样品沉淀方法对线粒体蛋白指纹图谱分析影响

作     者：韵雪雪 杨永长 姜伟 肖代雯 刘华 闫慧 黄文芳 

作者机构：四川省医学科学院四川省人民医院检验科成都610072 重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室 

出 版 物：《中国公共卫生》 (Chinese Journal of Public Health)

年 卷 期：2011年第27卷第9期

页      面：1119-1121页

学科分类：100405[医学-卫生毒理学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家"863"计划(2006AA02090408) 

主　　题：Au芯片 线粒体蛋白 丙酮沉淀 三氯醋酸-丙酮沉淀 饱和(NH4)2SO4沉淀 

摘      要：目的比较不同方法沉淀乳腺癌线粒体蛋白对Au芯片分析的影响,为Au芯片研究亚细胞蛋白奠定基础。方法提取体外培养乳腺癌细胞MCF-7的线粒体蛋白,分别采用丙酮沉淀,三氯醋酸-丙酮（TCA-丙酮）沉淀,饱和（NH4）2SO4沉淀处理样品,点样Au蛋白芯片,表面增强激光解析蛋白飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）分析蛋白指纹图谱,Biomaker Wizard Software分析软件收集数据。结果每种方法均重复试验20次,在质荷比（m/z）2000~100 000范围内检测蛋白点数目,统计结果分别为TCA-丙酮沉淀39个,丙酮沉淀71个,饱和（NH4）2SO4沉淀14个;选择8.6、10.0、11.3、14.0和15.6kD 5个含量较高的蛋白作为标志,采用q检验进行两两分析,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论对分子量（Mr）〈11 kD的蛋白,丙酮沉淀处理可以获得较好的蛋白指纹图谱,对Mr〉11 kD的蛋白TCA-丙酮沉淀处理结果好,综合使用2种方法分别处理样品上样Au芯片可以获得好的线粒体蛋白分析结果。