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基于脂质组学探究越鞠丸对抑郁小鼠的治疗作用

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：张振涛苏丹李惠珍宋永贵徐焕华赖美茜子艾志福江西中医药大学江西省中医药管理局抑郁症中医证候动物模型重点研究室中药药效(防治精神障碍脑疾病)评价江西省中医药管理局重点研究室

目的：基于脂质组学研究越鞠丸对抑郁小鼠血清、前额叶皮层、海马区脂质代谢的影响，探讨其改善脂质代谢防治抑郁的可能途径。方法：7周龄的C57小鼠随机分为空白组、模型组、越鞠丸组(3.6 g·kg-1)和氟西汀组(10 mg·kg-1)，采用慢性不... 详细信息

目的：基于脂质组学研究越鞠丸对抑郁小鼠血清、前额叶皮层、海马区脂质代谢的影响，探讨其改善脂质代谢防治抑郁的可能途径。方法：7周龄的C57小鼠随机分为空白组、模型组、越鞠丸组(3.6 g·kg-1)和氟西汀组(10 mg·kg-1)，采用慢性不可预知应激诱导的抑郁模型；造模和给药结束后，通过糖水偏好实验、旷场实验、悬尾实验、强迫游泳实验等神经行为学指标评价越鞠丸抗抑郁药效；采用全自动生化分析仪检测小鼠血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）指标，评价越鞠丸对抑郁状态下脂质代谢的影响；采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱质谱法（UPLC-LTQ-Orbitrap MS）结合偏最小二乘判别分析开展小鼠血清、前额叶皮层、海马区脂质组学研究；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠胃组织中脂质代谢上游哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、核糖体蛋白S6激酶（S6K）、磷酸化mTOR（p-mTOR）、p-S6K蛋白的表达情况。结果：与空白组比较，模型组小鼠糖水偏好率和旷场中心运动时间显著减少（P<0.01），悬尾不动时间和强迫游泳不动时间显著增加（P<0.01），血清TC、TG、LDL-C、HDL-C、AST和ALT水平显著升高（P<0.01，P<0.05）。越鞠丸治疗2周后，与模型组比较，越鞠丸组小鼠的糖水偏好率和旷场中心运动时间显著增加（P<0.01），悬尾不动时间和强迫游泳不动时间显著减少（P<0.01），血清TC、TG、LDL-C、AST和ALT水平显著降低（P<0.05，P<0.01）；脂质组学分析显示，越鞠丸影响了血清、前额叶皮层、海马区的脂质代谢，分别筛选得到23种、222种、45种差异脂质代谢物，其对前额叶皮层脂质代谢的影响相对海马区更为明显，提示越鞠丸对抑郁小鼠不同脑区脂质代谢物的调控具有区域特异性。差异脂质主要富集于甘油磷脂代谢通路、鞘脂信号通路和糖基磷脂酰肌醇-锚定蛋白生物合成等通路上，其中又以甘油磷脂的代谢通路最为显著。Western blot结果显示，与空白组比较，模型组小鼠胃组织中p-mTOR、p-S6K蛋白的相对表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较，越鞠丸组小鼠胃组织中p-mTOR、p-S6K蛋白的相对表达水平显著降低（P<0.01）。结论：越鞠丸对脂质代谢的干预是其发挥抗抑郁效应的潜在途径之一，可能与胃中脂质代谢上游mTOR/S6K信号通路的调控相关。

关键词：越鞠丸抑郁症脂质组学神经行为学血脂哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/核糖体蛋白S6激酶(mTOR/S6K)信号通路

柴胡防治精神神经疾病的共有物质基础及其生物学机制系统解析

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中草药 2024年第1期55卷 307-319页

作者：冯渝梅李惠珍艾志福刘亚丽杨明朱根华陈丽玲苏丹宋永贵江西中医药大学抑郁症中医证候动物模型、中药药效(防治精神障碍脑疾病)评价江西省中医药管理局重点研究室江西南昌330103 南昌医学院药效与安全性评价江西省卫生健康委员会重点实验室江西南昌330004 江西省中医药管理局中草药药理学与质量评价重点实验室江西南昌330004 江西古香今韵大健康产业有限公司江西南昌330004

柴胡Bupleuri Radix是传统中医疏肝解郁要药,临床上不仅用于抑郁症的治疗,在焦虑、癫痫、阿尔茨海默病和帕金森等多种精神神经疾病防治中也广泛应用。然而精神、神经疾病常互相伴发,给临床用药造成困扰,最近的研究提出二者可能存在共同... 详细信息

柴胡Bupleuri Radix是传统中医疏肝解郁要药,临床上不仅用于抑郁症的治疗,在焦虑、癫痫、阿尔茨海默病和帕金森等多种精神神经疾病防治中也广泛应用。然而精神、神经疾病常互相伴发,给临床用药造成困扰,最近的研究提出二者可能存在共同的神经生物学基础。因此在梳理柴胡对抑郁、焦虑、阿尔茨海默病等优势病种的基础上,对柴胡防治精神神经疾病的共同物质基础及共有机制进行系统解析,为寻找柴胡在精神神经疾病防治方面的作用规律提供思路,推动柴胡在该作用方面的深入理解和后续的研发,也为探究传统中医药“异病同治”的治疗原则提供科学依据。

关键词：柴胡共有物质基础精神神经疾病焦虑癫痫阿尔茨海默病帕金森异病同治

莪术抗抑郁有效成分筛选及其调控Nrf2/GPX4/GSH通路的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：宋永贵段德林赖美茜子刘亚丽艾志福朱根华徐焕华郑琴杨明苏丹江西中医药大学江西省中医药管理局抑郁症中医证候动物模型重点研究室江西省中医药管理局中药药效(防治精神障碍脑疾病)评价重点研究室南昌医学院江西省卫生健康药效与安全性评价重点实验室江西古香今韵大健康产业有限公司

目的：对莪术抗抑郁有效成分进行筛选、评价，并从抗氧化角度探索其调控核转录因子E2相关因子2（Nrf2）/谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）/谷胱甘肽（GSH）通路的作用机制。方法：采用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2，2-联氮-二（3-乙... 详细信息

目的：对莪术抗抑郁有效成分进行筛选、评价，并从抗氧化角度探索其调控核转录因子E2相关因子2（Nrf2）/谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）/谷胱甘肽（GSH）通路的作用机制。方法：采用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2，2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）自由基清除实验检测包括莪术醇、莪术酮、莪术二酮、莪术烯、莪术烯醇、莪术双环烯酮、去氢莪术二酮、异莪术烯醇、莪术呋喃二烯酮、莪术呋喃二烯、蓬莪术环氧酮在内的莪术11种特征成分的体外抗氧化活性。通过慢性不可预知应激（CUMS）建立果蝇抑郁模型，将W1118野生型黑腹雄性果蝇随机分为空白组、模型组、莪术醇组、莪术酮组、莪术二酮组、莪术烯组、莪术烯醇组、莪术双环烯酮组、去氢莪术二酮组、异莪术烯醇组、莪术呋喃二烯酮组、莪术呋喃二烯组、蓬莪术环氧酮组和氟西汀组(10 μmol·L-1)，其中，莪术11种特征成分给药组剂量均为0.1 g·L-1，空白组和模型组给予等体积的溶媒。采用糖水偏好实验、攀爬实验、强迫游泳实验，评价果蝇抑郁行为学指标，采用液相色谱-质谱联用法评价果蝇大脑中5-羟色胺（5-HT）和多巴胺（DA）的水平，并采用熵权法综合评价确定莪术抗抑郁有效成分。此外，将7周龄C57小鼠随机分为空白组、模型组、莪术烯低、高剂量组(0.5、1 mg·kg-1)和氟西汀组(10 mg·kg-1)，采用CUMS建立抑郁小鼠模型，结合行为学确认最佳活性成分莪术烯的抗抑郁效果。流式细胞术检测小鼠海马中活性氧（ROS）的含量；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测三磷酸腺苷（ATP）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）含量的影响；透射电镜观察莪术烯对海马组织线粒体超微结构的影响；蛋白免疫印迹法（Western blot）测定莪术烯对Nrf2蛋白水平的影响，并采用Nrf2抑制剂ML385验证其抗抑郁作用与调控Nrf2的关系；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测莪术烯对谷胱甘肽过氧化物酶家族（GPX）mRNA表达水平的影响。结果：体外抗氧化结果显示，具有六并五呋喃骨架的莪术烯和莪术酮清除自由基能力最为显著，熵权法综合评价结果显示，莪术烯是最具潜力的活性成分。与空白组比较，模型组小鼠糖水偏好系数和进入旷场中心次数显著下降（P<0.01），强迫游泳和悬尾实验的不动时间显著增加（P<0.01）；海马组织中ROS含量显著升高（P<0.01），ATP含量显著下降（P<0.01）；线粒体嵴紊乱，内膜空泡化，破坏严重；Nrf2蛋白表达水平明显下降（P<0.05），抗氧化酶SOD、CAT和GSH含量明显下降（P<0.05，P<0.01），GPX家族中GPX1、GPX4、GPX7基因表达水平显著下降（P<0.01）。与模型组比较，莪术烯高剂量组小鼠糖水偏好系数和进入旷场中心次数明显增加（P<0.05），游泳和悬尾不动时间明显减少（P<0.05，P<0.01）；ROS含量显著下降（P<0.01），ATP含量明显增加（P<0.05）；线粒体损伤减轻；Nrf2蛋白表达水平明显增加（P<0.05），Nrf2抑制剂ML385可逆转莪术烯对CUMS小鼠抑郁行为的改善作用；GSH含量显著增加（P<0.01），SOD和CAT含量无显著性差异；GPX4基因表达水平明显增加（P<0.05），而其他GPX家族基因差异均为统计学意义。结论：莪术烯为莪术中具有抗抑郁活性的最佳成分，其可能通过调控Nrf2，及其下游GPX4/GSH通路，而非CAT或SOD途径，改善线粒体功能障碍，发挥抗抑郁作用。

关键词：莪术抑郁症药效评价作用机制氧化应激核转录因子E 相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)/谷胱甘肽(GSH)通路

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术结合多元统计分析比较不同品种牛膝药材化学成分的差异

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中草药 2024年第7期55卷 2160-2174页

作者：晏露婷宋永贵艾志福李惠珍杨明朱根华张琦邵文祥袁恩苏丹江西中医药大学抑郁症中医证候动物模型、中药药效(防治精神障碍脑疾病)评价江西省中医药管理局重点研究室江西南昌330004 江西古香今韵大健康产业有限公司江西南昌330004 江西中医药大学中医学院江西南昌330004 江西中医药大学大型仪器共享服务中心江西南昌330004

目的建立超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(ultra performance liquid chromatography quadrupole time of flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS/MS)结合多元统计分析技术的分析方法,比较不同品种牛膝的化学成分差异。方法基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对怀牛膝Achyranthes bidentata、川牛膝Cyathula officinalis、红牛膝Cyathula capitata和土牛膝Achyranthes aspera的化学成分进行分析与鉴别,并运用多元统计分析筛选不同品种牛膝的差异性成分。结果共初步指认出230种化学成分,其中皂苷类81种、生物碱类26种、甾酮类12种、有机酸类75种、木脂素类19种和黄酮类17种。根据变量重要性投影(variable importance in projection,VIP)值>1,t检验(P<0.05)从4种牛膝中共筛选出25个化学标志物。其中,竹节参皂苷、牛膝皂苷在怀牛膝中占比居多;竹节参皂苷IVa在红牛膝中的占比最高;甾醇、黄酮醇、有机酸和糖苷类成分在川牛膝中的占比最高;齐墩果烷型皂苷和酪胺类生物碱类成分则在安徽土牛膝中占比最多。结论该方法快速、全面地对牛膝植物资源的成分进行系统分析,为牛膝的品种分类鉴别和资源开发利用提供了基础。

关键词： UPLC-Q-TOF-MS/MS 怀牛膝川牛膝红牛膝土牛膝竹节参皂苷牛膝皂苷黄酮醇多元统计分析

一种新型肝郁化火型抑郁症动物模型的建立及评价方法

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药学学报 2024年第6期59卷 1680-1690页

作者：苏丹李健朱根华杨明廖亮亮艾志福李惠珍刘亚丽宋永贵江西中医药大学中药药效(防治精神障碍脑疾病)评价江西省中医药管理局重点研究室/抑郁症中医证候动物模型江西省中医药管理局重点研究室江西南昌330004 江西中医药大学南昌市实验动物病理研究重点实验室江西南昌330006 江西古香今韵大健康产业有限公司江西南昌330029 南昌医学院药效与安全性评价江西省卫生健康重点实验室江西南昌330004

通过一种复合诱导方法,结合神经行为学、宏观表征以及客观病理评价指标,构建并确证小鼠肝郁化火证抑郁模型。采用睡眠剥夺结合光照和隔天给粮刺激的方法进行构建,并从表观效度、结构效度和预测效度3个层次展开评估,再经由方剂反证所建... 详细信息

通过一种复合诱导方法,结合神经行为学、宏观表征以及客观病理评价指标,构建并确证小鼠肝郁化火证抑郁模型。采用睡眠剥夺结合光照和隔天给粮刺激的方法进行构建,并从表观效度、结构效度和预测效度3个层次展开评估,再经由方剂反证所建立的肝郁化火型抑郁模型。表观效度中,与空白组相比,模型小鼠神经行为学表现为典型的抑郁样症状;一般状态观察显示模型组小鼠毛发乱而无光泽,且反应迟钝易激惹,饮水量大幅增加;小鼠睡眠时相检测中,模型小鼠睡眠觉醒期所占时间比显著上升,非快速眼动睡眠期和快速眼动睡眠期所占时间比显著下降;颈内动脉平均血流速度、血流量、舌、尿液、爪色r值等生理性指标变化有显著性差异;结构效度显示,与空白组相比,模型小鼠海马中五羟色胺、多巴胺、γ-氨基丁酸显著下降,乙酰胆碱、色氨酸、谷氨酸水平显著上升,给予丹栀逍遥散治疗后,以上神经递质皆有不同程度回调。预测效度中,治疗药物帕罗西汀可有效改善模型小鼠的抑郁样行为;肝郁化火经典方丹栀逍遥散可不同程度回调抑郁及相关证候各项指标。本研究建立了一种新型肝郁化火型抑郁动物模型,扩充了中医证候抑郁模型的种类,为今后中医药防治抑郁症的科学内涵研究、药效评价以及药物筛选提供了更多选择。动物实验获得江西中医药大学动物伦理实验委员会的批准和监督(伦理编号:20230313040)。

关键词：抑郁症动物模型肝郁化火丹栀逍遥散病症结合

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《寿世青编》精、气、神养生方法探析

陕西中医药大学学报 2024年第2期47卷 49-52页

作者：汪可萱曹征王河宝艾志福陈双进刘曦许雯李智超江西中医药大学研究生院江西南昌330004

清代医家尤乘养生著作《寿世青编》,流传甚广,影响深远,所蕴含养生思想和养生技术方法丰富,其中精气神养生方法颇有特色。尤乘认为精气神养生贵在日常勤习,自然能够“体健不复疲倦”。其精气神养生的方法可归纳为积精、调气、养神三个方... 详细信息

清代医家尤乘养生著作《寿世青编》,流传甚广,影响深远,所蕴含养生思想和养生技术方法丰富,其中精气神养生方法颇有特色。尤乘认为精气神养生贵在日常勤习,自然能够“体健不复疲倦”。其精气神养生的方法可归纳为积精、调气、养神三个方面,主要内容包括节欲保精、饮食养精、按摩固精、运气调息、导引调气、调气择时、寡欲养心、静处摄神、顺时调神。

关键词：寿世青编尤乘精气神养生方法学术探讨

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归脾汤及其加减方治疗心脾两虚证的研究进展

江西中医药 2024年第1期55卷 78-81页

作者：薛冰宋永贵艾志福苏丹王瑞英程绍民江西中医药大学南昌330004

归脾汤是中医治疗心脾两虚证的常用方剂,对于临床各科和各系统疾病的心脾两虚证型具有良好的治疗效果,且具有毒副作用小、安全系数高等优点。现对归脾汤治疗心脾两虚证的临床应用现状、作用机制以及效应物质研究进行综述,旨在为今后进... 详细信息

归脾汤是中医治疗心脾两虚证的常用方剂,对于临床各科和各系统疾病的心脾两虚证型具有良好的治疗效果,且具有毒副作用小、安全系数高等优点。现对归脾汤治疗心脾两虚证的临床应用现状、作用机制以及效应物质研究进行综述,旨在为今后进一步探索心脾两虚证的本质、归脾汤治疗心脾两虚证的作用机制,并为归脾汤治疗心脾两虚证的临床应用范围提供依据。

关键词：归脾汤心脾两虚证辨证论治研究进展中医药

青皮的炮制历史沿革、效应物质及古今临方配伍研究进展

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中南药学 2024年第1期22卷 186-193页

作者：黄艺婷苏丹鲍毅艾志福杨明朱根华宋永贵江西中医药大学江西省中医药管理局中药药效(防治精神障碍脑疾病)评价重点研究室南昌330004 江西中医药大学江西省中医药管理局抑郁症中医证候动物模型重点研究室南昌330004 江西古香今韵大健康产业有限公司南昌330115

青皮为我国传统中药材,炮制历史悠久,方法多样。但随着历史的演变,一些独具特色的炮制方法逐渐消失,我们对青皮不同炮制品种的认识和传承有待加强。同时,各地对不同品种的制法各异,差别较大。而其加工炮制、质量控制、临床使用都不可避... 详细信息

青皮为我国传统中药材,炮制历史悠久,方法多样。但随着历史的演变,一些独具特色的炮制方法逐渐消失,我们对青皮不同炮制品种的认识和传承有待加强。同时,各地对不同品种的制法各异,差别较大。而其加工炮制、质量控制、临床使用都不可避免地会受到这些问题的影响和制约。因此,本文通过对青皮炮制历史沿革、现代炮制规范的详细梳理,并综合药理作用的研究进展,强化对青皮及其炮制品优势特色的认识,寻找目前研究与开发的不足之处,为今后优化青皮炮制工艺和建立质量标准控制体系提供参考。此外,从中药功效和临床应用的角度进一步挖掘青皮及其炮制品在复方配伍方面的特点与规律,促进对现代药理活性及潜在机制的阐述,也为现代配伍研究提供依据。

关键词：青皮历史沿革炮制规范药理作用临方配伍

黄芩-黄连抗神经炎症的配伍优势及其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的潜在靶点

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中国实验方剂学杂志 2022年第22期28卷 58-67页

作者：张红杰苏丹朱根华宋永贵周步高李珊珊章常华艾志福江西中医药大学中医脑科学研究所江西省中医药防治认知障碍脑疾病重点实验室江西省中医药管理局抑郁症中医证候动物模型重点研究室江西省中医药管理局中药药效(防治精神障碍脑疾病)评价重点研究室南昌330006

目的:探索黄芩-黄连防治神经炎症的配伍优势,并基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路,阐明黄芩-黄连配伍优势的作用特点及机制。方法:选取体外具有代表性的小鼠小胶质细胞(BV2),将BV2分为8组,分别... 详细信息

目的:探索黄芩-黄连防治神经炎症的配伍优势,并基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路,阐明黄芩-黄连配伍优势的作用特点及机制。方法:选取体外具有代表性的小鼠小胶质细胞(BV2),将BV2分为8组,分别为正常组、模型组、黄芩-黄连组、吡拉西坦组、黄芩组、黄连组;利用细菌脂多糖(LPS)建立BV2细胞炎症模型,通过细胞增殖活性检测(CCK-8)试剂盒检测细胞活性;明场下观察细胞形态;酶联免疫吸附测定法(ELISA)、免疫荧光法测定药物对BV2细胞促炎因子产生及释放的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达;细胞免疫荧光检测NF-κB p65核转位情况;通过TLR4信号转导抑制剂CLI-095、NF-κB阻断剂PDTC进行黄芩-黄连抗神经炎症作用靶点的确认。结果:与正常组比较,LPS诱导的模型组细胞大多处于激活状态,培养液及细胞内的IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著升高(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65的mRNA表达显著升高(P<0.01),NF-κB p65的入核现象明显;与模型组比较,黄芩-黄连、吡拉西坦组预处理后,BV2细胞形态大部分恢复,IL-6、TNF-α、IL-1β水平均显著降低(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65 mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),NF-κB p65大多存在于细胞质中;黄芩组、黄连组与模型组比较,细胞形态略有恢复,促炎因子水平及TLR4、MyD88、NF-κB p50、NF-κB p65 mRNA表达量有所降低;与黄芩-黄连组比较,黄芩组、黄连组的促炎因子抑制作用效果显著低于药对组;与模型组比较,应用信号通路特异抑制剂“黄芩-黄连+CLI-095”组、“黄芩-黄连+PDTC”组,能够明显降低TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65的mRNA表达(P<0.05,P<0.01),并明显抑制NF-κB p65转入细胞核内。结论:黄芩与黄连相须配伍后的抗神经炎症作用明显优于单味黄芩或黄连;该药对的抗神经炎症优势与抑制小胶质细胞中的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活密切相关;通过验证说明TLR4、MyD88、NF-κB为黄芩-黄连发挥药对配伍优势的潜在靶点。

关键词：黄芩-黄连配伍优势 Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子-κB(TLR4/MyD88/NF-κB) 神经炎症小鼠小胶质细胞(BV2)