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中国免疫学杂志 2000年第6期16卷 303-306页

作者：徐万祥邱德义贾小明申庆祥顾少华倪晓华刘建平牟忠明谢毅上海市计划生育科学研究所上海200032 浙江大学华家池校区生物系杭州310029 复旦大学生命科学学院遗传研究所遗传工程国家重点实验室上海200433 安徽皖南医学院芜湖241001

目的 :通过原核表达系统获得研制ZP疫苗的靶抗原。方法 :用PCR方法删除猪卵透明带 3α(pZP3α)cDNA 5’端非编码区碱基顺序。在扩增的该基因 5’端小片段与双酶切 3’端大片段在ApaI位点相连后 ,通过双酶切位点将读框完整的目的基因定... 详细信息

目的 :通过原核表达系统获得研制ZP疫苗的靶抗原。方法 :用PCR方法删除猪卵透明带 3α(pZP3α)cDNA 5’端非编码区碱基顺序。在扩增的该基因 5’端小片段与双酶切 3’端大片段在ApaI位点相连后 ,通过双酶切位点将读框完整的目的基因定向插入pBV2 2 1表达质粒PRPL 启动子下游的多克隆区。结果 :此重组表达质粒转化宿主菌后经热诱导培养 ,可在SDS PAGE胶上观察到 6 1kD的特异蛋白表达条带 ,而且它在Westernblot鉴定实验中能被抗pZPIgGs识别。结论

关键词：猪ZP3acDNA 大肠杆菌基因表达避孕疫苗

人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCGβ)抗生育/抗癌疫苗的初步研究

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人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCGβ)抗生育/抗癌疫苗的初步研究

hCGb-CTP多聚体-3C3d融合蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达

第九次全国生殖生物学学术研讨会

作者：申庆祥沈卫英蒋俶王健上海市计划生育科学研究所

人绒毛膜促性腺激素(hCG)是一种与妊娠有关的糖蛋白激素。抗hCG疫苗能有效地预防受孕,但不抑制排卵和干扰月经周期,因此在免疫避孕的研究中得到重点支持和发展。Talwar等从天然hCG解离得到β亚基,然后将其与绵羊促黄体生成激素的α亚基(...

人绒毛膜促性腺激素(hCG)是一种与妊娠有关的糖蛋白激素。抗hCG疫苗能有效地预防受孕,但不抑制排卵和干扰月经周期,因此在免疫避孕的研究中得到重点支持和发展。Talwar等从天然hCG解离得到β亚基,然后将其与绵羊促黄体生成激素的α亚基(oLHα)在体外重组为异源二聚体hCGβ/oLHα,再与破伤风类毒素(TT)/或白喉类毒素(DT)偶联制成复合抗原疫苗,目前已完成该疫苗的Ⅱ期临床试验,结果令人满意。近来有研究表明,抗人绒毛膜促性腺激素疫苗不仅具有抗

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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生殖与避孕 2006年第5期26卷 259-264,274页

作者：冯文华石燕喻光荣沈卫英蒋俶申庆祥复旦大学上海医学院上海200032 上海市计划生育科学研究所上海200032

目的:在巴氏毕赤酵母细胞中表达hCGβ-(CTP)n(n=3,4)-3C3d融合蛋白。方法:将(CTP)n(n=3,4)基因与分子佐剂C3d基因的三聚体连接后,克隆入载体pPIC9K得到表达质粒pPIC9Khis6(CTP)n(n=3,4)3C3d,经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序确认后电转... 详细信息

目的:在巴氏毕赤酵母细胞中表达hCGβ-(CTP)n(n=3,4)-3C3d融合蛋白。方法:将(CTP)n(n=3,4)基因与分子佐剂C3d基因的三聚体连接后,克隆入载体pPIC9K得到表达质粒pPIC9Khis6(CTP)n(n=3,4)3C3d,经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序确认后电转入酵母细胞中进行表达。结果:在酵母细胞内检测到目的基因的表达产物,Westernblot结果显示它们的分子量分别为125kD和138kD左右。结论:运用巴氏毕赤酵母表达系统成功表达了hCGβ-(CTP)n(n=3,4)-3C3d融合蛋白,为进一步研究其免疫原性和用作抗肿瘤疫苗奠定了基础。

关键词： hCGβ-CTP多聚体 C3d 毕赤酵母

钙结合蛋白D-9K基因原核表达载体的构建、表达产物纯化及其多克隆抗体的制备

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细胞生物学杂志 2000年第3期22卷 135-140页

作者：柯碧霞王健沈卫英高建民申庆祥福建师范大学生物工程学院福州350007 上海市计划生育科学研究所上海200032

本研究构建了pBV220/CabpD-9k-βhCG表达质粒,在大肠杆菌TG-1中进行表达,得到了CabpD-9k-βhCG融合蛋白。SDS-PAGE分析显示融合蛋白的分子量约为34.5KD。West-ern blot结果表明,融合蛋白与兔抗人hCGIgG特异结合。用纯化的融合蛋白免疫C5... 详细信息

本研究构建了pBV220/CabpD-9k-βhCG表达质粒,在大肠杆菌TG-1中进行表达,得到了CabpD-9k-βhCG融合蛋白。SDS-PAGE分析显示融合蛋白的分子量约为34.5KD。West-ern blot结果表明,融合蛋白与兔抗人hCGIgG特异结合。用纯化的融合蛋白免疫C57BL小鼠,制备了多克隆抗体,这为进一步研究钙结合蛋白D-9k在着床中的功能和子宫内膜Ca^(2+)信号转导奠定了基础。

关键词：钙结合蛋白D-9K基因原核表达载体

Human μ-opioid receptor overexpressed in baculovirus system and its pharmacological characterizations

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中国药理学报 1998年第3期19卷 218-222页

作者：魏强周德和申庆祥王春和陈洁李昌麟裴钢池志强中国科学院上海药物研究所上海细胞生物学研究所

目的：高效表达具有类似哺乳动物特性的人μ阿片受体．方法：人μ阿片受体表达在重组杆状病毒感染的Ｓｆ９昆虫细胞中，用受体结合分析和ｃＡＭＰ分析研究表达产物的药理学特征．结果：［３Ｈ］二丙诺啡及［３Ｈ］羟甲芬太尼（Ｏｈｍ）... 详细信息

目的：高效表达具有类似哺乳动物特性的人μ阿片受体．方法：人μ阿片受体表达在重组杆状病毒感染的Ｓｆ９昆虫细胞中，用受体结合分析和ｃＡＭＰ分析研究表达产物的药理学特征．结果：［３Ｈ］二丙诺啡及［３Ｈ］羟甲芬太尼（Ｏｈｍ）的最大结合能力分别是９．１±０．７，６５２±０．２３ｎｍｏｌ／ｇ蛋白．μ选择性激动剂对［３Ｈ］二丙诺啡或［３Ｈ］Ｏｈｍ与表达受体的结合均有很强的抑制作用，而δ及κ激动剂则均无抑制作用．μ选择性激动剂有效抑制ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ刺激的ｃＡＭＰ聚集，这种作用能被拮抗剂纳洛酮阻断．

关键词：阿片受体杆状病毒放射配位体测定药理学

新鲜和冷冻保存的人羊膜中bFGF mRNA的检测

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眼科新进展 2004年第5期24卷 358-360页

作者：柯碧莲张皙许迅邱孝芝沈卫英申庆祥上海交通大学附属第一人民医院眼科上海200080 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院上海200031 上海市计划生育研究所 200032

目的　研究新鲜和冷冻保存羊膜中是否存在碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA。方法　从新鲜和保存 1周羊膜中用常规的酚、氯仿法抽提总RNA ,RT PCR一步法扩增。PCR产物回收后与PBS质粒同时以EcoRI、HindIII双酶切 ,将酶切产物通过T4DN... 详细信息

目的　研究新鲜和冷冻保存羊膜中是否存在碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA。方法　从新鲜和保存 1周羊膜中用常规的酚、氯仿法抽提总RNA ,RT PCR一步法扩增。PCR产物回收后与PBS质粒同时以EcoRI、HindIII双酶切 ,将酶切产物通过T4DNA连接酶连接 ,重组质粒。将重组质粒导入感受态的DH5α大肠杆菌中 ,筛选阳性菌落抽提质粒后行酶切鉴定 ,选取阳性克隆测序。结果　RT PCR产物电泳 ,可见单一清晰的条带 ,约 4 10bp。重组质粒酶切后见二条带 ,小带约 4 10bp ,与插入片段一致。测序结果表明目的片段与bFGF的序列完全相同。结论　新鲜和冷冻保存的羊膜组织中存在bFGF的mRNA。

关键词：羊膜反转录PCR 碱性成纤维细胞生长因子

大鼠卵巢促黄体激素受体膜外微区(1-341)在昆虫细胞中的表达及其性质的初步研究

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实验生物学报 1995年第4期28卷 381-387页

作者：申庆祥李昌麟沈惠刘海湖黄有国 W.Chen Om P.Bahl 中国科学院上海细胞生物学研究所上海200031 中国科学院生物物理研究所北京100101 美国纽约州立大学布法罗分校生物科学系纽约14260

促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体(LH/hCG receptor)N端膜外微区341个氨基酸残基(简称R341)与激素有很高的亲和力。本文报道编码R341的cDNA在昆虫细胞中的表达及其产物性质的初步研究。SDS-PAGE银染和免疫印迹结果显示,表达产物呈两条... 详细信息

促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体(LH/hCG receptor)N端膜外微区341个氨基酸残基(简称R341)与激素有很高的亲和力。本文报道编码R341的cDNA在昆虫细胞中的表达及其产物性质的初步研究。SDS-PAGE银染和免疫印迹结果显示,表达产物呈两条带:分子量为38.5Kd的主带和分子量为40.0Kd的次带。配基结合免疫印迹和^(125)IhCG结合印迹分析表明,表达产物R341具有与配基专一性结合的生物活力。竞争性配基结合曲线和Scatchard分析结果显示,重组受体R341和配基hCG有较高的亲和力,与hCG反应的Kd为5.68×10^(-10)mol/L。

关键词：促黄体激素 hCG cDNA 昆虫细胞表达

小鼠着床丝氨酸蛋白酶2cDNA的克隆、表达及抗体制备

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生物化学与生物物理学报 2003年第7期35卷 649-654页

作者：黄哲平王健余浩黄萍沈维雄左嘉客杨增明申庆祥上海市计划生育科学研究所国家计划生育药具重点实验室东北农业大学生命科学学院上海市计划生育科学研究所国家计划生育药具重点实验室上海200032 哈尔滨150030

以孕 4 .5天小鼠子宫着床位点总cDNA为模板 ,用PCR方法扩增获得着床丝氨酸蛋白酶 2 (ISP2 )的cDNA。序列分析表明 ,该cDNA序列中的开放阅读框编码 2 79个氨基酸 ,并与文献报道完全相同 ,但在 3′非翻译区多 2 0 4bp ,已登录于GenBank(... 详细信息

以孕 4 .5天小鼠子宫着床位点总cDNA为模板 ,用PCR方法扩增获得着床丝氨酸蛋白酶 2 (ISP2 )的cDNA。序列分析表明 ,该cDNA序列中的开放阅读框编码 2 79个氨基酸 ,并与文献报道完全相同 ,但在 3′非翻译区多 2 0 4bp ,已登录于GenBank(登录号 :AF4 4 2 819)。为了获得重组ISP2 (rISP2 ) ,构建了pGEX 4T 2 ISP2表达质粒 ,进而在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达融合蛋白质GST ISP2 ,经SDS PAGE回收的融合蛋白质用牛凝血酶酶切 ,再经SDS PAGE回收获得rISP2。用rISP2作为免疫原免疫家兔获得ISP2多克隆抗血清。用该抗血清进行免疫组化研究表明 ,ISP2在妊娠早期的小鼠子宫内膜腺上皮有特异性的高表达。

关键词： ISP2 PCR 基因表达抗体制备

hCGβ-CTP37多聚体的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

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中国生物工程杂志 2005年第11期25卷 21-26页

作者：喻光荣蒋俶冯文华沈卫英蒋文珏申庆祥复旦大学上海医学院上海200032 上海市计划生育科学研究所上海200032

目的:研究重组hCGβCTP37(CTP)多聚体编码基因在大肠杆菌BL21中的表达及表达产物多克隆抗体的制备。方法:分别将3、4个CTP编码基因通过串联的方式连接起来组成多聚体编码基因,进而将多聚体基因亚克隆入载体pGEX4T2中获得含目的基因的表... 详细信息

目的:研究重组hCGβCTP37(CTP)多聚体编码基因在大肠杆菌BL21中的表达及表达产物多克隆抗体的制备。方法:分别将3、4个CTP编码基因通过串联的方式连接起来组成多聚体编码基因,进而将多聚体基因亚克隆入载体pGEX4T2中获得含目的基因的表达质粒pGEX4T2(CTP)n(n=3,4)。表达质粒转入大肠杆菌BL21,目的蛋白在IPTG诱导下进行表达。表达产物经谷胱甘肽转硫酶(GST)亲和层析柱纯化、凝血酶酶解去除GST后,获得多肽CTP3和CTP4。将其用于免疫家兔以制备多克隆抗体,并用ELISA法检测抗体滴度。结果:菌株经IPTG诱导后产生了大量可溶性的融合蛋白GSTCTPn(n=3,4),SDSPAGE分析表明融合蛋白GSTCTP3和GSTCTP4的表观分子量分别为38.0kDa和42.2kDa,纯化后的融合蛋白的纯度达到了90%以上;纯化的融合蛋白经牛凝血酶酶解,利用制备型SDSPAGE纯化,回收获得的多肽CTP3和CTP4的纯度均大于80%;将多肽CTP3和CTP4多次免疫家兔后,ELISA检测结果证实产生了滴度较高的多克隆抗体。结论:CTP多聚体能刺激家兔产生特异性抗体,这提示CTP多聚体有可能作为避孕疫苗或肿瘤疫苗的免疫原。

关键词： hCGβ-CTP37 大肠杆菌基因表达抗体