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低温常压等离子体提高MDBK细胞中IBRV病毒滴度的作用与机制研究

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病毒学报 2022年第2期38卷 422-430页

作者：缪宇杰韩佩宇戴晓峰管政兵江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室无锡214122 江南大学无锡医学院无锡214122

加强病毒的繁殖可以帮助MDBK细胞生产更多的IBRV病毒用于生产灭活病毒疫苗。已证明低温常压等离子体(Cold atmospheric plasma,CAP)是一种依靠活性氧来实现MDBK细胞中病毒显著增殖的物理方法,可有效增强病毒的传播,其中牛鼻气管炎病毒(I... 详细信息

加强病毒的繁殖可以帮助MDBK细胞生产更多的IBRV病毒用于生产灭活病毒疫苗。已证明低温常压等离子体(Cold atmospheric plasma,CAP)是一种依靠活性氧来实现MDBK细胞中病毒显著增殖的物理方法,可有效增强病毒的传播,其中牛鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotrachieitis virus,IBRV)和牛肾细胞(Madin-Darby Bovine Kidney,MDBK)分别被用作模型所需病毒和细胞系。CAP被证明与病毒感染具有协同作用,可以在G2/M期阻止宿主细胞分裂增殖,降低细胞膜电位,增加细胞内钙离子水平并诱导细胞选择性自噬。通过检测免疫相关蛋白表达,CAP被证明可以抑制病毒触发的免疫原性信号传导。综上所述,我们证明了CAP触发了宿主资源对病毒繁殖的最大化,这有利于病毒疫苗的生产,并为在医疗和卫生领域应用CAP开辟了新的可能。

关键词：低温常压等离子体(CAP) 牛鼻气管炎病毒(IBRV) 牛肾细胞(MDBK) 病毒滴度

贝莱斯芽孢杆菌角蛋白酶的克隆表达、纯化及酶学性质

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食品与生物技术学报 2023年第6期42卷 57-66页

作者：殷方荣翟李欣田乔鹏管政兵蔡宇杰廖祥儒江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学教育部工业生物技术重点实验室江苏无锡214122

为了获得更好的羽毛粉降解酶,作者从贝莱斯芽孢杆菌基因组中筛选到一个角蛋白酶基因(baker1),对其克隆并在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,最后对重组角蛋白酶(BaKer1)进行分离纯化、表征及应用研究。结果表明,BaKer1的最适反应pH为9.5,... 详细信息

为了获得更好的羽毛粉降解酶,作者从贝莱斯芽孢杆菌基因组中筛选到一个角蛋白酶基因(baker1),对其克隆并在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,最后对重组角蛋白酶(BaKer1)进行分离纯化、表征及应用研究。结果表明,BaKer1的最适反应pH为9.5,最适反应温度为55℃,在中温和碱性条件下具有较好的稳定性。1 mmol/L Ca^(2+)对BaKer1有显著促进作用,5 mmol/L Mn^(2+)对BaKer1有轻微抑制作用,其他金属离子对BaKer1影响不大。PMSF对BaKer1的活性具有显著抑制作用,表明BaKer1是典型的丝氨酸蛋白酶。分别以羽毛粉、偶氮酪蛋白、酪蛋白为底物测定了BaKer1的动力学参数,Km值分别为5.06、1.09、1.39 mmol/L,k_(cat)/K_(m)值分别为1058.24、2536.54、3733.79 s·mmol/L。BaKer1处理羽毛粉,能达到酸水解效果的33.51%,说明它在羽毛粉降解过程中具有潜在的应用价值。

关键词：角蛋白酶克隆表达酶学性质羽毛粉贝莱斯芽孢杆菌

酿造酒中氨基甲酸乙酯控制的研究进展及对中国黄酒的借鉴

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食品工业科技 2012年第20期33卷 374-378页

作者：管政兵江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

人体潜在致癌物-氨基甲酸乙酯(EC)是发酵酒精饮料(中国黄酒、葡萄酒、日本清酒等)酿造过程中伴随产生的副产物,不少国家对市场上各酒种中EC的含量制定了严格的限定标准。黄酒是我国特有传统酒种,当前黄酒中EC含量较高的现状已成为制约... 详细信息

人体潜在致癌物-氨基甲酸乙酯(EC)是发酵酒精饮料(中国黄酒、葡萄酒、日本清酒等)酿造过程中伴随产生的副产物,不少国家对市场上各酒种中EC的含量制定了严格的限定标准。黄酒是我国特有传统酒种,当前黄酒中EC含量较高的现状已成为制约我国黄酒业发展尤其是国际化发展的瓶颈之一。本文就近些年国内外已报道的酿造酒中EC形成机理及控制策略研究的现状进行综述,并分析给予中国黄酒的借鉴作用,以期为解决中国黄酒的EC问题提供思路。

关键词：发酵酒氨基甲酸乙酯尿素酿酒酵母代谢工程

人sBCMA cDNA的克隆、高可溶性融合表达及活性分析

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生物工程学报 2006年第1期22卷 46-51页

作者：管政兵曹鹏叶记林张双全南京师范大学生命科学学院

BCMA是除TACI外BAFF和APRIL共用的另一细胞表面受体。为了研究sBCMA作为拮抗受体的可能及获得活性sBCMA蛋白用做结构功能研究,我们以RTPCR法从人B系非洲淋巴瘤细胞株Raji总RNA中扩增出人BCMA的全长cDNA,经克隆测序证实所克隆的基因为人B... 详细信息

BCMA是除TACI外BAFF和APRIL共用的另一细胞表面受体。为了研究sBCMA作为拮抗受体的可能及获得活性sBCMA蛋白用做结构功能研究,我们以RTPCR法从人B系非洲淋巴瘤细胞株Raji总RNA中扩增出人BCMA的全长cDNA,经克隆测序证实所克隆的基因为人BCMA。继而通过嵌套PCR扩增出胞外可溶区(sBCMA,46个氨基酸组成,含有一个6个半胱氨酸的保守CRD,构成3个二硫键)cDNA,构建原核表达载体pET43.1a(+)sBCMA,在大肠杆菌菌株OrigamiB(DE3)pLysS中高可溶性融合表达出重组蛋白sBCMANusAHis6,同时克隆表达了融合蛋白NusAHis6。经Ni+NTA亲和纯化后的目的蛋白进行细胞学实验表明sBCMA能特异阻断BAFF促小鼠B细胞的增殖作用,而NusAHis6则不能,证实我们所表达得到的受体胞外可溶性片段sBCMA与配体具有较高的结合活性。sBCMA融合蛋白的成功表达将为二硫键富含类蛋白的表达提供参考,并为研究其临床应用以及BAFF和APRIL受体结构和功能的关系奠定基础。

关键词： RT-PCR sBCMA 融合表达增殖抑制

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芽胞漆酶的固定化方法对比研究与载体选择

食品与生物技术学报 2017年第4期36卷 364-370页

作者：周稳管政兵蔡宇杰赵宏廖祥儒江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

为了找到适合芽胞漆酶固定化的载体和方法,对12种载体共19种芽胞漆酶固定化方案进行了对比研究,并通过参考固定化芽胞漆酶的酶活力回收率、重复利用率、成本等因素,选定以DEAE-纤维素为载体通过离子结合法固定为最佳方案。结果表明,包... 详细信息

为了找到适合芽胞漆酶固定化的载体和方法,对12种载体共19种芽胞漆酶固定化方案进行了对比研究,并通过参考固定化芽胞漆酶的酶活力回收率、重复利用率、成本等因素,选定以DEAE-纤维素为载体通过离子结合法固定为最佳方案。结果表明,包埋法固定化芽胞漆酶存在严重的扩散限制作用,部分包埋法制备的微球还会伴有溶解、膨胀的现象。而多孔材料常因孔径过小难以固定芽胞。芽胞以碳二亚胺为交联剂与载体进行共价结合,具有良好的固定化性能,可作为备选方案。

关键词：芽胞漆酶包埋法吸附法离子结合共价结合

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大孔吸附树脂分离纯化薰衣草中迷迭香酸

食品与生物技术学报 2019年第3期38卷 69-75页

作者：熊天真管政兵廖祥儒蔡宇杰江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

研究不同大孔吸附树脂对薰衣草中迷迭香酸静态吸附与解吸特性,筛选出一种吸附及解吸效果良好的树脂LX-60,其静态吸附量与解吸量分别达到5.12 mg/g和4.86 mg/g。对LX-60进行吸附和解析条件考察,最终得到纯度为15.6%的迷迭香酸产品,其得率... 详细信息

研究不同大孔吸附树脂对薰衣草中迷迭香酸静态吸附与解吸特性,筛选出一种吸附及解吸效果良好的树脂LX-60,其静态吸附量与解吸量分别达到5.12 mg/g和4.86 mg/g。对LX-60进行吸附和解析条件考察,最终得到纯度为15.6%的迷迭香酸产品,其得率为86.79%。比纯化前的迷迭香酸质量浓度0.37%提高了42倍。本研究表明,利用大孔吸附树脂能够纯化薰衣草中的迷迭香酸,为通过薰衣草提取分离来生产迷迭香酸提供理论和实验基础。

关键词：薰衣草迷迭香酸大孔树脂分离纯化

Bacillus altitudinis SYBC hb4碱性β-葡萄糖苷酶基因的克隆表达及酶学性质的研究

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食品与生物技术学报 2017年第11期36卷 1203-1209页

作者：刘群管政兵蔡宇杰廖祥儒江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

为获得耐碱性β-葡萄糖苷酶,进一步研究碱性β-葡萄糖苷酶的酶学性质。从实验室已有蜂蜜中筛选出一株耐碱性的高地芽孢杆菌Bacillus altitudinis SYBC hb4,根据Bacillus altitudinis SYBC hb4中β-葡萄糖苷酶(bglA)基因序列设计一对引物... 详细信息

为获得耐碱性β-葡萄糖苷酶,进一步研究碱性β-葡萄糖苷酶的酶学性质。从实验室已有蜂蜜中筛选出一株耐碱性的高地芽孢杆菌Bacillus altitudinis SYBC hb4,根据Bacillus altitudinis SYBC hb4中β-葡萄糖苷酶(bglA)基因序列设计一对引物,通过PCR扩增技术,获得β-葡萄糖苷酶基因(bglA),将扩增后的bglA与质粒pColdII构建重组表达载体pColdII-bglA,并转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达。重组表达的β-葡萄糖苷酶酶活可达12.40 U/mL;该重组β-葡萄糖苷酶最适反应温度为60℃;最适反应pH值为pH 8.0;5 mmol/L的Mg^(2+)可使酶活提高50%左右。本实验所获得的碱性β-葡萄糖苷酶比已报道的重组酶在碱性条件下稳定性更好。

关键词：碱性β-葡萄糖苷酶大肠杆菌基因克隆酶学性质高地芽孢杆菌

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高山被孢霉产花生四烯酸的发酵和老化工艺

食品与生物技术学报 2016年第6期35卷 617-622页

作者：曹刚刚管政兵廖祥儒蔡宇杰江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

高山被孢霉对于淀粉质原料具有优良的利用能力。采用经淀粉酶液化的玉米粉-豆粕培养基,研究了高山被孢霉在5 L容积机械搅拌罐液态发酵的主要参数,如搅拌转速和通气体积比对于高山被孢霉发酵产花生四烯酸的影响,得到最优的搅拌转速和通... 详细信息

高山被孢霉对于淀粉质原料具有优良的利用能力。采用经淀粉酶液化的玉米粉-豆粕培养基,研究了高山被孢霉在5 L容积机械搅拌罐液态发酵的主要参数,如搅拌转速和通气体积比对于高山被孢霉发酵产花生四烯酸的影响,得到最优的搅拌转速和通气体积比,分别为200 r/min和1∶1。研究发现,采用发酵罐培养5 d的菌丝体,最佳的老化温度和保温时间分别是20℃和5 d。本研究把谷物粗原料成功用于高山被孢霉发酵产花生四烯酸,经发酵罐优化和菌体老化后的花生四烯酸产量达到11.7 g/L,菌体老化可以在保持产量的同时缩短发酵周期,有效降低生产成本,有望实际用于花生四烯酸的工业化生产。

关键词：谷物原料发酵罐老化花生四烯酸高山被孢霉

能量代谢相关基因在眼柄切除诱导克氏原螯虾卵巢成熟中后期的表达量

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江苏农业科学 2012年第12期40卷 28-30页

作者：管政兵水燕周鑫徐增洪赵朝阳江南大学生物工程学院江苏无锡214122 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心/农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081

借鉴国外最新研究结果,探讨了克氏原螯虾单侧眼柄切除后15 d内卵巢的一系列变化情况,利用实时定量RT-PCR技术比较分析了眼柄切除前、后卵巢组织中NADH脱氢酶、ATP合成酶F0及细胞色素C氧化酶的基因表达情况。结果显示,在克氏原螯虾眼柄... 详细信息

借鉴国外最新研究结果,探讨了克氏原螯虾单侧眼柄切除后15 d内卵巢的一系列变化情况,利用实时定量RT-PCR技术比较分析了眼柄切除前、后卵巢组织中NADH脱氢酶、ATP合成酶F0及细胞色素C氧化酶的基因表达情况。结果显示,在克氏原螯虾眼柄切除诱导卵巢成熟的中后期,这些能量代谢相关基因表达量大幅上调。说明在克氏原螯虾养殖过程中卵巢快速发育阶段,卵巢组织细胞要消耗大量能量,须要在饲料配方中提高能量饲料的比例。

关键词：克氏原螯虾眼柄切除卵巢成熟实时定量PCR 能量代谢相关基因