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Ag/Cys介导的核酸探针级联荧光信号免疫检测法测定玉米和大米中黄曲霉毒素B

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中国粮油学报 2024年

作者：李亚楠解立斌陈佳韩爱云张文娜剧慧栋冯佩张媛媛胡连霞石家庄学院化工学院石家庄市食品工程技术创新中心石家庄市疾病预防控制中心理化检验科

以葡萄糖氧化酶（GOx）催化Ag+/Cys介导的富G-ssDNA/Tb3+核酸探针体系引发荧光强度变化为方法学基础，开发了一种新型ELISA双重级联荧光信号放大系统，对葡萄糖氧化酶具有高的灵敏度响应（低至0.05μg/mLGOx）。将此体系与对GOx负载的... 详细信息

以葡萄糖氧化酶（GOx）催化Ag+/Cys介导的富G-ssDNA/Tb3+核酸探针体系引发荧光强度变化为方法学基础，开发了一种新型ELISA双重级联荧光信号放大系统，对葡萄糖氧化酶具有高的灵敏度响应（低至0.05μg/mLGOx）。将此体系与对GOx负载的纳米微球为信号探针的磁分离免疫体系相结合建立了一种用于食品中AFB1的高灵敏的双重级联信号放大的荧光免疫检测方法。该方法对AFB1的检出限为0.05 ng/mL，在加标的玉米和大米样品中，添加回收试验结果表明，AFB1的回收率在85.09% ～ 105.2%之间，变异系数（CV）值为6.8% ～ 15.7%。该方法成功应用于玉米粉质控样品中AFB1的检测，表明其具有良好的应用前景。

关键词：黄曲霉毒素B (AFB ) 富G单链DNA 铽离子(Tb ) 抗体荧光免疫检测

桑葚果实、桑葚干酒和桑葚利口酒中酚类化合物的高效液相色谱串联电喷雾二级质谱分析及其抗氧化活性比较

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食品与发酵工业 2024年第14期50卷 246-252页

作者：张文娜魏萌韩爱云陈佳胡连霞解立斌李亚楠白佳敏剧慧栋陈永民石家庄学院化工学院河北石家庄050035 石家庄市食品工程技术创新中心河北石家庄050035

为了解桑葚果酒和桑葚果实在酚类化合物的种类、含量及抗氧化活性之间的差异,该研究以桑葚果实、桑葚干酒和桑葚利口酒为试材,采用高效液相色谱串联电喷雾二级质谱(high performance liquid chromatography-electron spray ionization-m... 详细信息

为了解桑葚果酒和桑葚果实在酚类化合物的种类、含量及抗氧化活性之间的差异,该研究以桑葚果实、桑葚干酒和桑葚利口酒为试材,采用高效液相色谱串联电喷雾二级质谱(high performance liquid chromatography-electron spray ionization-mass spectrometry/mass spectrometry,HPLC-ESI-MS/MS)对酚类化合物进行定性定量分析。HPLC-ESI-MS/MS分析结果表明,在桑葚果实、桑葚干酒和桑葚利口酒中均检测到花青素-3-葡萄糖苷和花青素-3-芸香糖苷,而花葵素-3-芸香糖苷和4-丙酮酸-花青素-3-葡萄糖苷分别只在桑葚干酒和桑葚利口酒中被检测到。同时,桑葚干酒和桑葚利口酒中花青素-3-葡萄糖苷和花青素-3-芸香糖苷的含量均显著低于桑葚果实。此外,在桑葚果实中鉴定的8种非花色苷多酚中,仅有4种存在于桑葚干酒和桑葚利口酒中。相较于桑葚果实,桑葚干酒和利口酒中原儿茶素、二氢槲皮素和槲皮素的含量显著升高。桑葚果实DPPH自由基清除能力介于桑葚干酒和利口酒之间。综上,桑葚果酒和桑葚果实中酚类化合物的种类、含量及抗氧化活性之间差异显著。

关键词：桑葚果实桑葚果酒酚类化合物 DPPH自由基清除能力

草果甲醇溶出物抑制α-葡萄糖苷酶活性及调节血糖作用

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食品工业科技 2022年第8期43卷 382-388页

作者：解立斌陈佳剧慧栋胡连霞韩爱云俞龙泉石家庄学院化工学院河北石家庄050035

目的:研究草果甲醇溶出物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及对小鼠高血糖的调节作用。方法:采用4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷法(PNPG),以阿卡波糖为阳性对照,进行α-葡萄糖苷酶体外抑制试验,评估草果甲醇溶出物的α-葡萄糖苷酶抑制率。用高脂... 详细信息

目的:研究草果甲醇溶出物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及对小鼠高血糖的调节作用。方法:采用4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷法(PNPG),以阿卡波糖为阳性对照,进行α-葡萄糖苷酶体外抑制试验,评估草果甲醇溶出物的α-葡萄糖苷酶抑制率。用高脂饲料喂养小鼠构建异常血糖小鼠模型,在高脂饲料基础上,分别添加100、200 mg/kg的草果甲醇溶出物干预6周,评估草果甲醇溶出物对小鼠空腹血糖、葡萄糖耐量以及胰岛素抵抗的影响。结果:当草果甲醇溶出物溶液浓度为500 mg/L时,对α-葡萄糖苷酶的抑制率达到63.72%。草果甲醇溶出物对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度(IC_(50))为0.145 mg/mL。在经灌胃低、高剂量组的草果甲醇溶出物干预2周后,小鼠空腹血糖开始降低并维持稳定,草果低、高剂量组葡萄糖耐量曲线下面积(AUC)在干预6周后均低于模型组(P<0.05)。结论:草果甲醇溶出物可明显抑制α-葡萄糖苷酶活性,并能明显改善小鼠葡萄糖耐量水平。

关键词：草果甲醇溶出物 α-葡萄糖苷酶血糖

行气开郁散结法防治冠心病PCI术后再狭窄的临床观察

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中国中医急症 2023年第7期32卷 1250-1253页

作者：晏君胡连霞张云波海南省三亚市人民医院四川大学华西三亚医院海南三亚572000 海南医学院第一附属医院海南海口570102

目的观察行气开郁散结法在防治冠心病经皮冠状动脉介入术(PCI)后再狭窄(气滞血瘀证)的临床疗效并探讨可能作用机制。方法将112例患者随机分为治疗组与对照组各56例,对照组给予西医常规治疗,治疗组联合应用疏肝柴胡散合桃红四物汤加减... 详细信息

目的观察行气开郁散结法在防治冠心病经皮冠状动脉介入术(PCI)后再狭窄(气滞血瘀证)的临床疗效并探讨可能作用机制。方法将112例患者随机分为治疗组与对照组各56例,对照组给予西医常规治疗,治疗组联合应用疏肝柴胡散合桃红四物汤加减治疗。治疗6个月,比较两组中医证候积分、血清炎性因子、血管内皮功能、临床疗效、主要心血管事件及再狭窄发生率。结果两组治疗后,患者恼怒多言等中医证候积分与治疗前比较均降低(均P <0.05),且治疗组患者恼怒多言、胸肋胀闷、胁下痞块、烦躁不安、心悸头痛、中医证候总分低于同期对照组(均P <0.05)。两组治疗后患者血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)均低于治疗前,白细胞介素-10(IL-10)则高于治疗前(均P <0.05);且治疗组血清hs-CRP、IL-6、TNF-α均低于同期对照组,IL-10则高于同期对照组(均P <0.05)。两组治疗后血清内皮素-1(ET-1)、血栓素B2(TXB2)均低于治疗前,而一氧化氮(NO)、6-酮-前列腺素(6-keto-PGF1α)则高于治疗前(均P <0.05);且治疗组血清ET-1、TXB2低于同期对照组,NO、6-keto-PGF1α高于同期对照组(均P <0.05)。治疗组心电图总有效率90.74%高于对照组的75.00%,治疗组中医证候总有效率94.44%高于对照组的80.77%;治疗组主要心血管事件发生率14.81%、再狭窄率5.56%均分别低于对照组32.69%和19.23%(均P <0.05)。结论行气开郁散结法能够提高冠心病PCI术再狭窄(气滞血瘀证)患者临床疗效,减少主要心血管事件及再狭窄发生率,可能与拮抗炎症反应、调节血管内皮功能等因素有关。

关键词：冠心病经皮冠状动脉介入术再狭窄行气开郁散结法炎性因子血管内皮功能

盾叶冠心宁片治疗稳定型心绞痛（气滞血瘀证）的临床研究

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盾叶冠心宁片治疗稳定型心绞痛（气滞血瘀证）的临床研究

作者：胡连霞南京中医药大学

学位级别：硕士

目的:评价盾叶冠心宁片治疗气滞血瘀证稳定型心绞痛患者的疗效性和安全性,为其临床应用提供依据。方法:利用随机数字表法,将34例符合稳定型心绞痛(气滞血瘀证)诊断标准的患者分为试验组(西医标准治疗+盾叶冠心宁片)和对照组(西医标准治... 详细信息

目的:评价盾叶冠心宁片治疗气滞血瘀证稳定型心绞痛患者的疗效性和安全性,为其临床应用提供依据。方法:利用随机数字表法,将34例符合稳定型心绞痛(气滞血瘀证)诊断标准的患者分为试验组(西医标准治疗+盾叶冠心宁片)和对照组(西医标准治疗),试验组在其西医标准化治疗保持不变的基础上加用盾叶冠心宁片2片,3次/日,疗程1个月;对照组保持其西医标准化治疗不变。观察用药前后患者的中医证候积分、心绞痛发作次数和疗效、心电图缺血改变、硝酸甘油使用量和停减率、血脂及同型半胱氨酸(HCY)水平的变化。结果:1.本试验共完成32例随访;2.在中医症候积分疗效、心绞痛发作次数、硝酸甘油使用量及停减率方面,试验组与对照组差异有统计学意义(P0.05);但试验组心绞痛疗效率及心电图有效率均高于对照组,其血脂及HCY水平治疗后较治疗前有下降趋势,说明盾叶冠心宁片有改善心绞痛、心电图疗效的趋势,且有降低心绞痛患者血脂及HCY水平的趋势。结论:1.盾叶冠心宁片能有效改善稳定型心绞痛(气滞血瘀型)患者中医症候积分、硝酸甘油停减率,减少患者硝酸甘油的使用量及心绞痛发作次数。2.盾叶冠心宁片对稳定型心绞痛(气滞血瘀型)患者心绞痛疗效、心电图改变、血脂及HCY水平有改善趋势。3.盾叶冠心宁片治疗稳定型心绞痛(气滞血瘀型)患者安全可靠,临床值得推广。

关键词：盾叶冠心宁片稳定型心绞痛气滞血瘀证临床研究

环介导等温核酸扩增（LAMP）技术检测婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的研究

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环介导等温核酸扩增（LAMP）技术检测婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的...

作者：胡连霞河北农业大学

学位级别：硕士

2002年国际食品微生物标准化委员会(ICMSF)把阪崎肠杆菌列为“严重危害特定人群,危害生命或慢性实质性后遗症或长期影响”的一种致病菌。婴儿配方奶粉是其最主要的传播途径,而且婴儿配方奶粉中微量的阪崎肠杆菌污染(<3CFU/100g)也能导... 详细信息

2002年国际食品微生物标准化委员会(ICMSF)把阪崎肠杆菌列为“严重危害特定人群,危害生命或慢性实质性后遗症或长期影响”的一种致病菌。婴儿配方奶粉是其最主要的传播途径,而且婴儿配方奶粉中微量的阪崎肠杆菌污染(<3CFU/100g)也能导致感染的发生,因此检测阪崎肠杆菌的方法是否灵敏、特异及快速至关重要。目前对阪崎肠杆菌的检测方法主要有FDA推荐的传统检测方法,免疫学方法和PCR方法。传统检测方法操作繁琐,检测时间长,而且灵敏度较低;免疫学方法的特异性和灵敏度也不理想;PCR方法敏感、快速,但由于需要昂贵的仪器设备、繁琐的电泳过程,而使其难以在基层普及和推广。采用环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,简称LAMP)技术,检测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌,灵敏度高,特异性强,检测方法简便,耗时短而且检测成本低,能够在基层普及和推广。针对阪崎肠杆菌(ATCC29544)GenBank中(基因号AY702093)16S-23S rRNA的保守序列,运用在线引物设计软件(https://primerexplorer.jp/lamp3.0.0/index.html)设计LAMP引物。对反应时间、反应温度、镁离子浓度等扩增条件进行优化,确定25μL的LAMP反应体系为:内引物(FIP和BIP)各1.2μM,外引物(F3和B3)各0.2μM,环引物(LF和LB)各0.6μM,2.5 mM dNTP,1.6 M甜菜碱,4 mM MgSO4,10×Bst DNA聚合酶反应缓冲液,8U的Bst DNA聚合酶大片段,3μL DNA模板和用灭菌双蒸水补足体系。LAMP反应过程是首先在64℃水浴锅中反应20min,然后将其放入80℃水浴锅中,水浴10min终止反应,通过肉眼观察有无白色焦磷酸镁沉淀,即可判断是否发生了LAMP反应。为了比较LAMP检测阪崎肠杆菌灵敏度和人工污染检出限,以PCR方法作对照。PCR反应的引物是改良LAMP的两条外引物(F3和B3)。结果表明,改良LAMP检测阪崎肠杆菌的检出限为0.101CFU/mL,人工污染阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉的检出限为1.100CFU/g。采用试剂盒提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时1h。对照PCR耗时3h,检测阪崎肠杆菌的检出限为101CFU/mL,人工污染阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉的检出限为1100CFU/g。改良LAMP的灵敏度是PCR的1000倍。对普通LAMP和改良LAMP以及改良LAMP自身加环引物和未加环引物进行了检测阪崎肠杆菌纯培养和人工污染检出限的比较,结果表明,改良LAMP的灵敏度是普通LAMP和未加环引物改良LAMP的10倍。初步研究了6种模板制备方法对LAMP检测婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的影响。研究表明LAMP方法对制备模板DNA的要求不高。通过对实际样品进行检测,将本方法与行业标准SN/T1632.1-2005方法进行比较,确定LAMP方法敏感性为100%,特异性为98.15%,符合率为98.25%。研究表明LAMP,将成为可以替代PCR的核酸扩增新技术,为快速检测食源性致病菌构建了一个技术平台。

关键词：环介导等温扩增 LAMP 检测阪崎肠杆菌婴儿配方奶粉

实时荧光单引物等温扩增(SPIA)技术检测大肠杆菌O157的方法研究

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现代食品科技 2016年第2期32卷 317-322,316页

作者：李瑞王建昌李静胡连霞张伟河北农业大学食品科技学院河北保定071000

建立一种快速、灵敏的食品中肠出血性大肠杆菌O157的检测方法。以大肠杆菌O157的特异性基因(rfbE)为靶序列,设计相应的RNA/DNA组合引物和链终止序列,优化引物浓度、Mg2+浓度、温度等反应条件,建立实时荧光单引物等温扩增(Real Time Fluo... 详细信息

建立一种快速、灵敏的食品中肠出血性大肠杆菌O157的检测方法。以大肠杆菌O157的特异性基因(rfbE)为靶序列,设计相应的RNA/DNA组合引物和链终止序列,优化引物浓度、Mg2+浓度、温度等反应条件,建立实时荧光单引物等温扩增(Real Time Fluorescence Single Primer Isothermal Amplification,实时荧光SPIA)检测大肠杆菌O157的方法,并对该方法的特异性、灵敏度以及人工污染检出限进行检测。确定了实时荧光SPIA法的最适反应条件,该方法可以在55 min内完成检测工作,除大肠杆菌O157外,其他细菌均未产生特异性荧光扩增曲线,而且实时荧光SPIA检测大肠杆菌O157的灵敏度为2.0 CFU/m L,对猪肉人工污染样品中大肠杆菌O157的检出限是4.0 CFU/g。实时荧光SPIA方法检测大肠杆菌O157具有耗时短,灵敏度高,特异性强,方法简便的优越性,为检测食源性致病菌构建了一个技术平台。

关键词：大肠杆菌O157 rfbE基因检测

单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光SPIA方法的建立

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食品工业科技 2017年第16期38卷 275-279,308页

作者：王建昌胡连霞孙晓霞李静河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心河北石家庄050051

以单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,L.monocytogenes)hly A基因为靶序列,设计5'端为RNA序列,3'端为DNA序列的嵌合引物和链终止Blocker序列,经过优化,建立实时荧光单引物等温扩增(Real-time fluorescence SPIA)方法,进行特异性、检出限实验,并对不同DNA提取方法进行比较。结果显示,确定荧光染料SPIA法的最佳反应温度为58℃,反应30 min,引物特异性良好,只有4株不同来源的L.monocytogenes DNA产生典型的S型荧光扩增曲线。对L.monocytogenes纯培养DNA的检出限为3.6×10~1fg/μL,相应菌液浓度为1.2×10~1CFU/m L;Realtime fluorescence SPIA检测试剂盒法、水煮法、溶菌酶-蛋白酶K法、饱和酚提取法四种方法提取DNA,均产生典型的扩增曲线,Ct值没有明显差异。对人工添加猪肉火腿样品中的L.monocytogenes,采用水煮法提取DNA的检出限为1.1×10~2CFU/g。结果表明,所建立的L.monocytogenes的Real-time fluorescence SPIA新型等温扩增方法,特异性强、灵敏度高、不受DNA纯度的影响、快速、简便。

关键词：单引物等温扩增荧光单核细胞增生李斯特氏菌 hly A基因

副溶血性弧菌实时荧光单引物等温扩增方法的建立

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食品与生物技术学报 2016年第11期35卷 1212-1218页

作者：王建昌胡连霞段永生李静王金凤河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心河北石家庄050051

以副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)gyr B基因特异序列为靶序列,设计RNA-DNA组合引物和链终止序列,优化反应体系,建立实时荧光单引物等温扩增(Real-time fluorescence single primer isothermal amplification,实时荧光SPIA)检测副溶血性弧菌的方法。实时荧光SPIA在40 min反应时间内,对3株副溶血性弧菌和16株其他食源性致病菌进行实时荧光SPIA检测,结果表明除3株副溶血性弧菌外,其他细菌均未扩增出荧光曲线。进一步研究表明,实时荧光SPIA检测副溶血性弧菌纯培养DNA的灵敏度为8.2 fg/μL,对副溶血性弧菌菌悬液的检测灵敏度为13.5 CFU/m L;对鳕鱼、海蟹、牡蛎和咸鸭蛋等4种模拟样品中副溶血性弧菌的检出限均为14.7 CFU/g。研究结果表明,实时荧光SPIA检测副溶血性弧菌灵敏度高,特异性强,耗时短,方法简便。

关键词：实时荧光单引物等温扩增副溶血性弧菌 gyr B基因