检索结果-南通市图书馆

核糖核酸酶抑制因子的抗体制备与纯化及ELISA法对其药代动力学的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

核糖核酸酶抑制因子的抗体制备与纯化及ELISA法对其药代动力学的...

作者：舒晓宏大连医科大学

学位级别：硕士

肿瘤是威胁人类健康的主要疾病之一。传统的化疗药物主要从直接杀伤肿瘤细胞入手，同时对正常细胞亦有毒副作用。核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease Inhibitot，RI)抑制肿瘤的作用则是通过与血管生成因子(Angiogenin，Ang)紧密结合，抑... 详细信息

肿瘤是威胁人类健康的主要疾病之一。传统的化疗药物主要从直接杀伤肿瘤细胞入手，同时对正常细胞亦有毒副作用。核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease Inhibitot，RI)抑制肿瘤的作用则是通过与血管生成因子(Angiogenin，Ang)紧密结合，抑制肿瘤血管的生成，阻断肿瘤细胞的氧气及营养供应，从而使肿瘤细胞停止生长，而对正常细胞却无毒副作用。我们实验室对RI的抗肿瘤研究进行了大量工作，实验表明，从人胎盘和猪肝中提取的RI，可以抑制乳腺癌实体瘤Ca761，肉瘤S180，肝癌实体瘤H22的生长。因此将其作为抗肿瘤药物开发利用无疑为肿瘤治疗提供了一种新思路。国内外有关RI的研究多集中在结构方面，对其功能尤其是将RI作为抗肿瘤药物的研究报道较少。本实验室已报告RI具有良好的治疗多种肿瘤疗效;本研究在已有的基础上成功制备了RI抗体并进行纯化，应用ELISA法对RI的药代动力学进行了初步探索。 RI是哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白，分子量约为50kD，取RI 200μg/只动物，加等体积的福氏不完全佐剂充分乳化后免疫家兔，经检测当抗血清效价达到5000以上时采血。通过SDS-PAGE分析，在约55kD处有清晰条带，为RI的抗体免疫球蛋白TgG。 Recombinant Protein(rProtein)A Sepharose Fast Flow是一种亲和性介质，重组蛋白A与Sepharose Fast Flow偶联后，增强了特异性结合IgG Fc段的能力，这种共价结合使抗血清中的免疫球蛋白IgG得到高度纯化。为了进一步提高纯化效率，本文对实验条件进行筛选优化，确定了上样量为2ml，洗脱液梯度浓度最高为30％，经吸光度及蛋白含量测定确定组分收集为9～16管(1ml/管)。纯化后的抗体IgG进行SDS-PAGE，在约55kD处有单一条带，经western-blot检测有特异性条带出现(约50kD处)，说明纯化效果较好。ELISA法测其效价，滴度达64，000以上，活性保持得很好，其稳定性可达12个月以上。随着生化技术的迅速发展，蛋白药物的开发日益受到重视，但其生理活性强，用药剂量小，致使体液中药物浓度很低，要求检测方法必须具有极高的灵敏度。故本实验选用了检测可达pgg/m1级水平的EL工SA法。实验中采用间接EL工sA法测抗原，建立了标准曲线，并对测定条件进行优化，确定了一抗稀释度为1:4000，二抗稀释度为l:2000，BSA封闭液浓度为2%。同时对其方法学进行考证，灵敏度可达0.05 pg/m1，批内变异系数为9.28%，批间变异系数为13.56%，一抗稀释4000 倍后，稳定性可达6个月以上。目前国内外尚无RI抗体出售，本实验制备及纯化的RI抗体除了可用于 Western一blot检测外，还极有希望成为肿瘤的早期诊断的一个新指标(本实验室已通过实验证明恶性肿瘤患者红细胞中RI活性下降，瘤组织内RI基因表达下降)。 R1作为抗肿瘤药物其药代动力学研究未见报道，本文对EL工SA法进行了初步探讨，为以后的测定方法提供了一定的实验基础，进而为RI的药代动力学深入研究打下了良好的基础。

关键词：核糖核酸酶抑制因子,抗体,ELISA,药代动力学

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

激酶别构调节剂的研究进展

中国科学：化学 2015年第9期45卷 884-891页

作者：胡雨彤舒晓宏张健上海交通大学医学院细胞分化与凋亡教育部重点实验室上海200025 大连医科大学药学院大连116044

蛋白激酶(protein kinases),即蛋白质磷酸化酶(protein phosphokinases),是一类重要的催化蛋白质磷酸化反应的酶.蛋白激酶活性异常是导致肿瘤发生、生长和转移的重要原因之一.因此,以蛋白激酶作为抗癌靶点,研发新型抗肿瘤药物,己经成为... 详细信息

蛋白激酶(protein kinases),即蛋白质磷酸化酶(protein phosphokinases),是一类重要的催化蛋白质磷酸化反应的酶.蛋白激酶活性异常是导致肿瘤发生、生长和转移的重要原因之一.因此,以蛋白激酶作为抗癌靶点,研发新型抗肿瘤药物,己经成为药物研发领域中最重要的研究方向之一,蛋白激酶调节剂也成为颇具潜力的抗肿瘤候选药物.目前已有一个蛋白激酶小分子别构调节剂作为癌症的靶向治疗药物获美国食品药品监督管理局批准上市.与以往的ATP竞争性调节剂相比,蛋白激酶别构抑制剂因选择性好、安全性高、动力学缓慢,而且临床副作用少,已成为现今蛋白激酶抑制剂研发的主要方向.鉴于蛋白激酶别构调节剂在癌症治疗领域展现出的潜在的价值,本文将对蛋白激酶别构调节剂的研究进展进行综述.

关键词：蛋白激酶别构抑制剂别构作用机制

核糖核酸酶抑制因子(RI)的融合表达与复性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物化学与分子生物学报 2004年第1期20卷 50-54页

作者：张海涛舒晓宏田余祥李瑞华崔秀云大连医科大学生物化学与分子生物学教研室大连116027 大连医科大学附属第二临床学院检验科大连116027

应用PCR技术从核糖核酸酶抑制因子 (ribonucleaseinhibitor ,RI)的克隆载体pT7 ri中扩增出ri片段 (1 5kb) ,亚克隆到融合表达载体pGEX 2T中 ,并转化感受态大肠杆菌BL2 1.异丙基半乳糖苷 (IPTG)诱导表达的GST RI经SDS PAGE证明分子量约 7... 详细信息

应用PCR技术从核糖核酸酶抑制因子 (ribonucleaseinhibitor ,RI)的克隆载体pT7 ri中扩增出ri片段 (1 5kb) ,亚克隆到融合表达载体pGEX 2T中 ,并转化感受态大肠杆菌BL2 1.异丙基半乳糖苷 (IPTG)诱导表达的GST RI经SDS PAGE证明分子量约 76kD ,表达量约占菌体蛋白总量 2 0 % .以包涵体形式表达的目的蛋白经尿素变性 ,透析复性得到的产物具有较高的抑制RNaseA的活性(15 0U ml) .复性的融合蛋白于 2 4℃经凝血酶作用 16h ,可被切割成 5 0kD的RI和 2 6kD的GST .

关键词：核糖核酸酶抑制因子融合表达复性克隆载体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

胶质母细胞瘤的治疗策略

大连医科大学学报 2020年第6期42卷 481-486页

作者：舒晓宏大连医科大学药学院药物化学教研室辽宁大连116044

胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)是一种破坏性极强、难以治愈的神经系统肿瘤。临床治疗以手术切除为主,并结合放疗、化疗及电场治疗等多种治疗手段。但GBM侵袭性强、手术难以彻底根除,故患者预后差、死亡率居高不下。因此,... 详细信息

胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)是一种破坏性极强、难以治愈的神经系统肿瘤。临床治疗以手术切除为主,并结合放疗、化疗及电场治疗等多种治疗手段。但GBM侵袭性强、手术难以彻底根除,故患者预后差、死亡率居高不下。因此,延长患者生存时间并提升其生存质量一直是GBM治疗的重要目标。本文将基于GBM治疗策略加以探讨。

关键词：胶质母细胞瘤手术切除放射治疗化学治疗电场治疗

大剂量顺铂所致大鼠急性肾损害过程中血浆内皮素-1与肾功能变化的关系

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

大连医科大学学报 2008年第6期30卷 524-526页

作者：李传刚舒晓宏姜妙娜刘文杨华李墨林大连医科大学附属第二医院泌尿外科辽宁大连116027 大连医科大学药学院辽宁大连116044 大连医科大学病理生理学教研室辽宁大连116044 大连医科大学

[目的]研究大剂量顺铂(cisplatin,DDP)所致大鼠急性肾功能衰竭过程中血浆内皮素(ET-1)与肾功能变化的关系。[方法]SD大鼠24只,依体重随机分为DDP用药后3、6、48 h组和NS对照组,每组6只。10 mg/kgDDP单次腹腔内注射,等量生理盐水对照。... 详细信息

[目的]研究大剂量顺铂(cisplatin,DDP)所致大鼠急性肾功能衰竭过程中血浆内皮素(ET-1)与肾功能变化的关系。[方法]SD大鼠24只,依体重随机分为DDP用药后3、6、48 h组和NS对照组,每组6只。10 mg/kgDDP单次腹腔内注射,等量生理盐水对照。随后观察并记录用药后大鼠的体重、血浆尿素氮和肌酐浓度、血浆ET-1含量、肾系数等变化。[结果]大剂量DDP用药后6 h大鼠体重明显降低;用药后48 h大鼠血浆尿素氮(BUN)和肌酐(Cre)明显高于对照组(P<0.05),出现肾功能衰竭;用药后72 h 66%的大鼠死亡。大剂量DDP用药后6 h,大鼠肾系数为11.3±1.2,与对照组9.0±0.8比较差异有显著性意义(P<0.05)。大剂量DDP用药后3 h大鼠血浆ET-1升至(213.68±28.3)ng/mL,与对照组(157.45±27.7)ng/mL比较差异具有显著性意义(P<0.01),DDP用药72 h后存活大鼠血浆ET-1亦明显高于对照组(P<0.05)。[结论]大剂量DDP所致的急性肾功能衰竭与血浆ET-1浓度的变化有关,但大鼠肾功能的变化与血浆ET-1的变化不一致,提示ET-1可能在DDP所致肾毒性损伤早期的发病机制中发挥重要作用。

关键词：大剂量顺铂急性肾功能衰竭血浆内皮素-1

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

白藜芦醇及其生物利用度

大连医科大学学报 2018年第3期40卷 193-197,204页

作者：舒晓宏大连医科大学药学院药物化学教研室辽宁大连116044

白藜芦醇为存在于葡萄等多种植物中的天然多酚类化合物,由于具有良好的生物活性而受到广泛关注。但白藜芦醇水溶性低,代谢迅速,生物利用度低而影响了白藜芦醇的发展应用。本文结合白藜芦醇的代谢特点,从协同给药、前体药物设计和制剂改... 详细信息

白藜芦醇为存在于葡萄等多种植物中的天然多酚类化合物,由于具有良好的生物活性而受到广泛关注。但白藜芦醇水溶性低,代谢迅速,生物利用度低而影响了白藜芦醇的发展应用。本文结合白藜芦醇的代谢特点,从协同给药、前体药物设计和制剂改良等角度对白藜芦醇的生物利用度研究现状进行探讨,以期为白藜芦醇生物利用度的提高提供参考。

关键词：白藜芦醇生物利用度协同给药前体药物制剂改良

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

抗核糖核酸酶抑制因子抗体的制备与纯化

细胞与分子免疫学杂志 2004年第5期20卷 572-574页

作者：舒晓宏李传刚张海涛陈俊霞田余祥于丽华崔秀云大连医科大学药物化学教研室辽宁大连116023 大连医科大学附属二院辽宁大连116023 上海肿瘤研究所上海200032 大连医科大学生物化学教研室辽宁大连116023

目的 :制备并纯化抗核糖核酸酶抑制因子 (RI)的抗体。方法 :从人胎盘中提取RI,经亲和层析纯化后免疫家兔制备RI抗体。用rProteinASepharoseFastFlow层析对抗RI抗体进行纯化 ,并用SDS PAGE、ELISA及Westernblot等进行鉴定。结果 :制备并... 详细信息

目的 :制备并纯化抗核糖核酸酶抑制因子 (RI)的抗体。方法 :从人胎盘中提取RI,经亲和层析纯化后免疫家兔制备RI抗体。用rProteinASepharoseFastFlow层析对抗RI抗体进行纯化 ,并用SDS PAGE、ELISA及Westernblot等进行鉴定。结果 :制备并纯化了抗RI抗体 ,经SDS PAGE分析达到了电泳纯。结论 :获得了效价高、特异性强、稳定性好的抗RI抗体。

关键词：核糖核酸酶抑制因子抗体亲和层析纯化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

四君子汤对小鼠膀胱癌化疗的减毒增效作用

中国中西医结合杂志 2005年第4期25卷 354-357页

作者：李传刚李墨林舒晓宏贾玉杰刘用楫齐清会大连医科大学附属第二医院外科大连116023 大连医科大学大连医科大学附属第一医院外科

目的探讨中药四君子汤对小鼠膀胱癌化疗的减毒增效作用。方法采用小鼠膀胱癌细胞接种于T 739小鼠皮下,动物随机分为8组:对照组,丝裂霉素C(mitomycinC ,MMC)常规剂量组,MMC小剂量组,四君子汤大剂量组,四君子汤中剂量组,四君子汤小剂量组... 详细信息

目的探讨中药四君子汤对小鼠膀胱癌化疗的减毒增效作用。方法采用小鼠膀胱癌细胞接种于T 739小鼠皮下,动物随机分为8组:对照组,丝裂霉素C(mitomycinC ,MMC)常规剂量组,MMC小剂量组,四君子汤大剂量组,四君子汤中剂量组,四君子汤小剂量组,联合用药(四君子汤大剂量+MMC常规剂量)A组,联合用药(四君子汤大剂量+MMC小剂量)B组;每组于接种癌细胞2 4h后分别给药;用药14天后分别检测各组小鼠的抑瘤率、腹腔巨噬细胞活性,观察小鼠荷瘤生存时间及治疗7天后血白细胞数的变化。结果四君子汤大剂量组的荷瘤小鼠生存时间与对照组比较差异有显著性(P 0. 0 5 ) ;MMC常规组的抑瘤率最高,但荷瘤生存时间与对照组比较差异无显著性(P >0 . 0 5 ) ;联合用药B组的小鼠荷瘤生存时间最长,达到(32 7±1 3)天,与其他各组比较差异均有显著性(P <0 . 0 5 ) ;联合用药B组除抑瘤率低于MMC常规组及联合用药A组,血白细胞数及巨噬细胞活性均优于MMC各剂量组及联合用药A组,差异均有显著性(P <0 . 0 5 )。结论四君子汤联合小剂量MMC化疗可以有效抑制小鼠膀胱肿瘤生长,具有增效减毒之作用。

关键词：减毒增效作用四君子汤膀胱癌化疗腹腔巨噬细胞活性联合用药生存时间 T739小鼠常规剂量白细胞数 MMC 显著性联合小剂量对照组大剂量抑瘤率细胞接种丝裂霉素荷瘤小鼠肿瘤生长增效减毒中剂量 B组 24h 癌细胞

β-榄香烯对人膀胱癌BIU87细胞磷脂代谢转换率及细胞脂膜流动性的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华医学杂志 2004年第5期84卷 416-417页

作者：李传刚李墨林舒晓宏刘用楫杨春明大连医科大学附属第二医院外科 116023 大连医科大学附属第一医院外科大连医科大学

磷脂是细胞膜的重要组分,肌醇磷脂在细胞的功能调控中发挥重要的作用,并与细胞增殖及肿瘤形成关系密切[1,2].β-榄香烯是中药温莪术的有效抗癌成分,临床应用对许多恶性肿瘤的疗效确切,我们已经证明其可诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡[3];... 详细信息

磷脂是细胞膜的重要组分,肌醇磷脂在细胞的功能调控中发挥重要的作用,并与细胞增殖及肿瘤形成关系密切[1,2].β-榄香烯是中药温莪术的有效抗癌成分,临床应用对许多恶性肿瘤的疗效确切,我们已经证明其可诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡[3];本研究旨在进一步研究其对BIU-87细胞肌醇磷脂代谢转换及脂膜流动性的影响,探索凋亡的分子机制,结果报道如下。

关键词： β-榄香烯膀胱癌 BIU-87细胞磷脂代谢转换率细胞脂膜流动性细胞增殖