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牦牛AMH基因特征分析及其在睾丸支持细胞中的功能研究

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牦牛AMH基因特征分析及其在睾丸支持细胞中的功能研究

作者：秦文昌西南民族大学

学位级别：硕士

睾丸支持细胞（Sertoli cell,SC）是生精小管中唯一的体细胞,具有支持生精细胞发育,分泌多种细胞因子,调控精原干细胞分化,维持精子发生的顺利进行,分泌睾丸液等重要功能。抗缪勒氏管激素（Anti-Mullerian Hormone,AMH）是转化生长因子... 详细信息

睾丸支持细胞（Sertoli cell,SC）是生精小管中唯一的体细胞,具有支持生精细胞发育,分泌多种细胞因子,调控精原干细胞分化,维持精子发生的顺利进行,分泌睾丸液等重要功能。抗缪勒氏管激素（Anti-Mullerian Hormone,AMH）是转化生长因子β超家族（Transforming Growth Factor-Beta,TGF-β）的一个二聚体糖蛋白,在睾丸中,AMH由支持细胞分泌。然而,关于牦牛AM H基因及其对牦牛睾丸支持细胞的影响仍未见报道。本研究旨在阐明牦牛AMH基因的特征及其在睾丸支持细胞中的调控作用。首先,本研究通过逆转录PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）技术对牦牛AM H基因进行了c DNA序列克隆,并对其进行了生物信息学分析;其次,通过实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR）技术进行了组织及不同发育时期睾丸中的表达分析;最后,通过脂质体介导的RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术研究了AMH基因在牦牛睾丸支持细胞中的作用。研究结果表明:1)牦牛AMH基因c DNA序列全长为2 017 bp（Gen Bank ***872668）,开放阅读框（Open Reading Frame,ORF）为1 728 bp,5′UTR为211 bp,3′UTR为78 bp,编码氨基酸575个;同源性分析表明,牦牛AMH基因与黄牛的同源性最高;结构预测表明,牦牛AMH蛋白是一个脂溶性亲水蛋白,包含一个AMH＿N蛋白结构域和一个高度保守的TGF-β（AMH＿C）结构域。2)不同组织中的表达分析结果表明,AMH基因在牦牛各类组织中均有表达,其中在睾丸中的表达量最高（P＜0.01）,在卵巢和脾脏中的表达量最低（P＜0.01）。3)不同发育阶段睾丸中的表达分析结果表明,AMH基因在不同发育阶段牦牛睾丸中均有表达,在睾丸中的表达量随着年龄的增长呈先上升后下降的趋势,且在幼年（1岁）时期睾丸中的表达量最高（P＜0.01）。4)干扰AMH基因后,支持细胞的增殖率在48 h、60 h和72 h时间点显著低于阴性对照组（P＜0.05）,相较于对照组,实验组中增殖相关基因PCNA的表达极显著下调（P＜0.01）,促凋亡基因BAX和CASP3的表达极显著上调（P＜0.01）,抗凋亡基因BCL2的表达极显著下调（P＜0.01）,支持细胞发育相关基因ABP、SCF和AMHR2的表达极显著下调（P＜0.01）。综上结果表明,AMH基因促进支持细胞增殖相关基因PCNA的表达,抑制支持细胞凋亡相关基因BAX和CASP3的表达,并调控支持细胞发育相关基因AMHR2、ABP和SCF的表达。本研究结果为进一步研究AMH基因在牦牛睾丸支持细胞中的调控机制提供了依据。

关键词：牦牛 AMH 特征分析组织表达支持细胞

牦牛SIRT3基因的克隆及其在各组织和睾丸不同发育阶段的表达

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畜牧兽医学报 2019年第12期50卷 2431-2439页

作者：王斌佟连鑫秦文昌李键殷实西南民族大学生命科学与技术学院成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室成都610041 西南民族大学现代生物技术国家民委重点实验室成都610041

旨在克隆牦牛沉默蛋白调节因子3(sirtuin 3,SIRT 3)基因,并检测其在牦牛不同组织及不同年龄睾丸中的表达水平,从而为研究SIRT 3在牦牛睾丸发育过程中的作用机制提供试验依据。本研究选取胎牛期(5~6个月)、幼年期(1~2岁)、性成熟期(3~5岁... 详细信息

旨在克隆牦牛沉默蛋白调节因子3(sirtuin 3,SIRT 3)基因,并检测其在牦牛不同组织及不同年龄睾丸中的表达水平,从而为研究SIRT 3在牦牛睾丸发育过程中的作用机制提供试验依据。本研究选取胎牛期(5~6个月)、幼年期(1~2岁)、性成熟期(3~5岁)及老年期(7~9岁)健康雄性牦牛共12头(每组各3头),其中来源于同一年龄阶段的3个组织样本视为生物学重复。采集性成熟期牦牛肝、心、肺、脾、脑、肾、肌肉、小肠、睾丸和大肠以及4个时期的睾丸组织。分别提取各组织的总RNA,并利用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术克隆获得牦牛SIRT 3基因序列,使用相关生物信息学软件预测其编码蛋白质的结构和功能;通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测SIRT 3 mRNA在牦牛各组织及睾丸4个发育阶段的表达水平。结果表明,SIRT 3基因的ORF(open reading frame,开放阅读框)为1002 bp,编码333个氨基酸,与黄牛和绵羊的同源性分别达到99.9%和96.7%,该基因的mRNA在牦牛的各个组织中广泛表达,在脾、睾丸、肺和肌肉中的表达量较高。随年龄增长SIRT 3 mRNA在牦牛睾丸中表达呈现先上升后下降的趋势,其中在性成熟期的表达量最高。本研究为揭示SIRT 3在牦牛生长发育,尤其是睾丸发育过程中的调控提供了一定的基础数据。

关键词：组蛋白去乙酰化 SIRT 3 牦牛组织表达谱睾丸

关于《河北省煤炭学会章程》(修改草案)的说明

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河北煤炭 1998年第2期 65-66页

作者：秦文昌河北煤炭工业局

关于《河北省煤炭学会章程》（修改草案）的说明河北煤炭工业局秦文昌各位理事、各位代表：＊本会现行的章程是１９８５年本会二届理事会第一次全体会议通过的，是符合当时实际的。十多年来，作＊为本会开展活动的准则发挥了很大作用。... 详细信息

关于《河北省煤炭学会章程》（修改草案）的说明河北煤炭工业局秦文昌各位理事、各位代表：＊本会现行的章程是１９８５年本会二届理事会第一次全体会议通过的，是符合当时实际的。十多年来，作＊为本会开展活动的准则发挥了很大作用。＊１９８９年国务院发布了“社会团体...

关键词：煤炭工业文昌修改草案煤矿工业矿业河北省章程中国煤炭学会

牦牛SIRT7基因克隆及其在各组织和不同发情时期卵巢中的表达

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华北农学报 2021年第2期36卷 219-225页

作者：杨柳青殷实秦文昌袁钰洁李键西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室四川成都610041 西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室四川成都610041 西南民族大学现代生物技术国家民委重点实验室四川成都610041

旨在克隆牦牛Sirtuin7(SIRT7)基因,预测其蛋白结构和功能,并检测其mRNA在牦牛各组织和不同发情时期卵巢中的表达。采集成年牦牛(3~5岁)的肝脏、乳腺、大肠、肾等组织及处于卵泡期、红体期、黄体期的卵巢。提取各组织的总RNA,并通过反转... 详细信息

旨在克隆牦牛Sirtuin7(SIRT7)基因,预测其蛋白结构和功能,并检测其mRNA在牦牛各组织和不同发情时期卵巢中的表达。采集成年牦牛(3~5岁)的肝脏、乳腺、大肠、肾等组织及处于卵泡期、红体期、黄体期的卵巢。提取各组织的总RNA,并通过反转录PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR)扩增获得牦牛SIRT7的基因序列。通过不同的生物信息学软件比对SIRT7基因的序列同源性、构建系统进化树以及预测牦牛SIRT7所编码蛋白的结构和功能。采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测SIRT7 mRNA在牦牛各组织和不同发情时期卵巢中的表达。结果显示,牦牛SIRT7基因的开放阅读框(Open reading frame,ORF)大小为1203 bp,编码400个氨基酸。牦牛SIRT7基因的核苷酸序列与黄牛、绵羊、山羊的同源性较高。SIRT7蛋白为亲水性蛋白。二级结构由α-螺旋(47.4%)、β-折叠(29.7%)、β-转角(15.7%)及无规卷曲(7.2%)组成。磷酸化和糖基化分析结果表明,SIRT7蛋白有38个磷酸化位点,24个O-糖基化位点。荧光定量结果为,SIRT7 mRNA在牦牛的肾中表达最高。在牦牛卵巢中,卵泡期、红体期、黄体期SIRT7 mRNA的表达量呈持续升高的趋势,其中黄体期表达量最高。为揭示SIRT7在牦牛生长发育,尤其是卵巢发育过程中的调控作用提供一定的基础数据。

关键词：牦牛 SIRT7 克隆组织表达谱卵巢

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高昌回鹘的私有地权研究

中国边疆史地研究 2024年第2期34卷 75-84,223页

作者：侯文昌甘肃政法大学法学院 730070

吐鲁番所出的回鹘文地权流转契约文书,内容涉及交换、买卖、继承、租佃、典押等,为考察高昌回鹘私有地权的占有形式、流转形式、保护提供了珍贵资料。各类占有形式的地权均有流转,但以单户地权、多户地权为主。流转形式灵活多样,但以买... 详细信息

吐鲁番所出的回鹘文地权流转契约文书,内容涉及交换、买卖、继承、租佃、典押等,为考察高昌回鹘私有地权的占有形式、流转形式、保护提供了珍贵资料。各类占有形式的地权均有流转,但以单户地权、多户地权为主。流转形式灵活多样,但以买卖、租佃为主。高昌回的私有地权受到了习惯法与“官法”的双重保护。

关键词：高昌回鹘私有地权占有流转保护

牦牛HDAC1基因克隆及其在组织和卵母细胞减数分裂过程中的表达研究

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畜牧兽医学报 2019年第10期50卷 1997-2004页

作者：王斌殷实熊显荣秦文昌黄向月李键西南民族大学生命科学与技术学院青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室

旨在克隆牦牛组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC 1)基因,并检测其在牦牛不同组织及卵母细胞减数分裂过程中的表达水平,从而为研究HDAC1在牦牛生殖发育中的作用机制提供理论依据。本试验采用牦牛为研究对象,通过RT-PCR技术... 详细信息

旨在克隆牦牛组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC 1)基因,并检测其在牦牛不同组织及卵母细胞减数分裂过程中的表达水平,从而为研究HDAC1在牦牛生殖发育中的作用机制提供理论依据。本试验采用牦牛为研究对象,通过RT-PCR技术获得牦牛HDAC1基因CDS序列,使用相关生物信息学软件分析其结构和功能,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测HDAC1基因在牦牛脑、心、肌肉、卵巢、肾、脾、小肠、肝、肺和子宫组织中的表达谱及在卵母细胞减数分裂过程中mRNA的表达水平。结果表明,HDAC 1基因开放阅读框为1 302 bp,编码433个氨基酸,与黄牛、山羊和绵羊的同源性较高;HDAC1基因在牦牛的各个组织中均有表达,其中在脾、肾和小肠中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01)。在牦牛减数第一次分裂中期(MⅠ)和减数第二次分裂中期(MⅡ)卵母细胞中,HDAC 1基因的表达水平极显著高于生发泡(germinal vesicle,GV)期(P<0.01)。提示,HDAC 1基因参与牦牛卵母细胞减数分裂过程。本试验为进一步研究HDAC 1基因在高寒、低氧环境下的牦牛生殖繁育中的作用提供了理论依据。

关键词：组蛋白去乙酰化 HDAC1 牦牛卵母细胞减数分裂

牦牛SIRT1基因的克隆及其在不同发育阶段睾丸中的表达

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华北农学报 2020年第4期35卷 203-210页

作者：殷实秦文昌王斌杨柳青周靖雯李键西南民族大学生命科学与技术学院四川成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室四川成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室四川成都610041 西南民族大学现代生物技术国家民委重点实验室四川成都610041

旨在克隆牦牛SIRT1基因,预测SIRT1蛋白的结构和功能,并检测其在牦牛不同组织及不同年龄睾丸中的表达和定位。9只健康雄性牦牛被划分为幼年组(0.5~1岁)、青年组(2~3岁)及成年组(4~5岁)(每组3头),其中来源于同一年龄阶段的3个组织样本视... 详细信息

旨在克隆牦牛SIRT1基因,预测SIRT1蛋白的结构和功能,并检测其在牦牛不同组织及不同年龄睾丸中的表达和定位。9只健康雄性牦牛被划分为幼年组(0.5~1岁)、青年组(2~3岁)及成年组(4~5岁)(每组3头),其中来源于同一年龄阶段的3个组织样本视为生物学重复。采集成年期牦牛肝脏、心脏、脾脏、脑、肌肉、小肠以及3个时期牦牛睾丸组织。分别提取各组织的总RNA并利用反转录PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR)技术克隆获得牦牛SIRT1的基因序列,使用不同的生物信息学软件预测SIRT1基因的序列同源性,以及其编码蛋白质的氨基酸序列、结构和性质;通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测SIRT1基因的mRNA在牦牛各组织及不同发育阶段睾丸中的表达水平,利用色素原位杂交(Chromogenic in situ hybridization,CISH)技术检测SIRT1 mRNA在不同阶段睾丸中的定位,利用Western Blot技术检测SIRT1蛋白在不同阶段睾丸中的表达。结果表明,SIRT1基因的开放阅读框(Open reading frame,ORF)为1866 bp,编码621个氨基酸,其基因序列在哺乳动物中高度保守。结构预测表明,SIRT1是一个脂溶性疏水蛋白,含有一个保守的沉默信息调节子2(Silent information regulator 2,Sir2)结构域。该基因的mRNA在牦牛的各个组织中广泛表达,在睾丸、卵巢和肝脏中的表达较高。在牦牛睾丸中SIRT1的mRNA定位在除精细胞之外的各类细胞中,SIRT1的蛋白在牦牛睾丸中的表达随年龄增长呈现持续下降的趋势,其中在幼年期表达最高。研究结果为揭示SIRT1在牦牛生长发育,尤其是睾丸发育过程中的调控提供了一定的基础数据。

关键词：牦牛组蛋白去乙酰化 SIRT1 基因克隆睾丸

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治理隐患严格执法 003

三个阶段牦牛睾丸发育过程中piRNA的鉴定及分析研究

中国应急管理报

作者：秦文昌

一、严格履行监察职责，不断提高煤矿安全保障能力。一是依法督促煤矿加大瓦斯和水害治理力度。对高瓦斯、煤与瓦斯突出矿井和受水害威胁严重的矿井，提高监察频率；对重大安全隐患紧盯不放，直至整改。督促煤矿深入贯彻防治瓦斯突出和...

一、严格履行监察职责，不断提高煤矿安全保障能力。一是依法督促煤矿加大瓦斯和水害治理力度。对高瓦斯、煤与瓦斯突出矿井和受水害威胁严重的矿井，提高监察频率；对重大安全隐患紧盯不放，直至整改。督促煤矿深入贯彻防治瓦斯突出和防治水规定，提高重大灾害治理水平。二是?

关键词：

来源： cnki报纸评论

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畜牧兽医学报 2019年第11期50卷 2235-2243页

作者：殷实秦文昌王斌周婧雯杨柳青李键西南民族大学生命科学与技术学院成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室成都610041

旨在对不同年龄牦牛睾丸发育过程中的piRNA进行鉴定及分析。本研究选择胎牛期(4~5个月)、幼年期(1岁)及青年期(3岁)健康雄性牦牛共6头(每组各两头),分离其睾丸进行piRNA测序,其中来源于同一年龄的两个组织样本视为生物学重复。分析样本... 详细信息

旨在对不同年龄牦牛睾丸发育过程中的piRNA进行鉴定及分析。本研究选择胎牛期(4~5个月)、幼年期(1岁)及青年期(3岁)健康雄性牦牛共6头(每组各两头),分离其睾丸进行piRNA测序,其中来源于同一年龄的两个组织样本视为生物学重复。分析样本中piRNA的数量、碱基偏好性、来源、功能、piRNA簇的染色体分布及表达水平,并利用荧光定量PCR检测3个阶段牦牛睾丸中PIWI家族(PIWIL1~PIWIL4)的表达。结果表明,幼年期及青年期牦牛睾丸中piRNA的数量均显著多于胎牛阶段piRNA的数量(P<0.01)。牦牛睾丸piRNA 5′端具有明显的尿嘧啶(U)偏好性。大部分的piRNA来自基因间区和基因区之外的其他区域。胎牛睾丸中超过60%的piRNA簇处于低丰度,而幼年期及青年期牦牛睾丸组织中超过70%的piRNA簇均处于高丰度。胎牛期睾丸中PIWIL1及PIWIL4的表达与其他两个时期相比存在显著差异(P<0.05)。GO分析发现,piRNA来源基因的数目在生物学过程、细胞组分和分子功能上排在首位的分别为代谢过程、细胞和结合。结果提示,牦牛睾丸中piRNA的结构、功能和来源具有特异性。胚后阶段(幼年期及青年期)牦牛睾丸piRNA的数量及表达丰度与胚胎期相比有显著差异,这可能是与PIWIL1及PIWIL4在两个阶段表达的差异有关。本研究为进一步探索piRNA调控牦牛睾丸的发育机制,以及改善牦牛的生产性能提供了一定的理论基础。

关键词： piRNA 牦牛睾丸精子发生高通量测序