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罗氏沼虾转录组SSR标记筛选及其与体质量相关性分析

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水生生物学报 2022年第8期46卷 1150-1159页

作者：陈雪峰王春琳李荣华顾志敏徐宾朋程海华彭菲浙江省淡水水产研究所国家罗氏沼虾遗传育种中心湖州313001 宁波大学海洋学院宁波315211

研究通过转录组测序对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)SSR标记进行了发掘,获得SSR位点18592个。随机选取了63个SSR位点设计引物并利用10个个体进行多态性位点筛选,共获得31个具有多态的SSR标记,利用其中19个SSR标记对全同胞家系群(... 详细信息

研究通过转录组测序对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)SSR标记进行了发掘,获得SSR位点18592个。随机选取了63个SSR位点设计引物并利用10个个体进行多态性位点筛选,共获得31个具有多态的SSR标记,利用其中19个SSR标记对全同胞家系群(FS)119尾虾及孟加拉F3代野生群(MJL)199尾虾的群体遗传多样性进行分析,并对SSR位点与体质量性状进行关联性分析。结果表明:FS群体共检测到40个等位基因,平均等位基因数为2.1053,平均观测杂合度0.4525,平均期望杂合度0.3804,平均多态信息含量0.3076,处于中度遗传多态水平;MJL群体共检测到65个等位基因,平均等位基因数为3.4211,平均观测杂合度0.4105,平均期望杂合度0.4496,平均多态信息含量0.3882,处于中度遗传多态水平。19个SSR位点与FS群体体质量没有相关性(P>0.05),而在MJL群体中, 4个SSR位点与体质量显著相关(P<0.05)。对差异显著的位点进行不同基因型体质量性状的多重比较, MR28位点277/285基因型体质量均值极显著高于277/289和285/285基因型(P<0.01),显著高于285/289、273/289、270/273和285/293基因型(P<0.05);MR32位点266/266和266/270基因型体质量均值显著高于270/270基因型(P<0.05);MR34位点210/214基因型体质量均值显著高于210/210和214/214基因型(P<0.05);MR45位点174/190基因型体质量均值显著高于182/182和182/190基因型(P<0.05)。研究结果为罗氏沼虾分子标记辅助育种奠定了基础。

关键词：转录组测序 SSR标记关联分析体质量罗氏沼虾

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工厂化循环水养殖技术研究与产业化发展

中国水产 2022年第10期563卷 41-49页

作者：朱建新刘慧程海华张龙陈世波刘洋中国水产科学研究院黄海水产研究所浙江省淡水水产研究所全国水产技术推广总站、中国水产学会青岛卓越海洋科技有限公司

工厂化循环水养殖是集水产养殖技术与现代工业及信息化技术于一体的高度集约化养殖模式,能有效实现生产效率高、生态环境佳、动物福利优。本文通过回顾发展历史与案例研究,详细分析了国内外循环水养殖科技与产业发展情况、主要问题与最... 详细信息

工厂化循环水养殖是集水产养殖技术与现代工业及信息化技术于一体的高度集约化养殖模式,能有效实现生产效率高、生态环境佳、动物福利优。本文通过回顾发展历史与案例研究,详细分析了国内外循环水养殖科技与产业发展情况、主要问题与最新进展,探讨了这一领域的发展趋势及亟需解决的重大问题。随着我国渔业现代化水平不断提高,新技术新材料不断出现,以及生态文明建设与实现碳中和的要求,循环水养殖模式必将迎来新的发展。

关键词：水产养殖技术渔业现代化工厂化循环水养殖动物福利信息化技术生态环境碳中和生态文明建设

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浅析确定物主控制范围在盗窃案件定性中的作用

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人民检察 1999年第2期 44-45页

作者：程海华浙江省嘉兴市秀城区人民检察院

一、控制范围的地位与作用物主的控制范围是指物品的持有人对此持有物能够实行控制的范围，在此范围内，持有人具有确定的支配、使用及处分该持有物的能力。物主控制范围的确定对于盗窃案件的定性，包括罪与非罪、此罪与彼罪、重罪与轻... 详细信息

一、控制范围的地位与作用物主的控制范围是指物品的持有人对此持有物能够实行控制的范围，在此范围内，持有人具有确定的支配、使用及处分该持有物的能力。物主控制范围的确定对于盗窃案件的定性，包括罪与非罪、此罪与彼罪、重罪与轻罪、未遂与既遂等方面具有很重要的意...

关键词：控制范围盗窃案件被告人物主盗窃罪遗忘物公共场所罪与非罪批发部控制力

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轮叶黑藻对罗氏沼虾养殖效果影响的现场试验

水产学杂志 2022年第1期35卷 59-64页

作者：程海华宋超陈雪峰李喜莲徐洋彭菲高强浙江省淡水水产研究所浙江湖州313001 浙江省水产种业有限公司浙江湖州313299

水温稳定在25℃以上时,在面积0.47~0.62 hm^(2)的4口池塘中放养体长为0.7~0.8 cm的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)"南太湖2号",密度为37.5万尾/hm^(2);同时,截取长约15 cm鲜嫩轮叶黑藻(Hydrilla verticillata)枝条,距离池边5 m扦插,株距约2.5 m,行距约3 m,水草种植区面积约占池塘面积的20%,常规投喂饲养,研究池塘中种植轮叶黑藻对罗氏沼虾的成活率、每公顷产量、饵料系数及养殖水质(氨氮、亚硝酸盐、pH)的影响。1^(#)、2^(#)、3^(#)池塘为平行试验组,4^(#)池塘没有种植轮叶黑藻作对照组。结果显示:试验组罗氏沼虾的成活率比对照组高8%,每公顷池塘产量增加约172.5 kg,饲料系数降低7%。单因素方差分析表明:试验组之间、试验组与对照组之间罗氏沼虾的体长、体质量差异均不显著(P>0.05),但试验组的每公顷养殖效益高于对照组。在罗氏沼虾池塘中种植轮叶黑藻能稳定养殖水体的水质,减少病害发生,提高其成活率、每公顷产量,降低饲料系数,增加养殖效益。

关键词：罗氏沼虾轮叶黑藻水质成活率饲料系数

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)养殖池塘沉积物中细菌、硫酸盐还原菌和硫氧化菌的垂直分布特征

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微生物学报 2022年第7期62卷 2719-2734页

作者：邹松保高强程海华倪蒙胥晴刘梅周聃周志明原居林浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室浙江湖州313001 湖州师范学院生命科学学院浙江湖州313000

沉积物中微生物介导的硫循环在有机物分解和养分循环中发挥重要作用,但目前我们对水产养殖生态系统中的参与硫酸盐还原和硫氧化过程的微生物多样性及其调控机制仍知之甚少。【目的】探究硫酸盐还原菌(sulfate-reducing bacteria,SRB)和... 详细信息

沉积物中微生物介导的硫循环在有机物分解和养分循环中发挥重要作用,但目前我们对水产养殖生态系统中的参与硫酸盐还原和硫氧化过程的微生物多样性及其调控机制仍知之甚少。【目的】探究硫酸盐还原菌(sulfate-reducing bacteria,SRB)和硫氧化菌(sulfur-oxidizing bacteria,SOB)的垂直分布特征及其主要的环境驱动因素。【方法】本研究利用高通量测序和荧光定量PCR(qPCR)分析了罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)养殖池塘沉积物表层(0–1 cm)、中层(10–11 cm)和底层(20–21 cm)中的细菌、SRB和SOB的丰度、多样性和群落组成。【结果】细菌(16S rRNA)、硫酸盐还原菌(dsrB)和硫氧化菌(soxB)的基因拷贝数呈现着从表层到中层急剧骤降的趋势(ANOVA,P0.05),以及α多样性分析显示3个群体的物种丰富度和均匀度都随深度而逐步降低,这都说明硫循环过程主要发生于沉积物的表层。γ-、δ-和β-变形菌分别是细菌、SRB和SOB的优势类群;其中SRB以Desulfobacca属和脱硫八叠球菌属(Desulfosarcina)为主,前者在表层有着最低的比重,而后者却与之相反;硫杆菌(Thiobacillus)作为细菌和SOB的优势属,更广泛地分布于中层沉积物中。RDA分析和Mantel检验揭示了影响细菌群落的主要环境因子是NO、SO、TOC和TON,而SRB的群落变异主要是由As、TON、NO和Pb所驱动,以及SOB的群落变化则主要响应了TC、NO、NH和TON浓度。【结论】养殖池塘底栖的细菌、SRB和SOB的丰度、多样性和群落结构的垂直分布特征可能受到多种环境因素共同的影响。

关键词：罗氏沼虾硫氧化菌硫酸盐还原菌多样性垂直分布驱动因素

碳源及生物膜干露时间对海水循环水养殖系统生物滤池净化效率的影响

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碳源及生物膜干露时间对海水循环水养殖系统生物滤池净化效率的影...

作者：程海华上海海洋大学

学位级别：硕士

生物滤池作为循环水养殖系统(RAS)水处理的核心单元,其净化效果直接关系到养殖效益的好坏,因此,目前关于如何提高生物滤池净水能力的研究越来越受研究人员青睐。在RAS中,有机碳源作为生物膜上微生物的重要营养物质,其在养殖水中的存在... 详细信息

生物滤池作为循环水养殖系统(RAS)水处理的核心单元,其净化效果直接关系到养殖效益的好坏,因此,目前关于如何提高生物滤池净水能力的研究越来越受研究人员青睐。在RAS中,有机碳源作为生物膜上微生物的重要营养物质,其在养殖水中的存在形式及含量大小,会对主要功能菌的代谢活动产生一定的作用,进而影响生物滤池的净水效果;生物膜干露时间长短与膜上主要功能菌群的数量变化之间存在一定关系,从而也会影响生物滤池净水能力。本文通过采用自制的循环水养殖模拟装置,系统地进行了关于有机碳源和干露时间在生物滤池净化过程方面的试验研究,主要研究内容与结果如下:1、利用生物滤池模拟装置,以实际养殖废水为处理对象,探讨了4种常见有机碳源(葡萄糖、乙醇、红糖和淀粉)及不同碳氮比(C(TOC)/C(TN)=C/N)对有机物去除、硝化反应和异养反硝化作用等生物滤池主要净化过程的影响。碳源初选结果显示,同种碳源下,当C/N从0升高至6过程中,生物滤池对TAN(总氨氮)的去除率呈先升高后降低趋势;当C/N较小时,各组之间对NO-N(亚硝酸盐氮)的去除率没有显著性差异(P>0.05),随着C/N继续升高,NO-N去除率则显著降低(P<0.05);乙醇组除外,随着C/N升高,其他3组对COD(高锰酸盐指数)的去除效果,先逐渐增强而后慢慢稳定;各组对NO-N(硝酸盐氮)和TN(总氮)的去除效果先增强后减弱,且变化明显(P<0.05),当C/N=4时,去除效果最好。碳源复选结果显示,在C/N=4条件下,分别添加有机碳源(乙醇、淀粉、红糖和葡萄糖)的4组对COD、TAN、NO-N和TN的去除率与对照组相比,均明显较高(P<0.05);而对照组NO-N的去除率最高,达到93.59%;乙醇组对水体中TAN、NO-N、NO-N和TN的净化效果好于其他3个碳源组。结果表明,乙醇作为外加碳源及C/N为4:1时,能很好地增强生物滤池的净化作用。2、采用循环水养殖系统模拟装置,选择葡糖糖、乙醇、红糖和淀粉等4种碳源,按C(TOC)/N=4控制添加量,对不同碳源组和对照组(不添加碳源)牙鲆幼鱼的养殖效果进行比较。结果显示,牙鲆幼鱼经过40 d的饲喂,对照组增重率最低,为104.0%,与乙醇组和葡萄糖组之间存在显著性差异(P<0.05);各组存活率均超过85%;红糖组饵料系数略大于对照组,其它3组明显小于对照组;养殖过程中各组氨氮浓度均小于0.3 mg/L;硝酸盐浓度先升高后趋于稳定,稳定阶段对照组含量高于其它4组;添加少量可溶性有机碳源会导致养殖水体中有机物含量迅速升高,经过微生物分解利用短时间内又恢复正常。研究表明,向循环水养殖系统中添加适量有机碳源对牙鲆幼鱼的养殖效果起到促进作用。3、为了在生产中建立科学的生物滤池清洗方法提供理论帮助,研究不同干露时间处理后,生物膜硝化作用效果及主要功能菌群数量的变化情况。结果表明:当干露时间为3h时,系统经过21h运行,生物膜对TAN和NO-N的去除率分别最高,达到了80.1%和93.5%;各处理组经过相应干露时间处理后,生物载体上异养细菌和硝化细菌数量均明显减少;除了9h组和15h组外,其它各组之间,主要功能菌群数量的差异非常显著(P<0.01)。综上所述,在实际生产中,在需要对生物滤池进行冲洗的情况下,冲洗时间应控制在3h左右。

关键词：循环水养殖系统生物滤池有机碳源干露时间净化效果

SGLT2抑制剂治疗T2DM合并冠心病的疗效及心血管结局的系统综述和Meta分析

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SGLT2抑制剂治疗T2DM合并冠心病的疗效及心血管结局的系统综述和M...

作者：程海华山西医科大学

学位级别：硕士

目的:系统评价钠-葡萄糖协同转运蛋白2（sodium-glucose cotransporter 2,SGLT2）抑制剂治疗2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）合并冠心病患者的疗效与心血管结局,并探讨其可能的炎症机制,为临床2型糖尿病治疗合理用药提供理... 详细信息

目的:系统评价钠-葡萄糖协同转运蛋白2（sodium-glucose cotransporter 2,SGLT2）抑制剂治疗2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）合并冠心病患者的疗效与心血管结局,并探讨其可能的炎症机制,为临床2型糖尿病治疗合理用药提供理论依据。方法:全面检索Pub Med、Cochrane Library、Clinical Trials、Embase、中国知网、万方数据库与CBM,检索时限截至2021年2月,收集2型糖尿病合并冠心病患者,其中试验组予SGLT2抑制剂治疗,对照组予其他药物治疗的随机对照试验（randomized control trail,RCT）。确定纳入文献进行资料提取,选取Cochrane风险偏倚的评估工具5.1.0对所选的各研究间进行质量评价,选择Rev Man5.4.1软件进行Meta分析。结果:确定共纳入9项RCT,共计21216例患者。Meta分析结果显示,实验组患者在降低超敏C反应蛋白（hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP）[WMD=-5.85,95%CI（-10.06～-1.64）,P=0.007]、空腹胰岛素[WMD=-1.29,95%CI（-1.56～-1.02）,P＜0.00001]、空腹葡萄糖（fasting plasma glucose,FPG）[WMD=-1.34,95%CI（-1.71～-0.96）,P＜0.00001]、糖化血红蛋白水平[WMD=-0.47,95%CI（-0.75～-0.20）,P=0.0008],及增加脂联素水平[WMD=2.31,95%CI（1.92～2.70）,P＜0.00001]方面优于对照组,两者差异有统计学意义（P＜0.001）。心血管事件:实验组患者复合总体心血管事件风险[RR=0.89,95%CI（0.81～0.97）,P＜0.01]、心力衰竭住院发生率[RR=0.69,95%CI（0.62～0.79）,P＜0.01]、心肌梗死发生风险率[RR=0.88,95%CI（0.80～0.96）,P＜0.05]、全因死亡率[RR=0.84,95%CI（0.68～0.97）,P＜0.05]均低于对照组,差异有统计学意义;而两组在心血管死亡和卒中发生率方面,差异无统计学意义。结论:SGLT2抑制剂用于2型糖尿病合并冠心病治疗,可显著改善患者空腹血糖、糖化血红蛋白（glycosylated hemoglobin A1c,Hb A1c）、胰岛素水平,降低hs-CRP、提高脂联素水平改善炎症反应,对心血管有一定的保护作用,但具体机制仍需临床上进一步研究。

关键词： SGLT2抑制剂 2型糖尿病冠心病炎症心血管结局

血清KL-6检测在结缔组织病相关间质性肺病中的意义

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血清KL-6检测在结缔组织病相关间质性肺病中的意义

作者：程海华新乡医学院

学位级别：硕士

背景结缔组织病(Connective Tissue Disease,CTD)是一组慢性、非特异性、炎性、免疫性疾病,累及全身血管、皮肤、骨骼、关节和肌肉,包括类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)、系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus,SLE)、系... 详细信息

背景结缔组织病(Connective Tissue Disease,CTD)是一组慢性、非特异性、炎性、免疫性疾病,累及全身血管、皮肤、骨骼、关节和肌肉,包括类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)、系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus,SLE)、系统性硬化症(Systemic Sclerosis,SSc)、肌炎(Polymyositis,PM)/皮肌炎(Dermatomyositis,DM)、干燥综合征(Sjogren’s syndrome,SS)、混合型结缔组织病(Mixed Connective Tissue Disease,MCTD)及血管炎(vasculitis)等,可累及全身各个脏器,易侵犯肺部,主要病变为间质性肺病(interstitial lung disease,ILD)——一组异质性弥漫性间质性疾病,是CTD患者预后差、导致其死亡的主要病因之一。目前诊断结缔组织病相关间质性肺病CTD-ILD主要依靠患者的症状、体征、胸部高分辨CT(HRCT)、肺功能测定、肺活检等。但是上述方法存在重复性差、有创伤性等缺点,易漏诊、误诊,另一方面不利于随访与监测。Ⅱ型肺泡上皮组织细胞分泌的大分子(200k Da)唾液酸糖链抗原KL-6(Krebs Von den Lungen-6),免疫组化结果提示是可以反应肺泡上皮细胞损伤与再生的标志物,是目前关于结缔组织病相关间质性肺病(CTD-ILD)研究最多的血清标志物之一,研究表明,相比于无ILD患者,ILD患者的血清KL-6水平明显升高,同时也有研究结果提示系统性硬化症合并间质性肺病(SSc-ILD)组与系统性硬化症无间质性肺病组(SSc-NILD)血清KL-6浓度无显著差异,大多数相关研究还是肯定了KL-6在CTD-ILD中诊断的价值,同时其诊断临界值多数波动于500U/ml。对于CTD-ILD的治疗尚缺乏系统的标准,主要是通过对患者整体病情的评估,决定治疗方案,目前治疗方案选择个体化差异大,主要用药包括激素、免疫抑制及抗纤维化治疗等,疗效尚不确切,同时关于KL-6评价药物治疗效果的相关研究较为缺乏。目的通过检测CTD对照组与CTD-ILD实验组患者血清KL-6浓度,比较两组别之间的差异,并分析CTD-ILD组患者血清KL-6浓度与其它血液化验指标:白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分比(NEU%)、C-反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)的相关性,进一步验证血清KL-6在CTD-ILD诊断和评估病情方面的价值;检测CTD-ILD组治疗前后血清KL-6水平及与胸部HRCT病变面积关系,评估血清KL-6在评估治疗反应性的价值。方法收集2019年01月-2020年12月于濮阳市人民医院风湿免疫科初诊CTD-ILD患者共45例,同期匹配初诊CTD不合并ILD患者30例。记录所有入组患者的基础信息与资料如年龄、性别、病种及实验室指标、影像学检查(胸部HRCT)结果。血清KL-6的浓度采用化学发光酶免疫检测方法进行检测,统计学处理采用SPSS 25.0统计软件行差异性对比及相关性分析。结果本实验共纳入75名患者,其中CTD-ILD患者45例,CTD-NILD患者30例,CTD-ILD治疗组18例,CTD-ILD组血清KL-6平均浓度536.0(447.0,706.0)U/m L明显高于CTD-NILD组平均浓度201.0(142.5,289.0)U/m L,组别之间比较存在显著差异(P<0.05)。采用ROC曲线图分析CTD患者KL-6在诊断继发性ILD的最佳临界值为377.0 U/ml;KL-6浓度与CRP、WBC、NEU%实验室指标之间无相关性,与ESR存在正相关关系;CTD-ILD组治疗前后胸部HRCT病变面积与血清KL-6浓度之间相关系数分别为0.978、0.758,呈正相关关系,且治疗后KL-6平均浓度值为661.56±243.19 U/ml,明显低于CTD-ILD治疗前组828.89±310.02 U/ml,对比组间存在显著差异(P<0.05)。结论1.血清KL-6是诊断及监测CTD-ILD病情活动的重要血清学标志物。2.血清KL-6可以作为评估CTD-ILD治疗效果的血清学标志物。

关键词： KL-6 胸部HRCT 间质性肺病结缔组织病结缔组织病相关间质性肺病

血管紧张素(1-7)对糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响及机制研究

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中国糖尿病杂志 2021年第4期29卷 293-299页

作者：王瑞娇王巍郭红程海华何军华山西医科大学第二医院内分泌科太原030001

目的探讨血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对DM大鼠IR的影响及可能机制。方法随机选取Wistar大鼠10只为正常对照组(NC),另取24只予高脂饮食喂养联合STZ注射构建DM模型,造模成功的20只大鼠随机分为糖尿病组(DM)、Ang-(1-7)组[Ang-(1-7)300μg/... 详细信息

目的探讨血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对DM大鼠IR的影响及可能机制。方法随机选取Wistar大鼠10只为正常对照组(NC),另取24只予高脂饮食喂养联合STZ注射构建DM模型,造模成功的20只大鼠随机分为糖尿病组(DM)、Ang-(1-7)组[Ang-(1-7)300μg/(kg.d)皮下注射],每组各10只。干预8周后检测FPG、FIns及血管紧张素II(Ang II)水平,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及敏感指数(HOMA-ISI),观察肝脏病理改变,检测肝脏炎症通路及Ins信号转导通路相关因子的mRNA及蛋白表达。结果与NC组比较,DM、Ang-(1-7)组体重、FIns、HOMA-ISI、IRS-2 mRNA、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)mRNA和蛋白、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(Akt-2)mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),FPG、Ang II、HOMA-IR、肝脏指数、IκB激酶β(IKKβ)mRNA和蛋白、核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA、糖原合成酶激酶3α(GSK-3α)mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。与DM组比较,Ang-(1-7)组FPG、Ang II、HOMA-IR、肝脏指数、IKKβmRNA和蛋白、NF-κB mRNA和蛋白、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA、GSK-3αmRNA和蛋白表达降低,FIns、HOMA-ISI、IRS-2 mRNA、PI3K m RNA和蛋白、Akt-2 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。结论Ang-(1-7)可能通过抑制肝脏IKKβ/NF-κB炎症通路及上调IRS-2/PI3K/Akt-2胰岛素信号通路,改善IR。

关键词：血管紧张素(1-7) IκB激酶β/核因子κB 胰岛素受体底物2/磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2 胰岛素抵抗