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羊源多杀性巴氏杆菌感染影响小鼠肺脏转录组的研究

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羊源多杀性巴氏杆菌感染影响小鼠肺脏转录组的研究

作者：程逸文海南大学

学位级别：硕士

多杀性巴氏杆菌病是养殖业中经常出现的一种细菌性疾病,该菌通常情况下广泛存在于动物体内而不致病,当机体免疫力降低或饲养环境恶化等情况出现时,便可大量繁殖损伤动物健康,给畜牧养殖带来较大的经济损失。本实验选择实验室自行分离鉴... 详细信息

多杀性巴氏杆菌病是养殖业中经常出现的一种细菌性疾病,该菌通常情况下广泛存在于动物体内而不致病,当机体免疫力降低或饲养环境恶化等情况出现时,便可大量繁殖损伤动物健康,给畜牧养殖带来较大的经济损失。本实验选择实验室自行分离鉴定的羊源HN01株多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）作为研究对象,对其相关特性和发病机理进行初步探究并获得如下实验结果:实验一,对Pm HN01株进行革兰氏染色,绘制HN01株Pm 30 h内的生长曲线,并制作得到其线性回归方程。用该菌对SPF昆明小鼠进行攻毒测定半数致死量LD,最终测得LD为3.16×10～4CFU。用感染小鼠的病变组织制备病理组织切片,观察到肺脏和脾脏组织间均出现大量炎性细胞,并伴有红细胞淤积,肺泡上皮细胞有脱落。实验二,对SPF级昆明小鼠腹腔注射50倍LD的Pm HN01株菌液,采集新鲜死亡的小鼠肺脏组织送至公司提取RNA进行有参转录组测序。分析测序结果可得:（1）各组样品质量均合格,碱基质量值≥Q30的Reads比例高于94%,与参考基因组匹配率在95%左右;（2）各样本间的基因表达水平大致相同,与对照组相比,显著值P<0.05且|log2（fold change）|≥1的差异表达基因共2976个,其中表达量上升和下降的基因数分别为1605和1371个;（3）在进行GO注释富集分析后发现,差异表达基因在3种GO分类中富集的GO term数量接近,其中病毒组装（GO:0019068）、免疫反应（GO:0006955）、细胞质（GO:0005829）等GO terms存在差异表达基因显著大量富集;（4）经KEGG注释富集分析后发现,差异表达基因被显著富集在病毒蛋白与细胞因子及受体相互作用（ko04061）、细胞增殖和凋亡相关的MAPK（ko04010）、细胞因子受体（ko04060）等KEGG通路;（5）铁死亡通路（ko04216）的富集因子达1.4,通路中显著差异表达基因基本呈上调趋势。（6）经q RT-PCR验证,Il1r2、Cd14、Cd33、Mt1、Nfkbia、Saa3、S100a9、Ccl9、STAT3表达量均显著上调,Il4ra表达量显著下调。实验三,以Pm HN01株基因组为模板,扩增铁调节相关基因Exb D,诱导表达目的蛋白,并进行相应的生物信息学分析。结果表明:扩增基因条带在390 bp处,SDS-PAGE和Western blot显示蛋白条带在19 k D处,均符合预期;HN01株中的该基因与HN02株Pm的亲缘性最近,而Exb D蛋白预测是以α-螺旋和无规则卷曲为主要二级结构的酸性稳定蛋白。综上所述,Pm HN01株的LD为3.16×10～4CFU,对小鼠主要造成肺脏和脾脏的损伤;Pm感染小鼠后,引起小鼠免疫、转导等通路或相关基因的显著差异变化。

关键词：多杀性巴氏杆菌转录组测序 ExbD基因原核表达

奚向东运用“六神穴透刺十三针”治疗躯体形式障碍经验

同方学位论文库评论

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湖北中医杂志 2023年第7期45卷 21-24页

作者：董华程逸文邢文奚向东南京中医药大学附属常州市中医医院江苏常州213003

躯体形式障碍(SD)是一种发病机制尚不明确,以无器质性病变的躯体症状为主要特征的疾病[1]。中医学常归属于“郁证范畴”。患有SD疾病的患者常伴有焦虑或抑郁等情绪改变,临床表现多样化,患者对躯体不适的描述可涉及多个器官系统[2],但躯... 详细信息

躯体形式障碍(SD)是一种发病机制尚不明确,以无器质性病变的躯体症状为主要特征的疾病[1]。中医学常归属于“郁证范畴”。患有SD疾病的患者常伴有焦虑或抑郁等情绪改变,临床表现多样化,患者对躯体不适的描述可涉及多个器官系统[2],但躯体检查与实验室检查常无相关的器质性改变。近年来躯体形式障碍的发病率不断增加,造成医疗资源浪费的同时也给患者带来了巨大经济负担[3-4]。

关键词：躯体形式障碍郁证六神穴治神形神同治

A型多杀性巴氏杆菌感染后小鼠肾脏组织转录组分析

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农业生物技术学报 2022年第8期30卷 1559-1570页

作者：刘志勇程逸文黄惠娴蒋俊明杜丽满初日嘎陈思王凤阳陈巧玲海南大学动物科技学院/海南省热带动物繁殖与疫病研究重点实验室/海口市动物基因工程重点实验室

巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida, Pm)引起的人畜共患病，对畜牧经济发展造成严重影响，然而目前Pm的具体感染致病机制尚不完全清楚。为了研究Pm感染宿主肾脏组织所引起的免疫变化，探究Pm对宿主的感染机制，本研... 详细信息

巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida, Pm)引起的人畜共患病，对畜牧经济发展造成严重影响，然而目前Pm的具体感染致病机制尚不完全清楚。为了研究Pm感染宿主肾脏组织所引起的免疫变化，探究Pm对宿主的感染机制，本研究利用腹腔感染建立羊源A型多杀性巴氏杆菌(HN02菌株)感染小鼠(Mus musculus)的模型，收集其肾脏组织进行转录组测序。转录组分析结果显示，共有3 836个基因差异表达，其中1 741个差异表达基因显著上调，1 426个差异表达基因显著下调；基因本体论(Gene Ontology, GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)注释发现，Pm感染肾脏组织过程中差异表达基因主要富集于跨膜转运蛋白活性、线粒体、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)信号通路、人类乳突病毒(Human papillomavirus, HPV)感染和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路等信号传导、能量代谢和免疫应答过程；免疫相关信号通路关联分析后发现，其中部分基因同时参与不同的信号通路，选取v-rel网状内皮细胞过多症病毒癌基因同源物A (v-rel avian reticuloendotheliosis viral oncogene homolog A, ReLA)、B细胞κ轻肽基因增强子核因子抑制因子α (nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor alpha,NFKBIA)、肿瘤坏死因子受体超家族成员1A (tumor necrosis factor receptor superfamily, member 1A,TNFRSF1A)、表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)和磷酸肌醇3激酶调节亚基3 (phosphoinositide-3-kinase, regulatory subunit 3, PIK3R3)等基因进行qRT-PCR验证，结果表明，这些基因的表达趋势和测序结果一致。本研究初步证明了小鼠肾脏在抵抗Pm感染过程中有一系列免疫反应参与，其中先天性免疫在肾脏组织抗Pm感染过程中发挥着重要作用，该结果为进一步研究Pm与宿主互作机制提供了数据支持。

关键词： A型多杀性巴氏杆菌转录组分析肾脏免疫应答

ORFV感染条件下RSAD2影响宿主细胞免疫反应的研究

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中国兽医学报 2023年第12期43卷 2509-2519页

作者：蒋俊明刘志勇程逸文吴慧潘浩举陈巧玲高宏岩满初日嘎陈思王凤阳杜丽海南大学热带农林学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海南海口570228

为了探究RSAD2在羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)感染下的作用机制,本研究通过慢病毒系统构建RSAD2表达下调的山羊皮肤成纤维(goat skin fibroblast,GSF)细胞。在ORFV感染0、6 h时,分别对GSF细胞(空白对照组:C0、C6)、转染含无意义shRNA慢... 详细信息

为了探究RSAD2在羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)感染下的作用机制,本研究通过慢病毒系统构建RSAD2表达下调的山羊皮肤成纤维(goat skin fibroblast,GSF)细胞。在ORFV感染0、6 h时,分别对GSF细胞(空白对照组:C0、C6)、转染含无意义shRNA慢病毒载体的GSF细胞(阴性对照组:N0、N6)以及RSAD2表达下调的GSF细胞(试验组:R0、R6)进行转录组测序,分析RSAD2影响GSF细胞的免疫应答反应。结果表明,R6 vs R0有1154个差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)并显著富集到NOD样受体信号通路和Toll样受体信号通路。RT-qPCR验证了8个DEGs的表达,包括ACKR3、IL-1A、CCL20、SDC4、SESN2、PCK2、GADD45A和MKNK2。另外,IL-6在ORFV感染及RSAD2干扰后,表达均呈下降的趋势。在蛋白质互作网络中,IL-6蛋白被鉴定潜在的核心蛋白之一,提示其可能与RSAD2蛋白协同抵抗ORFV感染。本研究阐述了RSAD2表达下调GSF细胞在ORFV感染条件下的免疫图谱,为后续RSAD2抗ORFV机制及宿主-ORFV相互作用研究奠定了基础。

关键词：羊口疮病毒 RSAD2 转录组测序 IL-6

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多杀性巴氏杆菌攻毒小鼠肺脏的转录组分析

基因组学与应用生物学 2022年第4期41卷 778-788页

作者：陈杰陈巧玲陈思程逸文刘志勇李彬刘昂满初日嘎王凤阳杜丽李昌金宁一海南大学动物科技学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口570228 军事医学科学院军事兽医研究所长春130122

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)可感染多种动物宿主并引发败血症和呼吸道疾病,危害动物健康,给养殖业带来严重经济损失。本研究为探究多杀性巴氏杆菌感染期间对宿主肺脏基因表达的影响,选取羊源A型多杀性巴氏杆菌对小鼠(Mus mus... 详细信息

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)可感染多种动物宿主并引发败血症和呼吸道疾病,危害动物健康,给养殖业带来严重经济损失。本研究为探究多杀性巴氏杆菌感染期间对宿主肺脏基因表达的影响,选取羊源A型多杀性巴氏杆菌对小鼠(Mus musculus)进行攻毒实验,攻毒后72 h采集小鼠肺脏组织并提取总RNA。基于转录组测序,与对照组相比,攻毒组获得2443个差异表达基因,其中有1437个基因上调,1006个基因下调。对2443个差异表达基因进行GO富集分析,结果显示,差异基因显著富集的GO terms主要有B细胞稳态、T细胞迁移的正调控、整合素复合物和胶原蛋白结合;KEGG富集分析结果显示,差异基因显著富集于11条免疫炎症信号通路,包括细胞因子与细胞因子受体互作、趋化因子信号通路等;免疫炎症相关信号通路中,差异基因经蛋白质-蛋白质互作分析,结果显示,C3、C3ar1、C5ar1、Cxcl10、Cxcr2和Gng11基因处于网络中心,说明这些基因在多杀性巴氏杆菌感染过程中发挥了重要作用;从11条免疫炎症通路的基因中挑选10个进行实时荧光定量PCR验证,发现有8个基因表达趋势与测序结果相符,说明测序数据可靠。本研究展示了小鼠在多杀性巴氏杆菌感染过程中参与免疫反应的关键基因,为探索宿主抗多杀性巴氏杆菌感染分子机制提供了理论依据。

关键词：多杀性巴氏杆菌小鼠肺脏转录组实时荧光定量PCR

公立医院医药价格综合改革下的经营管理变革探索

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中国卫生产业 2018年第35期15卷 192-194页

作者：程逸文常州市中医医院江苏常州213003

公立医院改革的内容与人为涉及到运行管理体制、调整服务价格、医保支付以及人事管理和医药价格等。该文对试点医院进行调查,研究公立医院综合改革内容以及对医院经营管理产生的影响和存在的问题,并在此基础上就如何积极应对配合综合改... 详细信息

公立医院改革的内容与人为涉及到运行管理体制、调整服务价格、医保支付以及人事管理和医药价格等。该文对试点医院进行调查,研究公立医院综合改革内容以及对医院经营管理产生的影响和存在的问题,并在此基础上就如何积极应对配合综合改革,加强经营管理,提高医院效益,分享个人的观点与认识。

关键词：公路公立医院药价改革经营管理对策研究

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建立医疗机构诚信评价制度的实践与思考

中国卫生事业管理 2009年第3期26卷 160-161页

作者：蔡正茂李建南程逸文汪红艳复旦大学公共卫生学院上海200032 常州市卫生局江苏常州213003

文章认为开展医疗机构诚信评价对促进机构规范化管理,促进行业长期可持续发展,减轻行政部门的工作负担,具有重要的现实意义。文章介绍了本地开展诚信评价的内容、方法、诚信评价的等级,并采用信息发布的形式公布评价结果,取得了良好的... 详细信息

文章认为开展医疗机构诚信评价对促进机构规范化管理,促进行业长期可持续发展,减轻行政部门的工作负担,具有重要的现实意义。文章介绍了本地开展诚信评价的内容、方法、诚信评价的等级,并采用信息发布的形式公布评价结果,取得了良好的效果。作者提出应建立统一的诚信法规体系、开放的信息平台、透明的评价标准、严格的奖惩机制,从而建立诚信的医疗服务体系。

关键词：医疗机构诚信评价制度

布鲁氏菌脂多糖刺激山羊支气管上皮细胞的全转录组分析

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基因组学与应用生物学 2022年第9期41卷 1851-1861页

作者：吴昊天张振兴陈思刘志勇安琪陈杰程逸文刘昂何美荣蒋俊明陈巧玲王凤阳杜丽满初日嘎海南大学动物科技学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室/海口市动物基因工程重点实验室海口570228

布鲁氏菌(Brucella)的细胞壁成分脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是布鲁氏菌逃避宿主免疫的主要毒力因子之一,由于LPS具有较低的免疫原性,因而不会激活宿主Toll样受体。本研究采用猪布鲁氏菌S2株(Brucella suis S2,B.suis S2)的LPS刺激... 详细信息

布鲁氏菌(Brucella)的细胞壁成分脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是布鲁氏菌逃避宿主免疫的主要毒力因子之一,由于LPS具有较低的免疫原性,因而不会激活宿主Toll样受体。本研究采用猪布鲁氏菌S2株(Brucella suis S2,B.suis S2)的LPS刺激山羊(Capra hircus)支气管上皮细胞,通过全转录组测序技术筛选响应B.suis S2 LPS刺激的宿主差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)和差异表达miRNA。通过筛选结果中|log2fold change|>1且P<0.05的基因和miRNA,在LPS刺激组和对照组间共产生97个差异基因和3条差异miRNA,其中包括58个上调基因和39个下调基因,3条差异miRNA均为下调。通过基因本体论(gene ontology,GO)注释和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集发现,DEGs主要富集于ATP代谢、RAGE受体结合、IL-12受体活性、趋化因子信号通路、细胞凋亡、细胞黏附分子、白细胞跨内皮迁移、B细胞受体信号通路、FcγR介导的吞噬作用等通路。蛋白质互作网络图可以将DEGs编码的蛋白质分为4个聚类,分别代表神经内分泌相关蛋白、核糖体相关蛋白、呼吸作用相关蛋白和免疫系统相关蛋白。此外,筛选到的chi-miR-1与INPP5D在B细胞受体信号通路上存在潜在相互调控作用。经RT-qPCR验证,基因表达量变化趋势和测序结果一致。该结果为进一步研究布鲁氏菌LPS在布鲁氏菌免疫逃逸以及宿主免疫应答中的功能奠定基础。

关键词：布鲁氏菌脂多糖转录组免疫逃避

中医药促进家庭医生签约服务提质增效的推进策略

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智慧健康 2018年第27期4卷 15-16页

作者：程逸文常州市中医医院江苏常州213003

家庭医生签约服务是以全科医生为核心,通过签约的方式,与签约家庭建立起一种长期、稳定的服务关系,对签约家庭的健康进行全程维护^([1])。《中医药法》提出应当发展中医药预防、保健服务。全面推进中医药融入家庭医生签约服务有利于提... 详细信息

家庭医生签约服务是以全科医生为核心,通过签约的方式,与签约家庭建立起一种长期、稳定的服务关系,对签约家庭的健康进行全程维护^([1])。《中医药法》提出应当发展中医药预防、保健服务。全面推进中医药融入家庭医生签约服务有利于提升家庭医生签约服务质量,改善居民健康水平。

关键词：家庭医生签约服务中医药推进对策分析