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小黑杨（Populus simonii×***）花粉植株转耐盐基因（betA）的研究

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小黑杨（Populus simonii×***）花粉植株转耐盐基因（betA）的研...

作者：程贵兰东北林业大学

学位级别：硕士

本研究以小黑杨(Populus simonii×***)花粉植株为试材，采用根癌农杆菌介导法进行胆碱脱氢酶基因(betA基因)的转化。betA基因能一步将胆碱合成为甘氨酸甜菜碱，甘氨酸甜菜碱是一种重要的调渗物质，盐胁迫下，甘氨酸甜菜碱的积累可以保... 详细信息

本研究以小黑杨(Populus simonii×***)花粉植株为试材，采用根癌农杆菌介导法进行胆碱脱氢酶基因(betA基因)的转化。betA基因能一步将胆碱合成为甘氨酸甜菜碱，甘氨酸甜菜碱是一种重要的调渗物质，盐胁迫下，甘氨酸甜菜碱的积累可以保护细胞内蛋白质的结构和功能，降低细胞水势，从而增强植物自身的耐盐能力。探讨了影响植物遗传转化的若干因素，初步建立了小黑杨花粉植株的遗传转化体系。经PCR检测、Southern斑点杂交及Southern印迹杂交，证明betA基因已整合到小黑杨花粉植株基因组中，在NaCl盐胁迫条件下，转基因植株的耐盐能力比对照植株有所提高。研究结果如下： (1) 确定了筛选小黑杨花粉植株转化体选择压为卡那霉素，其浓度为40mg·L。 (2) 测试了三种头孢类抗生素有效的抑菌浓度及对小黑杨花粉植株叶片分化的影响。确定使用上海制药四厂和哈尔滨制药总厂生产的头孢唑林钠为脱菌抗生素，使用浓度为700 mg·L。 (3) 建立了以小黑杨花粉植株叶片为外植体的转化体系：预培养：在分化培养基(MH+6-BA0.5mg·L+NAA0.05mg·L+蔗糖25g·L+琼脂6g·L) 中预培养2d;侵染：用OD为0.1的工程菌液进行侵染，时间为3～5min;共培养：在分化培养基上置暗处共培养2～3d;选择培养：置选择脱菌培养基(MH+6-BA0.5mg·L+NAA0.05mg·L+40mg·LKm+700mg·L头孢唑林钠+25g·L蔗糖+琼脂6g·L)上进行选择培养;共获得4个卡那霉素抗性芽(T1～T4)，经PCR及Southern斑点杂交检测均为阳性，转化率为1.23％。生根：在选择生根培养基(MH+0.2mg·LIBA+20mg·LKm+300mg·L头孢唑林钠+20g·L蔗糖+6g·L琼脂)上，选择生根率为100％，将4个转基因株系共485株无菌苗移栽至温室，移栽成活率为100％。 (4) 耐盐实验结果表明，各转基因植株的耐盐性较对照均有所提高，T1、T2耐受NaCl最高限为0.75％，T3最高限为0.65％、T4最高限为0.70％，4个转化株系耐盐能力由强到弱依次为：T2、T1、T4、T3。

关键词：小黑杨花粉植株 betA基因遗传转化 PCR Southern杂交

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中黑防杨叶片不定芽再生体系的研究

安徽农业科学 2010年第12期38卷 6138-6139页

作者：程贵兰蔡智军姜静辽宁农业职业技术学院辽宁营口115009 东北林业大学黑龙江哈尔滨150040

[目的]研究6-BA与NAA不同质量浓度组合,不同的材料来源及不同的取材方法对中黑防杨叶片不定芽分化的影响。[方法]以中黑防杨试管苗叶片为外植体,以MS为基本培养基。[结果]中黑防杨叶片不定芽诱导的最佳6-BA与NAA质量浓度组合为,0.5mg/L... 详细信息

[目的]研究6-BA与NAA不同质量浓度组合,不同的材料来源及不同的取材方法对中黑防杨叶片不定芽分化的影响。[方法]以中黑防杨试管苗叶片为外植体,以MS为基本培养基。[结果]中黑防杨叶片不定芽诱导的最佳6-BA与NAA质量浓度组合为,0.5mg/L的6-BA与0.05mg/L的NAA,其叶片不定芽诱导率为97.91%;最佳材料来源为生根试管苗,其叶片不定芽诱导率达96.66%;最佳取材方法为选取植株上部0.5cm左右幼嫩叶片,其叶片不定芽诱导率98.33%。[结论]建立了稳定的不定芽再生体系,为农杆菌介导的叶盘转化法奠定了基础。

关键词：中黑防杨叶片不定芽再生

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头孢类抗生素对中黑防杨叶片分化的影响

广东农业科学 2010年第11期37卷 37-38,59页

作者：蔡智军程贵兰辽宁农业职业技术学院辽宁营口115009

探讨了头孢唑啉钠、头孢曲松钠、头孢霉素3种头孢类抗生素对农杆菌EHA105的抑制作用,以及对中黑防杨叶片生长和分化的影响。结果表明:头孢霉素和头孢曲松钠的抑菌效果优于头孢唑啉钠,但二者对叶片分化的抑制性太强,而750 mg/L的头孢唑... 详细信息

探讨了头孢唑啉钠、头孢曲松钠、头孢霉素3种头孢类抗生素对农杆菌EHA105的抑制作用,以及对中黑防杨叶片生长和分化的影响。结果表明:头孢霉素和头孢曲松钠的抑菌效果优于头孢唑啉钠,但二者对叶片分化的抑制性太强,而750 mg/L的头孢唑啉钠对叶片分化影响很弱,仅比对照低3%,同时抑菌效果好。因此确定了由农杆菌介导的中黑防2号杨遗传转化时的抗生素为头孢唑啉钠其使用浓度为750 mg/L。

关键词：抗生素中黑防杨叶片分化

创新创业教育与高职中药专业教育相融合的探索与实践

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辽宁农业职业技术学院学报 2018年第5期20卷 22-25页

作者：程贵兰辽宁农业职业技术学院辽宁营口115009

分析了高职院校创新创业教育存在问题及将其融入高职专业教育的必要性,具体提出了高职中药专业师资队伍建设、课程体系及课程群构建、实训基地建设、制度保障措施等方面的具体做法。

关键词：创新创业教育高职中药专业教育融合

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农业高职教育考试方法改革的探索与实践

安徽农业科学 2010年第26期38卷 14797-14799,14803页

作者：王振龙朴素艳程贵兰牛长满那燕辽宁农业职业技术学院辽宁营口115009 辽阳职业技术学院辽宁辽阳111000

分析了传统考试方法存在的问题,并从树立现代高职考试观、科学命题、加强过程考核、实行小组积分制、加强考试管理等几方面,介绍了农业高职教育考试方法改革的研究与实践成果。

关键词：农业高职教育考试方法小组积分制过程考核

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秋水仙素对龙牙楤木根段扦插成活率的影响

辽宁农业职业技术学院学报 2018年第3期20卷 6-8页

作者：程贵兰辽宁农业职业技术学院辽宁营口115009

龙牙楤木根段扦插试验发现扦插基质、根段粗度对龙牙楤木根段扦插成活率有一定影响。结果表明珍珠岩:草炭(1:2)为基质的成活率最高达74%,直径为1.5 cm的根段成活率最高达78%。秋水仙素浓度及浸泡时间对龙牙楤木根段成活率产生较大影响,... 详细信息

龙牙楤木根段扦插试验发现扦插基质、根段粗度对龙牙楤木根段扦插成活率有一定影响。结果表明珍珠岩:草炭(1:2)为基质的成活率最高达74%,直径为1.5 cm的根段成活率最高达78%。秋水仙素浓度及浸泡时间对龙牙楤木根段成活率产生较大影响,试验结果表明200 mg/kg的秋水仙素浸泡6 h成活率最高达36.67%。

关键词：秋水仙素龙牙楤木根段扦插影响

农杆菌抑菌剂的抑菌效果及其对小黑杨叶片不定芽产生率的影响

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植物生理学通讯 2004年第6期40卷 689-692页

作者：詹立平姜静赵鑫程贵兰李淑娟惠楠刘桂丰东北林业大学林学院哈尔滨150040

研究了几种抗生素及AgNO3对农杆菌的抑菌效果和对小黑杨花粉植株叶片不定芽产生率的影响。确定首选抑菌抗生素是头孢噻肟钠,AgNO3的抑菌效果也很好,两者的有效抑菌浓度分别为200和3.0 mg·L-1,抑菌时间均为9 d,此浓度下小黑杨叶片的... 详细信息

研究了几种抗生素及AgNO3对农杆菌的抑菌效果和对小黑杨花粉植株叶片不定芽产生率的影响。确定首选抑菌抗生素是头孢噻肟钠,AgNO3的抑菌效果也很好,两者的有效抑菌浓度分别为200和3.0 mg·L-1,抑菌时间均为9 d,此浓度下小黑杨叶片的不定芽产生率为88％和89％。

关键词：小黑杨不定芽叶片 AgNO3 花粉植株株叶抑菌效果农杆菌

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基于响应面法的刺五加酵素果冻配方优化

现代食品科技 2024年

作者：高鲲蔡智军何丹贾金辉司旭王心哲程贵兰辽宁农业职业技术学院食品药品学院沈阳农业大学食品学院

刺五加属于药食同源食物，为了提高其果实的利用率，该研究以质构特性、感官评分和析水率作为评价指标，采用单因素试验确定各原料的最佳添加量，通过响应面试验对果冻的配方进行优化。结果表明，复合增稠剂添加量、刺五加酵素添加量、... 详细信息

刺五加属于药食同源食物，为了提高其果实的利用率，该研究以质构特性、感官评分和析水率作为评价指标，采用单因素试验确定各原料的最佳添加量，通过响应面试验对果冻的配方进行优化。结果表明，复合增稠剂添加量、刺五加酵素添加量、甜菊糖苷添加量对果冻的品质影响显著。最佳配方是果胶添加量2.0%、魔芋胶添加量1.0%、刺五加酵素添加量45.0%、甜菊糖苷添加量1.0%、柠檬酸添加量2.0%，纯净水添加量49.0%。此时感官评分为89.6，析水率为2.14%，均优于各试验组合，弹性16.68mm、回复性0.46，硬度22.86N,34.95m J，各质构特性与市售果冻相近。该配方的果冻呈鲜亮紫红色，色泽均匀，光泽度好，半透明，刺五加酵素味浓郁，无异味，富有弹性和咀嚼性，酸甜适中，质地均匀，结构紧实，具有较高的感官评分和良好的质构特性。该研究为刺五加果实的深加工、保健食品的开发提供思路和参考。

关键词：响应面法刺五加果冻甜菊糖苷质构分析感官评价析水率

卡那霉素对小黑杨花粉植株叶片分化及试管苗生根的影响

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辽宁农业职业技术学院学报 2010年第2期12卷 3-4页

作者：程贵兰蔡智军辽宁农业职业技术学院辽宁营口115009

探讨了卡那霉素对小黑杨花粉植株叶片分化及试管苗生根的影响。确立了由农杆菌介导的的小黑杨花粉植株遗传转化研究中转化体的筛选浓度,其中叶片转化筛选阶段卡那霉素的浓度为:20 mg.L-1～40mg.L-1;抗性芽生根培养阶段卡那霉素的浓度为2... 详细信息

探讨了卡那霉素对小黑杨花粉植株叶片分化及试管苗生根的影响。确立了由农杆菌介导的的小黑杨花粉植株遗传转化研究中转化体的筛选浓度,其中叶片转化筛选阶段卡那霉素的浓度为:20 mg.L-1～40mg.L-1;抗性芽生根培养阶段卡那霉素的浓度为20 mg.L-1。

关键词：卡那霉素小黑杨花粉植株叶片分化试管苗生根