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新课程研究(中旬刊) 2013年第10期 56-58页

作者：田男范春雷窦晓兵钱颖胡林峰浙江中医药大学生命科学学院

细胞生物学实验是生命科学中一门很重要的学科。本文针对目前细胞生物学实验中的缺点和不足,详细描述了网络视频示范教学在细胞生物学实验中的应用,总结了网络视频示范教学的教学优势,为细胞生物学实验课程改革提供新思路。

关键词：细胞生物学实验网络视频示范教学

GSSG通过抑制TNF-α介导的NF-κB活化诱导非酒精性肝损伤

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浙江中医药大学学报 2016年第9期40卷 696-701,709页

作者：丁蕾张福利丁滨潘然胡林峰窦晓兵浙江中医药大学生命科学学院杭州310053

[目的]通过体外细胞实验,研究氧化型谷胱甘肽[glutathione(Oxidized),GSSG]通过抑制细胞内肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)介导的核转录因子(nuclear transcription factors kappa B,NF-κB)的活化诱导肝细胞死亡的作用机制。[方法]以人肝细胞株Hep G2为细胞模型,利用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)测定法及Hoechst染色法检测GSSG、TNF-α作用后细胞培养液中LDH活性及细胞凋亡情况。通过蛋白免疫印迹法(western blot,WB)检测细胞中蛋白质谷胱甘肽化水平、IκB激酶β(inhibitor kappa B kinase-β,IKK-β)蛋白表达水平及其磷酸化水平。通过酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测GSSG、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平及NF-κB(P65)的结合活性。并利用实时定量荧光PCR(real time PCR,RT-PCR)检测NF-κB目标基因的表达情况。[结果](1)H2O2作用后可显著提高Hep G2细胞内GSSG水平。(2)GSSG可以显著增加Hep G2细胞对TNF-α杀伤作用的敏感性。(3)GSSG通过氧化巯基使蛋白质谷胱甘肽化水平显著升高。(4)GSSG抑制Hep G2细胞内TNF-α介导的NF-κB活化。(5)GSSG通过谷胱甘肽化修饰IKK-β抑制NF-κB的活性。[结论]氧化应激产物GSSG通过抑制TNF-α介导的NF-κB活化诱导肝细胞死亡。这可能是一种新的非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的发病机制。

关键词： NAFLD GSSG TNF-α NF-κB 细胞凋亡机制

外源硫化氢通过清除4-HNE抑制肝细胞死亡的分子机制研究

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浙江临床医学 2018年第4期20卷 595-597页

作者：马旺丁滨丁秦超王萃任宣奇窦晓兵浙江中医药大学生命科学学院 310053

目的通过体外细胞实验，研究外源硫化氢（H2S）以4-羟基壬烯酸（4-HNE）为作用靶点抑制肝细胞死亡的作用及分子机制。方法以人的肝癌细胞系HepG2为细胞模型，通过MTT法、LDH活性检测外源H2S对4-HNE诱导肝细胞死亡的抑制作用，利用酶联... 详细信息

目的通过体外细胞实验，研究外源硫化氢（H2S）以4-羟基壬烯酸（4-HNE）为作用靶点抑制肝细胞死亡的作用及分子机制。方法以人的肝癌细胞系HepG2为细胞模型，通过MTT法、LDH活性检测外源H2S对4-HNE诱导肝细胞死亡的抑制作用，利用酶联免疫吸附法检测肝细胞内H2S水平，利用WesternBlot技术检测肝细胞内4-HNE与蛋白质形成的加合物水平。结果外源NariS（H2S前体）能升高肝细胞内H2S水平。外源NaHS（H2S前体）能够显著抑制4-HNE诱导的肝细胞死亡。升高肝细胞内H2S水平可以显著降低细胞内4-HNE与蛋白质形成的加合物水平。结论补充外源性H2S能增加肝细胞内H2S水平，清除细胞内4-HNE蛋白质加合物，从而抑制4-HNE诱导的肝细胞死亡，为以4-HNE为靶点的治疗酒精性肝病的新型药物研发提供重要的理论指导和依据。

关键词：酒精性肝病 4-羟基壬烯酸硫化氢肝细胞

基于JNK信号通路探究半胱氨酸在非酒精性脂肪性肝炎发病机制中的作用

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中国临床药理学与治疗学 2016年第4期21卷 366-371页

作者：刘庆生丁滨窦晓兵潘然张福利丁蕾桑怡杭州市中医院消化内科浙江中医药大学生命科学学院

目的:通过体外细胞实验,研究半胱氨酸(cysteine,CYS)加剧棕榈酸(palmitate,PAL)诱导肝细胞死亡的作用机制。方法:以人肝细胞株Hep G2为细胞模型,采用LDH、MTT技术以及Hoechst染色法检测细胞增殖活性,通过酶化学方法检测细胞内谷胱甘肽(g... 详细信息

目的:通过体外细胞实验,研究半胱氨酸(cysteine,CYS)加剧棕榈酸(palmitate,PAL)诱导肝细胞死亡的作用机制。方法:以人肝细胞株Hep G2为细胞模型,采用LDH、MTT技术以及Hoechst染色法检测细胞增殖活性,通过酶化学方法检测细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,应用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,利用Western blot技术检测细胞内质网应激相关蛋白C/EBP同源转录因子(C/EBP homologous transcription factor,CHOP),GRP-78以及磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-jun N-terminal kinase,p-JNK)的表达量。结果:(1)PAL可以显著抑制Hep G2细胞的增殖活性。(2)PAL提高Hep G2细胞内的GSH水平,但不影响MDA和ROS水平。(3)CYS显著加剧PAL诱导肝细胞死亡的作用。(4)CYS/PAL协同作用不影响细胞内MDA和ROS水平。(5)CYS/PAL协同作用可显著提高肝细胞内质网应激相关蛋白GRP-78、CHOP和p-JNK的表达。(6)抑制JNK通路可抑制PAL诱导的细胞死亡。结论:CYS通过激活JNK通路导致内质网应激加强,从而加剧PAL诱导细胞死亡,参与NASH发病机制。

关键词：半胱氨酸棕榈酸内质网应激肝细胞 c-Jun氨基末端激酶(JNK)

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N-乙酰半胱氨酸对肝脏保护作用的研究进展

中西医结合肝病杂志 2022年第8期32卷 759-762页

作者：汤金焰徐琦敏卢甜窦晓兵钱倩宇浙江中医药大学生命科学学院浙江杭州310053 浙江中医药大学分子医学研究所

N-乙酰半胱氨酸(NAC)最早在治疗扑热息病中毒时就已经显示出其对肝脏具有保护作用。近年来,随着研究的不断深入,人们发现NAC对多种肝脏疾病均具有一定的改善作用。其作为细胞内还原性谷胱甘肽(GSH)的前体,具有抗氧化、抗凋亡、抑制炎性... 详细信息

N-乙酰半胱氨酸(NAC)最早在治疗扑热息病中毒时就已经显示出其对肝脏具有保护作用。近年来,随着研究的不断深入,人们发现NAC对多种肝脏疾病均具有一定的改善作用。其作为细胞内还原性谷胱甘肽(GSH)的前体,具有抗氧化、抗凋亡、抑制炎性介质释放、调节细胞代谢等作用[1,2]。根据这个独特作用优势,NAC在肝脏相关疾病的治疗中越来越受到关注。本文通过查阅文献,将NAC治疗多种肝病的保护作用进行收集整理,现综述如下。

关键词： N-乙酰半胱氨酸肝脏保护研究进展

甜菜碱调节脂肪组织甲基化治疗酒精性肝病的分子机制研究

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甜菜碱调节脂肪组织甲基化治疗酒精性肝病的分子机制研究

利用微生物转化技术从姜黄素中获取高效调脂新型化合物的研究

脂质组学与脂蛋白的新功能——第十二届全国脂质与脂蛋白学术会议

作者：丁蕾杜仲燕潘然胡林峰钱颖窦晓兵浙江中医药大学生命科学学院

目的:通过体内动物实验和体外细胞实验,探讨甜菜碱通过调节脂肪组织的甲基化来治疗酒精性肝病(ALD)。方法:体内动物实验采用Lieber-DeCarli小鼠模型,雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组、模型组、对照+甜菜碱组、模型+甜菜碱组,甜菜碱以0.5...

目的:通过体内动物实验和体外细胞实验,探讨甜菜碱通过调节脂肪组织的甲基化来治疗酒精性肝病(ALD)。方法:体内动物实验采用Lieber-DeCarli小鼠模型,雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组、模型组、对照+甜菜碱组、模型+甜菜碱组,甜菜碱以0.5%(w/v)添加到液体饲料中。体外细胞实验采用HepG2细胞、3T3-L1细胞和原代脂肪细胞,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,并采用Real Time PCR、Western Blot、ELISA、HPLC等检测方法。结果:①甜菜碱可以

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利用微生物转化技术从姜黄素中获取高效调脂新型化合物的研究

丹参酮Ⅱ_A通过激活PPARα减轻4-HNE诱导的肝细胞损伤的机制研究

第四届全国血脂分析与临床学术研讨会暨第九届全国脂蛋白学术会议

作者：沃兴德程东庆卢德赵窦晓兵杨贞沃立科浙江中医药大学生命科学学院

姜黄素类化合物为姜黄属植物的主要化学成分,具有广泛的生物学活性。我们前期研究发现姜黄醇提物,即姜黄素能使高脂膳食引起的兔主动脉粥样斑块减少,斑块中的胆固醇和甘油三醇含量降低, 姜黄素也能使高脂膳食小鼠和大鼠血清和肝脏胆固...

姜黄素类化合物为姜黄属植物的主要化学成分,具有广泛的生物学活性。我们前期研究发现姜黄醇提物,即姜黄素能使高脂膳食引起的兔主动脉粥样斑块减少,斑块中的胆固醇和甘油三醇含量降低, 姜黄素也能使高脂膳食小鼠和大鼠血清和肝脏胆固醇、甘油三酯、LDL-TC 明显降低,HDL-TC 显著

关键词：

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中国中药杂志 2019年第9期44卷 1862-1868页

作者：钱倩宇应娜杨贞周莉刘庆生胡紫怡范春雷李松涛窦晓兵浙江中医药大学生命科学学院浙江杭州310053 浙江省杭州市中医院老年病科浙江杭州310007

丹参酮Ⅱ_A(tanshinoneⅡ_A,TanⅡ_A)是丹参主要的脂溶性有效成分,能够增强对脂质的代谢功能,降低血清中脂质过氧化物浓度,也具有抗氧化损伤、清除自由基及抑制肝内坏死炎症反应的作用,对肝功能损害预后起到保护作用。因此,研究TanⅡ_A... 详细信息

丹参酮Ⅱ_A(tanshinoneⅡ_A,TanⅡ_A)是丹参主要的脂溶性有效成分,能够增强对脂质的代谢功能,降低血清中脂质过氧化物浓度,也具有抗氧化损伤、清除自由基及抑制肝内坏死炎症反应的作用,对肝功能损害预后起到保护作用。因此,研究TanⅡ_A保护肝功能的确切机制可以为TanⅡ_A防治肝损伤提供重要的理论与实验依据。该文主要通过体外细胞实验,研究TanⅡ_A减轻4-羟基壬烯酸(4-hydroxynonenal,4-HNE)诱导的肝细胞氧化损伤的作用及机制。以正常肝细胞系NCTC 1469为细胞模型,建立4-HNE处理的肝细胞氧化损伤模型。通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放及Hoechst染色法检测TanⅡ_A对肝细胞氧化损伤的保护作用; Western blot法检测TanⅡ_A作用前后过氧化物酶增殖激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptorα,PPARα)及过氧化物酶体增殖物反应元件(peroxisome proliferator response element,PPRE)的蛋白表达变化; Real-time PCR法检测其下游关键酶脂肪醛脱氢酶(fatty aldehyde dehydrogenase,FALDH)的基因表达变化。结果表明4-HNE可增加肝细胞LDH释放,降低细胞存活率,而TanⅡ_A能逆转4-HNE引起的肝细胞损伤。Western blot及Real-time PCR法检测结果显示4-HNE可显著下调肝细胞内PPARα及其下游FALDH的表达,增加细胞内4-HNE蛋白质水平,而经过TanⅡ_A处理后PPARα及FALDH的表达可显著提高,4-HNE蛋白水平也得到了降低。这揭示TanⅡ_A可逆转脂质氧化产物4-HNE引起的肝细胞损伤,其作用机制可能与激活PPARα特异性结合PPRE元件,激活下游FALDH的表达以及清除4-HNE有关,这可能是TanⅡ_A发挥治疗作用的关键机制之一。

关键词：丹参酮ⅡA 4-羟基壬烯酸过氧化物酶增殖激活受体α 过氧化物酶体增殖物反应元件

姜黄素对小鼠肝癌细胞低密度脂蛋白受体基因表达的影响

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浙江中医杂志 2007年第11期42卷 655-657页

作者：罗艳窦晓兵钱颖胡林峰范春雷杭州师范大学浙江杭州310036 浙江中医药大学浙江杭州310053

目的：应用流式细胞仪定量分析药物对小鼠肝细胞低密度脂蛋白受体（LDL—R）表达的影响。方法：在小鼠肝癌细胞系Hca—F培养液中加入不同浓度的姜黄素培养24h。用DiI荧光素标记的低密度脂蛋白（DiI—LDL）与细胞孵育，通过流式细胞仪测... 详细信息

目的：应用流式细胞仪定量分析药物对小鼠肝细胞低密度脂蛋白受体（LDL—R）表达的影响。方法：在小鼠肝癌细胞系Hca—F培养液中加入不同浓度的姜黄素培养24h。用DiI荧光素标记的低密度脂蛋白（DiI—LDL）与细胞孵育，通过流式细胞仪测定细胞对DiI—LDL的摄取量，定量分析姜黄素对肝癌细胞低密度脂蛋白受体基因表达的影响。结果：10～40μmmol／L浓度的姜黄素能显著提高肝癌细胞低密度脂蛋白受体的表达量。结论：姜黄素具有上调低密度脂蛋白受体的表达作用。

关键词：姜黄素肝癌细胞低密度脂蛋白受体基因表达小鼠流式细胞仪

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以竞赛平台为抓手,培养卓越创新人才

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