疗的基础上给予克唑替尼胶囊250 mg,口服,早晚7点各1次,整粒吞服,不可嚼碎或溶解服用,连用42 d。观察两组患者的临床疗效、生存质量及毒性反应发生情况。结果:观察组患者总有效率(61.11%)、生存质量稳定率(83.33%)均显著高于对照组(27.78%、44.44%)(P0.05)。结论:在常规化疗的基础上加用克唑替尼,可显著提高ALK基因阳性晚期肺腺癌患者的疗效,有效改善患者的生存质量;该药虽然未增加其他组织或器官的毒性反应发生风险,但视觉效应毒性反应的发生率较高。

关键词：克唑替尼培美曲塞顺铂晚期肺腺癌间变淋巴瘤激酶阳性疗效安全性

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