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第五届全国肺功能与呼吸监护学术会议纪要

中华结核和呼吸杂志 1997年第4期20卷 56-57页

作者：林江涛李焕章康健于润江

第五届全国肺功能与呼吸监护学术会议纪要全国第五届肺功能与呼吸监护学术会议于１９９７年５月１６日～１９日在古城西安召开。大会共收到论文４７０篇，专题讲座７篇。大会代表共３２９人，从稿件的内容和质量上看，基本反映了我国近... 详细信息

第五届全国肺功能与呼吸监护学术会议纪要全国第五届肺功能与呼吸监护学术会议于１９９７年５月１６日～１９日在古城西安召开。大会共收到论文４７０篇，专题讲座７篇。大会代表共３２９人，从稿件的内容和质量上看，基本反映了我国近年来在肺功能和呼吸监护领域的研究进...

关键词：肺功能领域呼吸监护气道压力释放通气会议纪要会议录心肺运动试验呼吸功能测定呼吸疾病呼衰患者

三种连接子多肽对抗癌融合蛋白翻译后剪切效果比较研究

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生物化学与生物物理进展 2014年第6期41卷 558-566页

作者：李红艳周志明潘强杨冬梅顾锦法沈佳妮王世兵章康健浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所杭州310018 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

IL-24和Smac为靶向癌症的多基因治疗研究中重要的候选基因.在构建IL-24和Smac双基因表达载体过程中,选择一个稳定高效的连接子非常关键.利用三个不同的连接子多肽序列IETD、EEED、F2A构建三个真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IL-24-IETD-Smac、... 详细信息

IL-24和Smac为靶向癌症的多基因治疗研究中重要的候选基因.在构建IL-24和Smac双基因表达载体过程中,选择一个稳定高效的连接子非常关键.利用三个不同的连接子多肽序列IETD、EEED、F2A构建三个真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IL-24-IETD-Smac、pcDNA3.1(+)-IL-24-EEED-Smac、pcDNA3.1(+)-IL-24-F2A-Smac,并联合5-氟尿嘧啶(5-FU)处理研究各连接子介导的融合蛋白剪切效果.上述实验结果表明,在三种IL-24-linker-Smac双基因表达载体中,F2A连接子剪切效果最佳且与caspase活性成正相关.IETD、EEED连接子介导的融合蛋白都有一定的剪切,但IETD/EEED多肽影响了上游IL-24蛋白的半衰期,加速了剪切后IL-24蛋白的泛素化降解.本研究为构建靶向癌症应用的双基因或多基因载体提供了设计参考.

关键词：连接子多肽 IETD EEED F2A caspase活性

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BATF2对Wnt信号通路影响的研究

中国细胞生物学学报 2012年第4期34卷 343-348页

作者：郑水娣吴帅桂镜华贾晓渊章康健浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所杭州310018 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

Wnt信号通路在各种生物体内高度进化保守,与癌症的发生发展密切相关。BATF2是一个新近发现的基因,研究表明其具有抑癌基因的作用。目前,BATF2与Wnt信号通路的关系尚不清楚,该文用荧光素酶报告基因检测、Real-time PCR和Western blot发现... 详细信息

Wnt信号通路在各种生物体内高度进化保守,与癌症的发生发展密切相关。BATF2是一个新近发现的基因,研究表明其具有抑癌基因的作用。目前,BATF2与Wnt信号通路的关系尚不清楚,该文用荧光素酶报告基因检测、Real-time PCR和Western blot发现BATF2能影响Wnt信号通路。过表达BATF2可明显下调TCF4/β-catenin的转录活性和Wnt信号通路下游基因的表达,可以下调细胞核中的β-catenin。推测BATF2可能通过下调细胞核中的β-catenin来实现对Wnt信号通路的下调。上述结果为抑制Wnt信号通路用于肿瘤治疗提供了一定的依据。

关键词： BATF2 Wnt信号通路 TCF4/β-catenin转录活性 β-catenin

Survivin介导的条件复制型溶瘤腺病毒表达IL-24蛋白对人肝癌细胞PLC作用机制探究

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中国细胞生物学学报 2010年第5期32卷 738-743页

作者：蒋海丁鑫鑫刘鸿谢宏霞章康健浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所杭州310018 浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所杭州310018 浙江大学医学院病理学与病理生理学系杭州310058

条件复制型溶瘤腺病毒***-E1A_((△24)-IL-24对人肝癌细胞株PLC的作用机制尚不清楚。采用流式细胞仪检测PLC经PBS、***-E1A_((△24)以及***-E1A_((△24)-IL-24处理48h后细胞周期的变化;利用Western blot检测PLC经PBS、***-E1A_((△24)以及***-E1A_((△24)IL-24处理24 h、48h后细胞中凋亡信号相关蛋白表达量的变化。实验结果表明:***-E1A_((△24)和***-E1A_((△24)-IL-24能将PLC细胞周期阻滞在S期,其值分别为43.74%±6.61%,49.48%±7.60%,两者与未感染病毒的对照组(18.91%±1.83%)进行统计学差异分析,P值均<0.05;同时,Western blot检测发现随着处理时间的增加,病毒处理组中CHOP的表达量、caspase 12的剪切水平及STAT3、p38 MAPK的磷酸化水平都有明显提高,尤其以***-E1A_((△24)-IL-24处理组较为明显。SOCS3的表达量病毒处理组与对照组没有显著差异。上述结果表明重组腺病毒***-E1A_((△24)-IL-24能有效阻滞PLC细胞周期在S期,并可能通过内质网压力、STAT3与MAPK信号通路等多种途径诱发PLC细胞凋亡。

关键词：溶瘤腺病毒人肝癌细胞 IL-24基因细胞凋亡靶向基因-病毒治疗

A33启动子结肠癌特异性探究及SV40增强子对其转录活性影响

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中国细胞生物学学报 2011年第11期33卷 1241-1247页

作者：钟丹郑水娣谌贺宽子袁素敬章康健浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所杭州310018 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

为了探究A33核心启动子结肠癌特异性及SV40增强子对其转录水平的影响,该研究通过构建A33核心启动子和带SV40增强子的A33核心启动子(eA33)的荧光素酶报告基因载体pGL3-A33和pGL3-eA33,与内参照pRL-SV40质粒共转染至不同的细胞系中,利用... 详细信息

为了探究A33核心启动子结肠癌特异性及SV40增强子对其转录水平的影响,该研究通过构建A33核心启动子和带SV40增强子的A33核心启动子(eA33)的荧光素酶报告基因载体pGL3-A33和pGL3-eA33,与内参照pRL-SV40质粒共转染至不同的细胞系中,利用双荧光素酶检测系统检测分析了A33和eA33启动子在不同细胞系中的转录活性。结果显示,A33核心启动子在结肠癌细胞系中具有转录活性低,但结肠癌特异性好的特点,而在其他类型癌细胞中基本没有活性。同时发现,eA33在各类癌细胞中的转录水平与A33相比,均呈大幅度提高,有显著性差异(P<0.01),但SV40增强子能显著增强A33启动子转录活性的同时减低了其结肠癌特异性。这为靶向癌症基因—病毒治疗策略在结肠癌的生物治疗应用中寻找结肠癌特异性的启动子奠定了研究基础。

关键词： A33核心启动子 SV40增强子结肠癌特异性基因-病毒治疗

雷帕霉素联合ZD55-TRAIL病毒对肿瘤抑制及其机制探讨

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中国细胞生物学学报 2011年第6期33卷 688-691页

作者：刘锡君李新郑水娣钟丹章康健王世兵周秀梅浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所杭州310018 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

溶瘤腺病毒的肿瘤靶向性研究一直是一个热点。目前已有商业化的ONYX-015、H101溶瘤腺病毒。在此基础上，科学家又进一步发展形成基因一病毒治疗方案，如文中应用的ZD55-TRAIL病毒。本研究利用刘新垣实验室提供的携带TRAIL（TNF-related ... 详细信息

溶瘤腺病毒的肿瘤靶向性研究一直是一个热点。目前已有商业化的ONYX-015、H101溶瘤腺病毒。在此基础上，科学家又进一步发展形成基因一病毒治疗方案，如文中应用的ZD55-TRAIL病毒。本研究利用刘新垣实验室提供的携带TRAIL（TNF-related apoptosis-inducing ligand，TNF相关的凋亡诱导配体）的溶瘤腺病毒ZD55-TRAILt^[1]联合雷帕霉素杀伤肿瘤细胞。ZD55-TRAIL是删除了腺病毒E1B-55KD，

关键词：溶瘤腺病毒雷帕霉素肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 E4orf1

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癌症治疗新策略及其机理

癌症治疗新策略及其机理

C19orf18蛋白的表达与纯化及多克隆抗体制备

2012年中国科协海峡两岸青年科学家学术活动月——第九...

作者：刘新垣章康健褚亮顾锦法中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所

我们有两大抗癌策略及药物:(1)癌症的靶向基因-病毒治疗(Cancer TargetingGene-Viro-Therapy,CTGVT)策略。全球癌症的基因治疗和复制性病毒治疗研究,都是分开进行分别召开国际会议,我们则把两者结合起来,创建一个新的抗癌策略,并坚持12... 详细信息

我们有两大抗癌策略及药物:(1)癌症的靶向基因-病毒治疗(Cancer TargetingGene-Viro-Therapy,CTGVT)策略。全球癌症的基因治疗和复制性病毒治疗研究,都是分开进行分别召开国际会议,我们则把两者结合起来,创建一个新的抗癌策略,并坚持12年不懈的研究,取得了很好的成果,经常可达到将移植性肿瘤全部消灭光

关键词：癌症治疗超级干扰素(sIFN-I)的抗癌作用 sIFN-I的抗癌机理靶向基因-病毒治疗

来源： cnki会议评论

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生物技术通报 2017年第5期33卷 176-182页

作者：童霄霞杨远勤陈勉王怀远胡海军章康健浙江理工大学杭州310018 中国科学院上海生命科学研究院生化细胞所上海200031 四川辉阳生命工程股份有限公司成都610021

旨在得到较高浓度和纯度的C19orf18蛋白,再将得到的目的蛋白用于制备其特异性的多克隆抗体。利用PCR技术扩增出C19orf18基因的胞内段和胞外段,中间用柔性肽连接,再将目的片段克隆到p ET28a(+)与p ET32a(+)载体上,通过诱导表达少量的目... 详细信息

旨在得到较高浓度和纯度的C19orf18蛋白,再将得到的目的蛋白用于制备其特异性的多克隆抗体。利用PCR技术扩增出C19orf18基因的胞内段和胞外段,中间用柔性肽连接,再将目的片段克隆到p ET28a(+)与p ET32a(+)载体上,通过诱导表达少量的目的蛋白,筛选出表达量较高的载体,再用筛选得到的表达量较高的载体大量表达目的蛋白,通过镍柱纯化得到较纯的C19orf18蛋白。用得到的蛋白免疫新西兰白兔,得到的抗血清先经过Protein A纯化,再进行抗原亲和纯化得到C19orf18蛋白多克隆抗体。结果显示,载体p ET28a-C19orf18蛋白表达量高于p ET32a-C19orf18,经过镍柱纯化后得到了较高浓度与纯度的目的蛋白,利用得到的目的蛋白作为抗原成功制备了其特异性的多克隆抗体。在原核细胞中成功表达了C19orf18重组蛋白,并得到了其特异性多克隆抗体,所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、蛋白免疫印迹实验。

关键词： C19orf18蛋白原核表达抗原亲和纯化

CRISPR/Cas9切割痘病毒DNA抑制病毒复制

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中国细胞生物学学报 2016年第4期38卷 405-412页

作者：王娇娇张新敏倪爱民章康健刘新垣刘锡君浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所杭州310018 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031 同济大学附属第十人民医院泛血管疾病研究所上海200072

当前,CRISPR/Cas9系统靶向痘苗病毒的相关研究鲜有报道。该文采用了CRISPR/Cas9基因组定点编辑技术,以痘病毒为研究对象。在重组痘病毒WR-EGFP中针对EGFP基因序列设计不同靶点g RNAs,转染Cas9/g RNA质粒,同时感染WR-EGFP痘病毒,随后观察... 详细信息

当前,CRISPR/Cas9系统靶向痘苗病毒的相关研究鲜有报道。该文采用了CRISPR/Cas9基因组定点编辑技术,以痘病毒为研究对象。在重组痘病毒WR-EGFP中针对EGFP基因序列设计不同靶点g RNAs,转染Cas9/g RNA质粒,同时感染WR-EGFP痘病毒,随后观察EGFP荧光表达、提取病毒基因组,通过PCR进行切口鉴定并运用错配酶切法验证CRISPR/Cas9对痘病毒靶点DNA切割的切口修复情况。与单独感染WR-EGFP组相比,转染了Cas9/g RNA174和Cas9/g RNA175质粒的EGFP荧光强度明显降低,表明CRISPR/Cas9抑制WR-EGFP病毒中EGFP基因的表达。相对定量PCR及错配酶切实验结果显示,CRISPR/Cas9切割靶点导致WR-EGFP病毒基因组产生了切口,并且存在DNA错配修复现象。最后,通过结晶紫染色法测定痘病毒的滴度,结果显示,经CRISPR/Cas9处理组的痘病毒滴度显著下降,即CRISPR/Cas9能够使痘病毒的复制能力显著地降低。综上所述,CRISPR/Cas9切割痘病毒基因组DNA并且抑制痘病毒复制。

关键词： CRISPR/Cas9 痘病毒靶向切割病毒复制