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作者：罗衍波南方医科大学

学位级别：硕士

骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cell,BMSCs)具有极强的自我复制和多向分化潜能,来源广泛,易于获取并且具有低免疫源性,可将BMSCs用于细胞移植治疗,具有非常重要的理论研究意义和临床价值。近年来的研究提示,骨髓间充质干细胞... 详细信息

骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cell,BMSCs)具有极强的自我复制和多向分化潜能,来源广泛,易于获取并且具有低免疫源性,可将BMSCs用于细胞移植治疗,具有非常重要的理论研究意义和临床价值。近年来的研究提示,骨髓间充质干细胞能转分化为肝细胞,这一现象为临床上应用BMSCs移植治疗肝损伤和急慢性肝功能衰竭展示了一个可喜的前景。现已证实,在体外培养条件下BMSCs可由肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)等细胞因子诱导向肝细胞分化,并可释放多种肝细胞因子,但对BMSCs体内移植后能否向具肝细胞功能的细胞分化并对受损肝脏起修复作用的研究则鲜见报道。因此,本课题将大鼠骨髓中分离获得的BMSCs在体外纯化、扩增后通过门静脉移植入肝损伤大鼠体内,观察BMSCs移植后在肝脏内的分布及受损肝脏修复情况,为临床应用提供理论依据。第一部分大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养与签定目的建立大鼠骨髓间充质干细胞分离和培养扩增的方法,同时对其生物学特性进行研究,为BMSCs作为种子细胞治疗临床疾病提供理论依据。方法联合应用密度梯度离心法和贴壁细胞培养法进行分离获取大鼠BMSCs,应用流式细胞仪测定细胞表面标记物来鉴定所培养的细胞是否为BMSCs;在倒置显微镜下观察BMSCs的形态学特点,细胞计数测定BMSCs接种贴壁率,并绘制出生长曲线。结果通过联合密度梯度离心法与贴壁细胞培养方法分离培养出的BMSCs纯度高。BMSCs体外培养生长旺盛,具有活跃的增殖能力。培养的BMSCs阳性表达CD29、CD44,阴性表达CD34、CD45。结论通过联合密度梯度离心与贴壁细胞培养方法能从骨髓中获得骨髓间充质干细胞;获得的BMSCs在体外生长稳定,且增殖较快,可作为组织工程的种子细胞。第二部分慢病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞研究目的对分离、培养到第三代的大鼠骨髓间充质干细胞进行慢病毒载体介导的基因转染,观察其转染效率及对骨髓间充质干细胞生物活性的影响,为骨髓间充质干细胞基因治疗研究提供实验基础。方法利用密度梯度离心、贴壁筛选法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞。利用脂质体法进行慢病毒感染大鼠BMSCs。结果体外分离培养的骨髓间充质干细胞,经携带绿色荧光蛋白(greenfluorescence protein,GFP)的慢病毒转染72h后可见绿色荧光蛋白的表达,96h后达到高峰。转染后的骨髓间充质干细胞体外继续培养,1月后仍可见绿色荧光蛋白的表达,但表达强度较前减弱。在一定病毒复数范围内,慢病毒对骨髓间充质干细胞的转染率随病毒复数的增加而增高,当病毒复数为5时,转染率达到80%以上;但病毒复数超出一定范围后,转染率反而下降。慢病毒转染后的骨髓间充质干细胞生长曲线和未转染的骨髓间充质干细胞生长曲线未见明显变化。结论慢病毒对大鼠BMSCs有较高的转染率,且携带的GFP能在BMSCs内有效表达,可以作为骨髓间充质干细胞基因治疗的载体和体内示踪。第三部分骨髓间充质干细胞移植对肝功能影响的实验研究目的观察同种异体骨髓间充质干细胞移植在肝脏特定微环境下是否向具肝细胞功能的细胞分化并探讨其对大鼠受损肝脏修复作用的可行性。方法利用密度梯度离心、贴壁筛选法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞。经慢病毒转染后的第3代BMSCs从门静脉植入肝大部分切除大鼠体内,分别于移植后7、14、28d行血清肝功能检测,分析BMSCs对肝功能的作用。移植后的第28d取出肝脏,通过冰冻切片荧光检测,观察BMSCs在大鼠肝脏内定居分布情况。结果大鼠连续用2-乙酰氨基芴(2-acetylaminofluorene,2-AAF)灌喂6d后出现精神萎靡、厌食、少活动、尿深黄;肉眼见肝脏明显充血肿大、边缘圆钝、表面可见针尖样细小颗粒、呈局灶性,偶见有小出血点;HE见部分肝细胞肿胀、胞质疏松。术后BMSCs移植组和DMEM/F12注射组各肝功能检测指标均随着时间的延长逐渐恢复;BMSCs移植组与DMEM/F12注射组比较,ALB、ALT和AST均有显著性差异(P＜0.05)。术后28d,BMSCs移植组与正常组比较,ALB、ALT、AST、ALP均无显著性差异(P＞0.05);DMEM/F12注射与正常组比较,ALB、ALT均有显著性差异(P＜0.05)。这些表明BMSCs移植对肝功能的恢复有促进作用。术后冰冻切片,BMSCs移植组可见BMSCs定居于肝脏内,主要在汇管区周围,肝实质里也可见散在分布,而心、肺、脾、肾未见BMSCs。HE染色BMSCs移植组肝小叶结构正常,肝索排列规则;DMEM/F12注

关键词：骨髓间充质干细胞生物学特性细胞培养骨髓间充质干细胞慢病毒转染骨髓间充质干细胞细胞移植肝细胞分化慢病毒

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腹腔内局部冲洗在腹腔镜阑尾切除术中的应用研究

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西藏医药 2022年第6期43卷 54-55页

作者：罗衍波陈龙镇鲁才杰深圳市龙华区中心医院胃肠肝胆外科广东深圳518110

目的探讨腹腔内局部冲洗在腹腔镜阑尾手术中的临床效果。方法收集2020年9月~2021年1月本院腹腔镜阑尾切除术患者90例,随机分为两组,每组45例。实验组给予腹腔内局部冲洗,对照组未予冲洗。对比分析两组患者的手术时间、住院时间、抗生... 详细信息

目的探讨腹腔内局部冲洗在腹腔镜阑尾手术中的临床效果。方法收集2020年9月~2021年1月本院腹腔镜阑尾切除术患者90例,随机分为两组,每组45例。实验组给予腹腔内局部冲洗,对照组未予冲洗。对比分析两组患者的手术时间、住院时间、抗生素使用时间,术后戳卡孔感染率。结果实验组平均手术时间(35.86±5.80) min,对照组(34.55±4.94) min,组间差异无统计学意义(P>0.05),实验组平均住院时间(2.91±0.51)d,对照组(4.08±0.28)d,差异有统计学意义(P 0.05),实验组抗生素使用时间为(2.37±0.49) d,对照组(3.77±0.47) d (P <0.05);术后,对照组的肠黏道屏障相关指标明显高于实验组,组间具有明显的差异性(P<0.05)。结论腹腔内局部冲洗可缩短腹腔镜阑尾切除术患者住院时间、抗生素使用时间,有临床使用价值。

关键词：局部腹腔内冲洗腹腔镜阑尾手术

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腹腔镜胆囊切除术后患者给予双歧杆菌三联活菌胶囊的价值分析

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海峡药学 2019年第6期31卷 101-102页

作者：刘建斌罗衍波曾今诚广东省深圳市龙华区中心医院甲乳外科深圳518110 深圳市龙华区中心医院胃肠肝胆外科深圳518110 广东医科大学广东省医学分子诊断重点实验室东莞523808

目的探讨腹腔镜胆囊切除术后患者给予双歧杆菌三联活菌胶囊的价值分析。方法将2018年1月~2019年1月在我院肝胆外科行腹腔镜胆囊切除术后的106例患者随机分为两组,对照组采用常规术后治疗,观察组在此基础上给予双歧杆菌三联活菌胶囊,比... 详细信息

目的探讨腹腔镜胆囊切除术后患者给予双歧杆菌三联活菌胶囊的价值分析。方法将2018年1月~2019年1月在我院肝胆外科行腹腔镜胆囊切除术后的106例患者随机分为两组,对照组采用常规术后治疗,观察组在此基础上给予双歧杆菌三联活菌胶囊,比较两组患者的腹泻及肠道菌群失调发生率、肠道菌群变化、血浆D-乳酸。结果观察组术后腹泻、肠道菌群失调的发生率明显低于对照组(P<0.05);观察组治疗后双歧杆菌、乳酸杆菌水平明显低于对照组,而大肠埃希菌、肠球菌水平明显高于对照组(P<0.05);观察组治疗后血浆D-乳酸水平明显低于对照组(P<0.05)。结论腹腔镜胆囊切除术后患者给予双歧杆菌三联活菌胶囊的价值显著,能有效防止腹泻及肠道菌群失调的发生,调节肠道菌群,促进肠道功能的恢复,具有积极的临床意义。

关键词：腹腔镜胆囊切除术后双歧杆菌三联活菌胶囊腹泻肠道菌群失调

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骨髓间充质干细胞体内定向诱导分化及对肝功能影响的实验研究

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中国现代医学杂志 2009年第14期19卷 2147-2150,2155页

作者：罗衍波陈斌金丽华马经野倪勇广东省深圳市第二人民医院肝胆外科广东深圳518035

目的观察同种异体骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)移植在肝脏特定微环境下是否向具肝细胞功能的细胞分化并探讨其对大鼠受损肝脏修复作用的可行性。方法利用密度梯度离心法分离、纯化、扩增培养大鼠骨髓间充质... 详细信息

目的观察同种异体骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)移植在肝脏特定微环境下是否向具肝细胞功能的细胞分化并探讨其对大鼠受损肝脏修复作用的可行性。方法利用密度梯度离心法分离、纯化、扩增培养大鼠骨髓间充质干细胞。慢病毒转染第3代BMSCs后从门静脉植入同种异体肝损伤大鼠体内,分别于移植后7、14和28d行血清肝功能检测。于移植后的第28天取出肝脏,通过冷冻切片行荧光检测,研究BMSCs在大鼠肝脏内定居分布情况。结果BMSCs体内移植后定居于肝脏内。ALB在术后第7、28天,A组与B组比较差异有显著性[7d:(18.81±0.96)vs(17.94±1.13),P<0.05]。[28d:(20.08±0.56)vs(19.28±0.50),P<0.05]。AST在术后第7天,A组与B组之间比较差异有显著性[7d:(213.50±45.35)vs(262.20±44.15),P<0.01],第14天差异有显著性[14d(:176.50±33.53)vs(230.30±68.45),P<0.05]。术后第14天,A组ALB、ALT、ALP与C组比较均无明显差异。结论经门静脉移植的BMSCs能在受损肝脏内定居、增殖,BMSCs移植可以在一定程度上修复受损肝脏。

关键词：骨髓间充质干细胞细胞移植肝细胞分化慢病毒

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慢病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞研究

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中国热带医学 2009年第2期9卷 235-236页

作者：罗衍波陈斌倪勇陈剑雄马经野南方医科大学 06级研究生广东广州510515 深圳市第二人民医院广东深圳518035

目的分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)并进行慢病毒载体介导的基因转染研究。方法利用密度梯度离心法分离、纯化、扩增培养大鼠骨髓间充质干细胞。以脂质体法进行慢病毒感染大鼠BMSCs。结果分离培... 详细信息

目的分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)并进行慢病毒载体介导的基因转染研究。方法利用密度梯度离心法分离、纯化、扩增培养大鼠骨髓间充质干细胞。以脂质体法进行慢病毒感染大鼠BMSCs。结果分离培养出大鼠BMSCs,并用携带绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的慢病毒成功感染大鼠BMSCs。结论获得大鼠BMSCs并进行慢病毒载体介导的基因修饰,为骨髓间充质干细胞基因治疗研究奠定了基础。

关键词：骨髓间充质干细胞慢病毒转染

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腹腔镜胆囊切除术302例临床体会

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中国医药导刊 2011年第3期13卷 389-390页

作者：张智明赵兴文魏健刘迁罗衍波深圳市宝安区观澜人民医院普外科深圳518110

目的:探讨腹腔镜胆囊切除术(LC)临床应用价值及并发症原因、预防对策。方法:选择我院2005年1月～2009年12月住院择期行腹腔镜胆囊切除术患者302例的临床资料回顾性总结,并结合文献分析。结果:全组手术时间30min,平均;全组无死亡病例,成... 详细信息

目的:探讨腹腔镜胆囊切除术(LC)临床应用价值及并发症原因、预防对策。方法:选择我院2005年1月～2009年12月住院择期行腹腔镜胆囊切除术患者302例的临床资料回顾性总结,并结合文献分析。结果:全组手术时间30min,平均;全组无死亡病例,成功297例,中转开腹7例;发生胆管损伤16例,术后胆漏4例,术中腹腔内出血4例,胆总管残留结石2例,均经相应处理治愈。结论:LC是一种微创手术,具有诸多优点,但稍有不慎便可引起严重的并发症,严格掌握LC手术适应证,围术期严格操作规程,适时果断中转开腹是保证LC安全的重要措施。

关键词：腹腔镜胆囊切除术疗效

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分析封闭负压引流术(VSD)应用于腹腔间室综合征切开减压中的效果

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系统医学 2020年第16期5卷 76-78页

作者：陈若愚庄华章罗衍波深圳市龙华区中心医院肛肠科广东深圳518110 深圳市龙华区中心医院胃肠肝胆外科广东深圳518110

目的探讨封闭负压引流术(VSD)应用于腹腔间室综合征切开减压中的效果。方法选择2017年1月—2019年7月收治的82例腹腔间室综合征切开减压患者进行研究,随机数字表法分为对照组与观察组各41例,对照组接受常规处理,观察组加用VSD,对两组康... 详细信息

目的探讨封闭负压引流术(VSD)应用于腹腔间室综合征切开减压中的效果。方法选择2017年1月—2019年7月收治的82例腹腔间室综合征切开减压患者进行研究,随机数字表法分为对照组与观察组各41例,对照组接受常规处理,观察组加用VSD,对两组康复情况进行比较。结果两组治疗前腹内压差异无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后腹内压(12.10±2.76)cmH2O明显低于对照组,肠瘘患者伤口缩小至可接造口袋时间(32.79±5.18)d较对照组短,两组比较差异有统计学意义(t=8.821、9.067,P<0.05);观察组患者切口感染、压疮、切口周围皮炎等并发症发生率4.88%明显较对照组39.02%低,两组比较差异有统计学意义(χ2=13.951,P<0.05)。结论VSD应用于腹腔间室综合征切开减压中效果满意,可促进腹压下降,减少并发症发生。

关键词： VSD 腹腔间室综合征切开减压效果

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水滑石光催化剂结构调控用于二氧化碳还原的研究进展

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化工进展 2024年第7期43卷 3891-3909页

作者：罗丛佳豆义波卫敏北京化工大学化学学院化工资源有效利用国家重点实验室北京100029

光催化转化二氧化碳(CO_(2))为太阳能燃料或化学品被认为是缓解能源危机和温室效应的有效途径之一。为提高CO_(2)光还原产物的活性、选择性,光催化剂的结构设计和性能调控至关重要。在众多光催化剂中,二维层状双金属氢氧化物(layered do... 详细信息

光催化转化二氧化碳(CO_(2))为太阳能燃料或化学品被认为是缓解能源危机和温室效应的有效途径之一。为提高CO_(2)光还原产物的活性、选择性,光催化剂的结构设计和性能调控至关重要。在众多光催化剂中,二维层状双金属氢氧化物(layered double hydroxides,LDHs)又称水滑石,因其层板阳离子组成及比例可调变、层间客体阴离子可交换等特性在光催化领域展现出广阔的应用前景。本文综述了LDHs结构调控策略用于强化光催化CO_(2)还原的研究进展。首先介绍了光催化CO_(2)还原的机理和LDHs光催化材料的结构特征;然后重点总结了基于缺陷工程、形貌尺寸调控和异质结构筑等策略调控LDHs光催化剂的电子结构及几何结构,优化后的LDHs通过增强光吸收、电子空穴分离迁移能力及表面还原反应能力,尤其是通过调控活性位结构降低反应势垒,实现了性能强化;最后,基于LDHs光催化剂在CO_(2)还原领域存在的挑战,包括LDHs的设计构筑、机理探索以及多碳产物的调控提出了相关解决思路和策略。

关键词：二氧化碳还原催化剂光化学

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腹腔镜肠粘连松解术治疗粘连性肠梗阻临床观察

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现代中西医结合杂志 2013年第7期22卷 743-744页

作者：张智明刘迁刘峰罗衍波魏健曾妙弟赵兴文广东省深圳市宝安区观澜人民医院广东深圳518110

目的探讨腹腔镜粘连松解术治疗粘连性肠梗阻的临床疗效。方法选取64例粘连性肠梗阻患者,按照手术方式分为2组,观察组行腹腔镜松解术治疗,对照组行常规开腹手术,比较2组患者手术时间、术中出血量、术后应用镇痛药物、肠功能恢复时间及术... 详细信息

目的探讨腹腔镜粘连松解术治疗粘连性肠梗阻的临床疗效。方法选取64例粘连性肠梗阻患者,按照手术方式分为2组,观察组行腹腔镜松解术治疗,对照组行常规开腹手术,比较2组患者手术时间、术中出血量、术后应用镇痛药物、肠功能恢复时间及术后并发症情况。结果观察组患者手术时间短,术中出血量少,术后胃肠功能恢复时间短,应用镇痛药物比例低,术后并发症发生率低,与对照组比较均有显著性差异(P均<0.05)。结论腹腔镜粘连松解术治疗粘连性肠梗阻具有创伤小、术后康复快、并发症少等优点,值得在临床推广应用。

关键词：腹腔镜粘连松解术肠梗阻微创外科

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腹壁悬吊式单孔腹腔镜胆囊切除临床研究

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中国医药导刊 2012年第4期14卷 595-596页

作者：张智明刘迁刘峰罗衍波魏健曾妙弟赵兴文广东省深圳市宝安区观澜人民医院普外科深圳518110

目的:探讨腹壁悬吊式单孔腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy,LC)的临床效果。方法:选取我院符合腹腔镜胆囊切除术标准的患者70例,实验组(30例)行腹壁悬吊式单孔腹腔镜胆囊切除术,对照组(40例)行三孔腹腔镜胆囊切除术,对两... 详细信息

目的:探讨腹壁悬吊式单孔腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy,LC)的临床效果。方法:选取我院符合腹腔镜胆囊切除术标准的患者70例,实验组(30例)行腹壁悬吊式单孔腹腔镜胆囊切除术,对照组(40例)行三孔腹腔镜胆囊切除术,对两组的手术时间,术后出血、术后并发症,胃肠功能恢复时间,术后疼痛,住院时间进行比较。结果:两组手术时间、术中出血量比较均无统计学差异(P>0.05),而术后恢复情况,包括下床活动时间、进食时间、住院天数,实验组均少于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。两组均无严重术后并发症的发生。结论:腹壁悬吊式单孔腹腔镜胆囊切除术安全可行,术后恢复更快,尤其适用于心肺功能差的患者,值得推广,但因手术操作范围窄和器械的限制,手术操作难度大,需要进一步改进手术器械。

关键词：腹腔镜胆囊切除术单孔无气腹

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