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Bt Cry1Ac抗性与敏感粉纹夜蛾细胞差异蛋白的基因克隆和功能分析

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Bt Cry1Ac抗性与敏感粉纹夜蛾细胞差异蛋白的基因克隆和功能分析

作者：盖中朝华中师范大学

学位级别：硕士

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)属于芽胞杆菌科,蜡样芽胞杆菌属。其菌体内部可以产生具有杀虫活性的蛋白晶状包涵体,一旦Bt进入昆虫体内,毒素蛋白包涵体可以在中场部位被碱性的肠液所碱解,进一步被蛋白酶水解成具有杀虫活... 详细信息

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)属于芽胞杆菌科,蜡样芽胞杆菌属。其菌体内部可以产生具有杀虫活性的蛋白晶状包涵体,一旦Bt进入昆虫体内,毒素蛋白包涵体可以在中场部位被碱性的肠液所碱解,进一步被蛋白酶水解成具有杀虫活性的毒素蛋白而使虫体死亡。然而,由于Bt制剂长时间大范围的应用,目前已知有数种害虫已经对Bt制剂产生了抗性,现在已知的昆虫对Bt毒素的抗性机理有多种,例如昆虫中肠Bt毒素受体蛋白的改变,昆虫中肠蛋白酶的改变以及毒素引起中场细胞发生凋亡等。除了这些已知机制之外,很可能还存在有其它作用机制。本研究使用对Bt毒素Cr1Ac具有抗性的细胞系R140以及对此毒素敏感的TnH5细胞系,对二者进行差异蛋白质组学研究,通过质谱鉴定差异表达的蛋白。通过软件比对后使用MALDI-TOF/TOF质谱检测了49个差异蛋白点,最终通过数据库检索成功确定的有31个,与敏感细胞系相比,15种蛋白表达上调,16种蛋白表达下调。这些鉴定到的差异蛋白包括细胞骨架蛋白,热激蛋白,细胞信号通路调控蛋白以及能量代谢中所涉及到的一些酶类等。结果显示,在细胞水平上,昆虫对Bt毒素的抗性机理可能涉及到一系列极为复杂的机制。蛋白生成的减少,信号转导的改变,能量代谢的加速以及脂质合成的增多很可能与抗性的产生相关。为进一步研究所鉴定得到的差异表达蛋白与Cry1Ac抗性之间的相关性,本研究中也克隆得到3个拟抗性基因(差异表达基因)：Ras suppressor protein (RSU-1), Fructose1,6-bisphosphate aldolase (FBA),Glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH)全长或部分序列,通过RNA干扰来确定其与抗性之间的相关性。本研究发现,R140细胞与TnH5细胞的自噬水平存在显著差异,因此推测细胞自噬与凋亡类似,很可能也与昆虫Cry1Ac抗性相关。因此,在本研究中,也针对棉铃虫重要自噬相关基因8(Autophagy related gene8, ATG8)开展了基因克隆与生理功能的研究。克隆得到棉铃虫Atg8基因全长mRNA序列;构建含IE2启动子的ATG8真核表达质粒;并且制备了棉铃虫ATG8小鼠多克隆抗体;研究其与细胞器的共定位以及在不同细胞系内的分布情况;通过免疫印迹(Western Blot)技术研究了不同诱导条件下细胞自噬的水平差异。本研究建立了一个在体外环境下研究昆虫Bt抗性机制的新系统,并且本研究结果可以为将来进一步对昆虫Bt抗性机制的研究提供一些新思路和线索。

关键词：差异蛋白质组学苏云金芽孢杆菌 CrylAc抗性 RNA干扰 ATG8

毕赤酵母作为基础研究的新兴模式生物的研究进展

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广西师范大学学报(自然科学版) 2023年

作者：艾聪聪龚国利焦小雨田露盖中朝缑敬轩李慧陕西科技大学食品科学与工程学院陕西科技大学生物与医药学院

毕赤酵母Komagataella phaffii已经被广泛应用于生物技术行业，近年来，其作为模式生物的潜力逐渐受到关注。目前，酿酒酵母是最常用酵母模型，毕赤酵母与酿酒酵母在2.5亿年前分化，相比酿酒酵母，毕赤酵母进化速度较慢，更多保留了古... 详细信息

毕赤酵母Komagataella phaffii已经被广泛应用于生物技术行业，近年来，其作为模式生物的潜力逐渐受到关注。目前，酿酒酵母是最常用酵母模型，毕赤酵母与酿酒酵母在2.5亿年前分化，相比酿酒酵母，毕赤酵母进化速度较慢，更多保留了古代酵母祖先的特征，还具有利用甲醇作为唯一碳源生长的能力，这些特征使其成为研究真核生物分子细胞生物学的有价值模式生物。本文总结了毕赤酵母基础生物学方面的研究成果，包括甲醇同化、过氧化物酶体生成、交配与产孢行为，以及蛋白质分泌、脂质合成和细胞壁形成等过程，旨在全面且系统地综述毕赤酵母作为模式生物的研究进展。

关键词：毕赤酵母甲基营养型酵母酵母遗传学模式生物

生物工程专业课程思政助力创新创业人才培养的思考

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中文科技期刊数据库（全文版）教育科学 2023年第7期 0046-0049页

作者：龚国利盖中朝田露李慧丁小维陕西科技大学生物与医药学院陕西西安710021

创新创业人才的培养已经成为高等院校教育体系中极为重要的部分。近年来,陕西科技大学生物工程专业深入挖掘能够结合思政的专业课程知识点,将思政元素和专业课程有机融合,深化教学改革,构建全新的专业核心课课程思政新模式,助力生物产... 详细信息

创新创业人才的培养已经成为高等院校教育体系中极为重要的部分。近年来,陕西科技大学生物工程专业深入挖掘能够结合思政的专业课程知识点,将思政元素和专业课程有机融合,深化教学改革,构建全新的专业核心课课程思政新模式,助力生物产业创新创业人才的培养,指导学生参加“互联网+”、“挑战杯”、“全国大学生生命科学竞赛”等创新创业大赛获国家级以及省级奖励十余项,并入选国家级一流本科专业建设点。本论文结合作者多年来的教学实践,针对创新创业人才培养工作中思政教育的培养策略进行简要论述,以期为生物工程等专业教学实践提供经验借鉴和帮助。

关键词：生物工程思政教育创新创业人才培养策略分析

工科院校《生命科学导论》课程思政元素的探索与融合

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中文科技期刊数据库（全文版）教育科学 2022年第9期 0169-0171页

作者：龚国利李慧田露盖中朝缑敬轩陕西科技大学生物与医药学院陕西西安710021

如何把思想政治教育贯穿教育教学全过程是高等院校专业教师必须思考的问题。生命科学导论课程是陕西科技大学面向全校本科生的一门公共选修课程,长期以来一直受到各专业学生的欢迎。近年来,这门课程由于受到方兴未艾的生物技术发照潮流... 详细信息

如何把思想政治教育贯穿教育教学全过程是高等院校专业教师必须思考的问题。生命科学导论课程是陕西科技大学面向全校本科生的一门公共选修课程,长期以来一直受到各专业学生的欢迎。近年来,这门课程由于受到方兴未艾的生物技术发照潮流的影响而博得了更多的关注。本文将结合课程团队的工作经验和成果,从德育融合的角度出发,围绕工科院校生命科学导论课程思政元素的探索与融合这一主题提出一些看法、建议,希望能够为工科院校专业课教师将思想政治教育有机融入到专业课教学中提供一点参考。

关键词：工科院校生命科学导论思政元素融合策略

毕赤酵母作为基础研究的新兴模式生物研究进展

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广西师范大学学报（自然科学版） 2024年第3期42卷 17-26页

作者：艾聪聪龚国利焦小雨田露盖中朝缑敬轩李慧陕西科技大学生物与医药学院陕西西安710021 陕西科技大学食品科学与工程学院陕西西安710021

毕赤酵母Komagataella phaffii已经被广泛应用于生物技术行业,近年来,其作为模式生物的潜力逐渐受到关注。目前,酿酒酵母是最常用酵母模型,毕赤酵母与酿酒酵母在2.5亿年前分化,相比酿酒酵母,毕赤酵母进化速度较慢,更多保留了古代酵母祖... 详细信息

毕赤酵母Komagataella phaffii已经被广泛应用于生物技术行业,近年来,其作为模式生物的潜力逐渐受到关注。目前,酿酒酵母是最常用酵母模型,毕赤酵母与酿酒酵母在2.5亿年前分化,相比酿酒酵母,毕赤酵母进化速度较慢,更多保留了古代酵母祖先的特征,还具有利用甲醇作为唯一碳源生长的能力,这些特征使其成为研究真核生物分子细胞生物学的有价值模式生物。本文总结了毕赤酵母基础生物学方面的研究成果,包括甲醇同化、过氧化物酶体生成、交配与产孢行为,以及蛋白质分泌、脂质合成和细胞壁形成等过程,旨在全面且系统地综述毕赤酵母作为模式生物的研究进展。

关键词：毕赤酵母甲基营养型酵母真核生物重组表达模式生物

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抗生素对番茄子叶愈伤组织诱导的影响

西昌学院学报（自然科学版） 2012年第4期26卷 1-3页

作者：胡金朝盖中朝裴冬丽西昌学院四川西昌615013 商丘师范学院河南商丘476000

以番茄子叶为外植体,将其接种在含不同种类和浓度的抗生素培养基上进行培养,研究卡那霉素(Kna)、潮霉素(Hyg)以及羧苄青霉素(Carb)对番茄子叶愈伤组织诱导的影响。研究结果表明:卡那霉素、潮霉素以及羧苄青霉素对番茄子叶愈伤组织的分... 详细信息

以番茄子叶为外植体,将其接种在含不同种类和浓度的抗生素培养基上进行培养,研究卡那霉素(Kna)、潮霉素(Hyg)以及羧苄青霉素(Carb)对番茄子叶愈伤组织诱导的影响。研究结果表明:卡那霉素、潮霉素以及羧苄青霉素对番茄子叶愈伤组织的分化均有一定的抑制作用。随着三种抗生素浓度的提高,番茄子叶愈伤组织的分化频率逐渐降低,当Hyg达到20 mg/L时,完全抑制愈伤组织诱导产生芽;与Hyg相比,Kan的抑制作用相对弱一些,Carb的抑制作用最弱。

关键词：番茄子叶组织培养愈伤组织抗生素

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毕赤酵母表达系统发展现状及其优化策略

未来食品科学 2022年第3期2卷 60-72页

作者：艾聪聪龚国利项炜田露盖中朝缑敬轩陕西科技大学食品与生物工程学院陕西西安710021 通化安睿特生物制药股份有限公司吉林通化134100

毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是目前生物工程中最流行和最标准的一种重组蛋白生产工具。毕赤酵母系统产蛋白质的优势主要在于重组蛋白在内质网中的适当折叠和胞外分泌功能。此外,由于毕赤酵母本身几乎不产生分泌蛋白,因此重组蛋... 详细信息

毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是目前生物工程中最流行和最标准的一种重组蛋白生产工具。毕赤酵母系统产蛋白质的优势主要在于重组蛋白在内质网中的适当折叠和胞外分泌功能。此外,由于毕赤酵母本身几乎不产生分泌蛋白,因此重组蛋白的纯化过程相对于其它系统而言较简便。虽然毕氏酵母表达系统的优势较突出,并适用于生产实践,但由于其目标蛋白产量不高,因此需要对构建好的表达菌株进行一定程度的过程优化。本文综述了毕赤酵母近些年的发展现状和提高其外源蛋白表达量的相关策略及产业化研究进展,并展望了此系统的产业化发展前景,为进一步的研究提供理论依据。

关键词：表达系统毕赤酵母优化重组蛋白生物制药

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舌诊入门到精通

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生产技术效率与化肥施用效率的耦合协调关系研究——以15个油菜生产省(市)为例

2020年

作者：吴中朝

来源：南通市图书馆图书评论

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中国农业资源与区划 2023年第7期44卷 82-96页

作者：唐晶刘成冯中朝华中农业大学经济管理学院湖北武汉430070 湖北省农村发展研究中心武汉430070 湖北省社会科学院农村经济研究所武汉430077

[目的]从农业生产系统均衡协调发展角度考虑,正确认识生产技术效率与化肥施用效率二者间的辩证关系,实现生产技术效率与化肥施用效率的协调发展,是保障我国粮食安全和推进农业绿色发展的有力举措。[方法]文章基于1978—2019年中国15个... 详细信息

[目的]从农业生产系统均衡协调发展角度考虑,正确认识生产技术效率与化肥施用效率二者间的辩证关系,实现生产技术效率与化肥施用效率的协调发展,是保障我国粮食安全和推进农业绿色发展的有力举措。[方法]文章基于1978—2019年中国15个油菜生产省(市)的面板数据,运用基于超越对数生产函数的随机前沿分析模型、耦合协调度模型及空间相关性分析探究中国油菜生产技术效率、化肥施用效率及两者间耦合协调度的时空分异特征。[结果](1)1978—2019年中国油菜生产技术效率保持平稳增长态势,且长江下游产区(0.777)>长江上游产区(0.765)>春油菜产区(0.741)>长江中游产区(0.620);(2)1978—2019年中国油菜化肥施用效率整体呈现波动上升趋势,具有明显时段特征,但整体水平不高,明显低于油菜生产技术效率;(3)1978—2019年中国油菜生产技术效率与化肥施用效率耦合协调度稳步增长,且长江下游产区(0.457)>长江上游产区(0.440)>春油菜产区(0.396)>长江中游产区(0.349);(4)中国油菜生产技术效率存在正向空间相关关系,化肥施用效率不存在空间自相关关系,两者间的耦合协调度仅在部分年份存在正向空间自相关关系。[结论]中国油菜生产技术效率和化肥施用效率的耦合协调度经历了由中度失调至濒临失调的发展阶段,且整体呈现向协调方向发展的趋势。

关键词：生产技术效率化肥施用效率耦合协调度油菜时空差异