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携带psm-mec基因的耐甲氧西林表皮葡萄球菌产细菌生物膜的能力研究

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临床检验杂志 2014年第9期32卷 700-702页

作者：杨永长陈亮肖代雯喻华刘华黄文芳四川省医学科学院.四川省人民医院检验科成都610072

目的探讨耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)携带psm-mec基因的情况及产细菌生物膜(biofilm,Bf)的能力,为进一步分析psm-mec与Bf的关系奠定基础。方法收集临床分离并经全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌84株,通过PCR扩增esp和mecA... 详细信息

目的探讨耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)携带psm-mec基因的情况及产细菌生物膜(biofilm,Bf)的能力,为进一步分析psm-mec与Bf的关系奠定基础。方法收集临床分离并经全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌84株,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定和区分甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE)和MRSE,常规PCR检测psm-mec基因确定携带psm-mec菌株,PCR扩增fudoh基因及测序检测psm-mec上游有无基因突变,96孔培养板半定量法评估菌株产Bf的能力。结果 84株表皮葡萄球菌中esp基因均阳性,mecA基因阳性64株,故MRSE为64株(76.2%)。MRSE中psm-mec基因的携带率为39.1%(25/64)。Bf半定量检测发现,25株psm-mec阳性MRSE中产Bf 20株(80%),39株psm-mec阴性MRSE中产Bf13株(33.33%),差异有统计学意义(χ2=13.28,PA)。结论 psm-mec广泛存在于临床分离的MRSE中,绝大部分携带psm-mec的MRSE具有Bf形成能力。

关键词： psm-mec 耐甲氧西林表皮葡萄球菌生物被膜

利用Au蛋白芯片技术快速鉴定铜绿假单胞菌的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第5期31卷 462-466页

作者：解春宝肖代雯杨永长姜伟刘华黄文芳泸州医学院临床医学院 646000 四川省医学科学院·四川省人民医院检验科成都610072

目的利用Au蛋白芯片建立铜绿假单胞菌蛋白指纹图谱诊断模型，为铜绿假单胞菌感染快速鉴定奠定基础。方法收集临床分离鉴定的铜绿假单胞菌64株及对照菌199株，随机分成训练组和验证组。运用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术及Au蛋... 详细信息

目的利用Au蛋白芯片建立铜绿假单胞菌蛋白指纹图谱诊断模型，为铜绿假单胞菌感染快速鉴定奠定基础。方法收集临床分离鉴定的铜绿假单胞菌64株及对照菌199株，随机分成训练组和验证组。运用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术及Au蛋白芯片（proteinchip goldenarray）检测铜绿假单胞菌及对照菌的蛋白表达，用Ciphergen Proteinchip和BioMarker Wizard软件自动采集数据，筛选铜绿假单胞菌特征性蛋白。结果经BioMarker Patterns软件建立分类树模型。利用该模型对29株铜绿假单胞菌和64株对照菌进行盲法验证。结果在相对分子质量3000～20000范围内共检测到80个蛋白峰，其中具有统计学差异的蛋白峰58个（P〈0．01）。BioMarker Patterns软件判别分析，择优选出质荷比（M／Z）为14045．2的蛋白质峰建立铜绿假单胞菌分类树模型。验证结果表明其对铜绿假单胞菌诊断的灵敏度和特异度分别为96．55％（28／29）、100％（64／64）。结论利用Au蛋白芯片技术可快速鉴定铜绿假单胞菌。

关键词：铜绿假单胞菌蛋白指纹图谱 Au蛋白芯片

临床分离携带psm-mec基因耐甲氧西林表皮葡萄球菌的SCCmec型别分析

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西安交通大学学报（医学版） 2017年第2期38卷 257-260页

作者：杨永长肖代雯姜伟黄文芳四川省医学科学院.四川省人民医院检验科四川成都610072

目的探讨临床分离携带psm-mec基因耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)的SCCmec型别。方法收集临床分离并经全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌165株,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定MRSE,扩增psm-mec、fudoh和p221片段鉴定携带psm... 详细信息

目的探讨临床分离携带psm-mec基因耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)的SCCmec型别。方法收集临床分离并经全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌165株,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定MRSE,扩增psm-mec、fudoh和p221片段鉴定携带psm-mec菌株。采用多重PCR对携带psm-mec基因的MRSE的mec、ccr和SCCmec进行分型。结果 138株MRSE菌株中,29株携带psm-mec基因,携带率为17.58%。多重PCR对mec和ccr分型结果显示,携带psm-mec基因MRSE均为Class A mec,但ccr型别存在明显的多样性。多重PCR对SCCmec分型结果显示,所有菌株均可扩增出Ⅱ型和/或Ⅲ型SCCmec条带,且为混合型别。结论临床分离携带psm-mec基因的MRSE的SCCmec具有同源性,以含Class A mec的携带Ⅱ型和/或Ⅲ型SCCmec为主。

关键词： SCCmec型别 MRSE psm-mec

Preparation and Identification of scFv and bsFv against Transferrin Receptor

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2008年第6期28卷 621-625页

作者：刘静肖代雯周小鸥文雪代红王志华沈昕代维杨道锋沈关心 Department of Immunology Tongji Medical CollegeHuazhong University of Science and Technology Clinical Laboratory Sichuan Academy of Medical Sciences and Sichuan Provincial People's Hospital Department of Microbiology Jiujiang Medical College Department of Infectious Diseases Tongji HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and Technology

To obtain single chain variable fragment （scFv） and bivalent single chain variable fragment （bsFv） against transferrin receptor, up-stream and down-stream primers were designed according to the complementary sequences of FR1 region of variable heavy （VH） and FR4 of variable light （VL）, respectively, which contained inter-linker G4S and the restriction endonuclease SfiI, AscI and NotI. Two pieces of scFv fragments were first amplified through PCR and then inserted into plasmid pAB1, which could express scFv protein once induced by IPTG in the host bacteria. To express scFv and bsFv, E. coli TG1 was cultured in LB broth and was induced by IPTG. The restriction enzyme digestion map and DNA sequencing demonstrated that scFv and bsFv genes were successfully inserted into the expression plasmid. SDS-PAGE and Western blotting revealed the protein band at 35kD and 60kD, which were consistent with the molecular weight of scFv and bsFv respectively. Flow cytometry showed that scFv and bsFv harbored the specific binding activity with TfR expressed in various tumor cells, and the avidity of bsFv was higher than that of the parent scFv.

关键词： gene sequence G4S linker scFv bsFv transferrin receptor

碳青酶烯类药物敏感性降低的阴沟肠杆菌分子特征研究

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中华传染病杂志 2014年第5期32卷 263-266页

作者：解春宝肖代雯喻华杨永长刘华姜伟黄文芳四川省医学科学院四川省人民医院检验科成都610072

阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae,***）属于肠杆菌科细菌,广泛存在于自然界中,是肠道正常菌种之一.该菌是医院感染重要的病原体.随着碳青霉烯类抗菌药物的广泛应用,临床出现对该类抗菌药物敏感性降低的阴沟肠杆菌,这给临床医师抗菌药... 详细信息

阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae,***）属于肠杆菌科细菌,广泛存在于自然界中,是肠道正常菌种之一.该菌是医院感染重要的病原体.随着碳青霉烯类抗菌药物的广泛应用,临床出现对该类抗菌药物敏感性降低的阴沟肠杆菌,这给临床医师抗菌药物的选择带来了很大的挑战.本研究对四川省人民医院检验科分离出的对碳青霉烯类抗菌药物敏感性降低的阴沟肠杆菌菌珠分子特征进行研究,现报道如下.

关键词：阴沟肠杆菌敏感性降低碳青霉烯类分子特征类药物抗菌药物肠杆菌科细菌临床医师

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尿蛋白标志物模型诊断糖尿病肾病的初步研究

中国糖尿病杂志 2009年第6期17卷 437-439页

作者：姜伟杨永长肖代雯黄波胡琦黄文芳四川省医学科学院四川省人民医院检验科成都610072 重庆医科大学检验系

目的探索基于Au蛋白芯片的尿蛋白标志物模型早期快速诊断糖尿病肾病(DN)的应用价值。方法应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及Au芯片检测86例DN患者、40例糖尿病(DM)患者及55名健康人(对照组)尿蛋白质谱。获得的... 详细信息

目的探索基于Au蛋白芯片的尿蛋白标志物模型早期快速诊断糖尿病肾病(DN)的应用价值。方法应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及Au芯片检测86例DN患者、40例糖尿病(DM)患者及55名健康人(对照组)尿蛋白质谱。获得的谱图用Biomaker Wizard3.1软件筛选差异蛋白,通过BPS软件建立决策树辨别分析模型,评价其临床诊断价值。部分筛选的差异蛋白通过比对标准蛋白质谱数据进行鉴定。结果DN患者与对照组尿差异蛋白质峰有37个(P<0.05),BPS筛选66 916质荷比(m/z)蛋白建立的模型诊断DN敏感度100%,特异度97.78%。对DM和DN患者尿蛋白质谱图分析后得到24个差异蛋白质峰(P<0.05),BPS筛选4 008、11 619、66 916 m/z蛋白建立的模型区分两者的灵敏度和特异度均为100%。比对标准蛋白质谱数据,DN患者尿中11 619、23529、66 916、79 378 m/z蛋白,可能分别为β_2-微球蛋白、α_1-微球蛋白、白蛋白、转铁蛋白。结论利用SELDI及Au芯片检测尿标志蛋白在鉴别蛋白尿来源、DN快速诊断及肾损害评估中具有重要应用价值。

关键词：糖尿病肾病蛋白标志物临床研究患者

表面增强激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定血液大肠埃希菌感染

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临床检验杂志 2013年第5期31卷 349-352页

作者：肖代雯喻华杨永长刘华解春宝张航烽钟敏黄文芳四川省医学科学院.四川省人民医院检验科成都610072 泸州医学院临床医学院四川泸州646000 重庆医科大学检验医学院重庆400016

目的探讨用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)快速鉴定引起血流感染的大肠埃希菌。方法用SELDI-TOF-MS建立大肠埃希菌的蛋白质指纹模型。临床分离的168株菌经SELDI-TOF-MS检测,数据与大肠埃希菌模型进行相似度比较,对该... 详细信息

目的探讨用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)快速鉴定引起血流感染的大肠埃希菌。方法用SELDI-TOF-MS建立大肠埃希菌的蛋白质指纹模型。临床分离的168株菌经SELDI-TOF-MS检测,数据与大肠埃希菌模型进行相似度比较,对该模型进行评价。SELDI-TOF-MS检测88株微生物血培养分析仪阳性报警的革兰阴性杆菌,与大肠埃希菌蛋白质指纹模型进行相似度比较,对其中的大肠埃希菌进行鉴定。结果 19株建模组菌株经PCR及测序鉴定均为大肠埃希菌,并建立了该菌的蛋白质指纹模型;用168株验证组菌株对该模型进行验证,对大肠埃希菌鉴定的符合率为100%(60/60);用该模型对88株引起血流感染的革兰阴性杆菌进行鉴定,鉴定结果与传统微生物学鉴定结果具有较高的一致性(k=0.905)。结论 SELDI-TOF-MS可快速鉴定引起血流感染的大肠埃希菌,为血流感染细菌的快速诊断提供了新技术。

关键词：大肠埃希菌血流感染表面增强激光解析电离飞行时间质谱

多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因和同源性分析

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临床检验杂志 2012年第5期30卷 367-370页

作者：钟敏黄文芳刘华姜伟杨永长肖代雯喻华闫慧罗春丽重庆医科大学检验医学院重庆400016 四川省医学科学院.四川省人民医院检验科成都610072

目的分析多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因型和医院感染鲍曼不动杆菌同源性。方法收集四川省人民医院重症监护病房(ICU)分离的鲍曼不动杆菌复合群76株,用OXA-51基因扩增法鉴定。用Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统进行药敏试... 详细信息

目的分析多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因型和医院感染鲍曼不动杆菌同源性。方法收集四川省人民医院重症监护病房(ICU)分离的鲍曼不动杆菌复合群76株,用OXA-51基因扩增法鉴定。用Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统进行药敏试验,同时用PCR技术分析其产碳青霉烯酶相关耐药基因类型,对其中确定为医院感染的19株鲍曼不动杆菌和5株物体表面的鲍曼不动杆菌用重复序列聚合酶链反应(Rep-PCR)的DiversiLab系统进行同源性分析。结果 76株菌株均显示多重耐药,全部检出携带OXA-51、OXA-23基因,未检出OXA-24、OXA-58、VIM、IMP-1、IMP-4、SIM、NDM-1耐药基因。DiversiLab系统将19株医院感染鲍曼不动杆菌和5株物体表面的鲍曼不动杆菌分为4个亲缘性不同的克隆组及9个亚克隆组。结论该院鲍曼不动杆菌多重耐药现象严重,OXA-23基因可能是其耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。克隆组1为该院鲍曼不动杆菌医院感染的主要流行株。

关键词：鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因多重耐药同源性分析

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样品沉淀方法对线粒体蛋白指纹图谱分析影响

中国公共卫生 2011年第9期27卷 1119-1121页

作者：韵雪雪杨永长姜伟肖代雯刘华闫慧黄文芳四川省医学科学院四川省人民医院检验科成都610072 重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室

目的比较不同方法沉淀乳腺癌线粒体蛋白对Au芯片分析的影响,为Au芯片研究亚细胞蛋白奠定基础。方法提取体外培养乳腺癌细胞MCF-7的线粒体蛋白,分别采用丙酮沉淀,三氯醋酸-丙酮（TCA-丙酮）沉淀,饱和（NH4）2SO4沉淀处理样品,点样Au蛋白... 详细信息

目的比较不同方法沉淀乳腺癌线粒体蛋白对Au芯片分析的影响,为Au芯片研究亚细胞蛋白奠定基础。方法提取体外培养乳腺癌细胞MCF-7的线粒体蛋白,分别采用丙酮沉淀,三氯醋酸-丙酮（TCA-丙酮）沉淀,饱和（NH4）2SO4沉淀处理样品,点样Au蛋白芯片,表面增强激光解析蛋白飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）分析蛋白指纹图谱,Biomaker Wizard Software分析软件收集数据。结果每种方法均重复试验20次,在质荷比（m/z）2000~100 000范围内检测蛋白点数目,统计结果分别为TCA-丙酮沉淀39个,丙酮沉淀71个,饱和（NH4）2SO4沉淀14个;选择8.6、10.0、11.3、14.0和15.6kD 5个含量较高的蛋白作为标志,采用q检验进行两两分析,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论对分子量（Mr）〈11 kD的蛋白,丙酮沉淀处理可以获得较好的蛋白指纹图谱,对Mr〉11 kD的蛋白TCA-丙酮沉淀处理结果好,综合使用2种方法分别处理样品上样Au芯片可以获得好的线粒体蛋白分析结果。

关键词： Au芯片线粒体蛋白丙酮沉淀三氯醋酸-丙酮沉淀饱和(NH4)2SO4沉淀